Haupt > südlich-beflecken DNA > > index.php
 |
|---|
Sie müssen registrieren, bevor Sie auf unseren Foren bekanntgeben oder unsere hochentwickelten Funktionen benutzen können. Register Jetzt! Sein freies und schnell!
Bereits registriert? LOGON jetzt unten.
Bereits registriert und vergaß Ihr Kennwort? Klicken unten, zum es wieder herzustellen.
Stellen Sie Verlorenes Kennwort Wieder her
Verbinden Sie jetzt - es ist schnell und frei!
Molekulare Station ist DAS größte Netz der Forscher, der Wissenschaftler und der Wissenschaft Geliebten überall!
Es gibt tatsächlich zwei Sachen, Wissenschaft und Meinung; das ehemalige zeugt Wissen, die letzte Unwissenheit. ~Hippocrates (c460-c.377 BCE) griechischer Arzt.
Molekulare Station Des Copyright-2007
Das südliche Beflecken ist eine Technik, die nach seinem Erfinder und Entwickler, der britische Biologe Edwin M. Southern 1975 benannt wird. Das südliche Beflecken ist eine Technik, die die Abfragung einer spezifischen DNA Reihenfolge (Gen oder anderes) in einer großen, komplizierten Probe von DNA erlaubt (z.B. zellulare DNA).
"vor PCR und billig sequentiell ordnend änderte unsere Ansicht des Universums, das Genetik ist, fasten der südliche Fleck war ein Universalworkhorse. Es gab nicht ein Experiment in der molekularen Genetik, die nicht an irgendeinem Punkt einen südlichen Fleck einsetzte. Es ist noch ein nützliches Hilfsmittel und Sie müssen in ihm auskennen, damit Sie historische Daten deuten können."
Diagramm des südlichen Flecks technique.Figure ist copyright. Wenn Sie es für ein Vortrag- oder Wissenschaftsprojekt verwenden möchten, treten Sie mit uns bitte für Erlaubnis in Verbindung.
In Jobstep 1, wird DNA mit Beschränkung Endonucleases verdaut. High-molecular-weight DNA wird in kleinere Fragmente verdaut.
In Jobstep 2, wird die DNA dann heraus durch Größe durch Elektrophorese auf einem Agarosegel getrennt.
In Jobstep 3, wird ein Blatt der Nylon- oder Nitrozellulosemembrane (purpurrot) auf das Agarosegel in eine Pufferlösung gelegt. Dieses wird das befleckende oder übertragende Stadium betrachtet. Druck wird gleichmäßig am Gel entweder mit Saugen angewendet oder indem man einen Stapel Papiertücher und ein Gewicht auf die Membrane und das Gel plaziert, um sogar Kontakt zwischen Gel und Membrane sicherzustellen. Bufferübertragung durch haarartige Tätigkeit von einer Region des hohen Wasserpotentials auf eine Region des niedrigen Wasserpotentials (normalerweise Filterpapier und Papiergewebe) wird dann verwendet, um die DNA vom Gel auf die Membrane an zu verschieben. Die positiv belastete Membrane (purpurrot) wird normalerweise benutzt, die die DNA mit hoher Affinität an die Membrane durch Ioneninteraktionen zwischen der negativ belasteten DNA und positiv der belasteten Membrane binden läßt.
In Jobstep 4, werden Nitrozellulosemembranen durch Aussetzung zu den hohen Temperaturen gebacken (von °C 60 bis 100). Nylonmembranen werden UVSTRAHLUNG ausgesetzt. Diese Jobsteps werden verwendet, um die permanente und kovalente Querverbindung der DNA sicherzustellen, die in den Bändern zu den Membranen vorhanden ist.
In Jobstep 5, wird die Membrane einer radioaktiven Prüfspitze ausgesetzt. Diese Prüfspitze ist ein einzeln-angeschwemmtes DNA Fragment, das Ihre Reihenfolge des Interesses hat, die Sie entdecken möchten. Diese Prüfspitze wird mit der Membrane ausgebrütet und lassen mit DNA auf der Membrane hybridisieren. Prüfspitzen sind normalerweise radioaktiv, damit sie auf Film entdeckt werden können, gleichwohl neuere Prüfspitzen auch benutzt werden, die wie Leuchtstoff oder chromogene Färbungen inaktiv sind. Nach Hybridation wird überschüssige ungebundene Prüfspitze weg von der Membrane gewaschen und verläßt spezifisch gesprungene Prüfspitze.
In Jobstep 6, wird das Muster der Hybridation durch Sichtbarmachung auf Röntgenstrahlfilm durch Autoradiographie im Kasten radioaktiver oder Leuchtstoffprüfspitzen oder durch Entwicklung der Farbe auf der Membrane entdeckt, wenn eine chromogene Abfragung Methode verwendet wird.
(Anmerkungen für Jobstep 3: Wenn große DNA
Fragmente grösser anwesend sind, als 15 KBS in der Größe sein
können depurinated bis dahin verdünnte HCl Säure vor dem Beflecken,
das die DNA in kleinere Stücke bricht und so erlaubt
leistungsfähigere Übertragung vom Gel auf Membrane. Wenn
alkalische Übergangsmethoden verwendet werden, wird das DNA Gel in
eine alkalische Lösung (Natriumhydroxid gewöhnlich enthalten)
plaziert um die double-stranded DNA zu denaturieren. Die
Denaturierung in einer alkalischen Umgebung stellt für verbesserte
Schwergängigkeit der negativ belasteten DNA zu einer positiv
belasteten Membrane, trennt sie in einzelne DNA Fasern für neuere
Hybridation zur Prüfspitze (sehen Sie unten) und zerstört jede
Rest-RNS zur Verfügung, die in der DNA anwesend noch sein kann.
AUDIO: Hören
Sie zu einer ausführlichen südlichen Fleck-Erklärung! Höflichkeit: Nationales
Menschliches Genom-Forschungsinstitut.
Wie erwähnt, ist der südliche Fleck eine Technik, die verwendet wird, um DNA Reihenfolgen zu kennzeichnen und zu lokalisieren, die zu einem anderen Stück DNA genannt eine Prüfspitze ergänzend sind.
Die Trennung auf einem elektrophoretischen Gel der Reihenfolgen oder der Fragmente genomic oder ergänzender DNA, teilweise verdaut durch Endonucleases, die Fragmente werden dann auf eine Membrane ' befleckt ' und lassen mit einem Besonderen hybridisieren, beschriftet Prüfspitze, zwecks zu entdecken, welche Bänder das Fragment oder das Gen des Interesses enthalten. Südlicher Fleck ist besonders nützlich, wenn man großes Gen rearrangements/deletions und große trinucleotide Wiederholung Expansionen entdeckt.
Ein südlicher Fleck ist eine Methode, die routinemäßig in der molekularen Biologie verwendet wird, um auf das Vorhandensein einer DNA Reihenfolge in einer DNA Probe zu überprüfen. Das südliche Beflecken kombiniert Agarosegelelektrophorese für Größe Trennung von DNA mit Methoden, um die Größe-getrennte DNA auf eine Filtermembrane für Prüfspitze Hybridation zu übertragen. Andere befleckende Methoden (d.h., westlicher Fleck, Nordfleck, südwestlicher Fleck) das ähnliche Grundregeln einsetzen, aber das Verwenden von von RNS oder von von Protein, sind später in der Referenz auf südlichem Namen benannt worden. Da die Technik eponymously benannt wurde, sollte südlicher Fleck gross geschrieben werden, während Nord- und westliche Flecken nicht sollten.
Er wird auch, um das Molekulargewicht eines Beschränkung Fragments festzustellen verwendet und relative Mengen in den unterschiedlichen Proben zu messen.
Flecken sind Techniken für das Übertragen DNA und RNS-DER Proteine auf eine Fördermaschine, also können sie getrennt werden und folgen häufig dem Gebrauch von einer Gelelektrophorese. Der südliche Fleck wird für das Übertragen von von DNA benutzt.
Hybridation der Prüfspitze zu einem spezifischen DNA Fragment auf der Filtermembrane zeigt an, daß dieses Fragment DNA Reihenfolge enthält, die zur Prüfspitze ergänzend ist.
Südliche Flecken werden in einigen Hauptbereichen einschließlich Genentdeckung und -diagramm, Entwicklung und Entwicklung Studien, Diagnose und forensics benutzt.
Unter optimalen Bedingungen entdeckt das südliche Beflecken ~ 0.1 Seite der DNA des Interesses
Um 1 Liter 20X SSC vom Buffer zu bilden, fügen Sie das folgende hinzu:
Für Probleme und das südliche Fehlersuchbeflecken geben Sie ein neues Gewinde bekannt, um es im südlichen befleckenden Forum zu behandeln!
Beschränkung Enzym-Verdauung - alle, die Sie wissen müssen!
Genomic DNA Lokalisierung Protokoll
Verzicht/Bezeichnungen des Services &
Privacy policy& ©2005-2007 molekulares Station.com, alle Rechte
vorbehalten.
Schicken Sie einem Freund diese Seite
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
