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Agarose-Reinigung DNA Fragmente

Molekulare Station Des Copyright-2007

DNA Fragment-Reinigung vom Agarose-Protokoll

1. Lassen Sie DNA auf "niedrige Schmelz" Agarosegel laufen.
2. Für DNA 600bp Fragmente zu 5kb use1%; Für 300- 700bp Agarose des Gebrauches 2%. Wenn Sie laufen müssen, verwenden kleinere Fragmente 2% "Nusieve" + niedriges 1% "schmelzen".
3. Nachdem Bänder sich getrennt haben, machen Sie das Band auf einem UVKASTEN sichtbar (setzen Sie Aussetzung von DNA zu UV herab)
4. Schneiden Sie Band aus (löschen Sie den UVFILTER NICHT auf dem hellen Kasten!).
5. Fügen Sie UL 100 des T.E. Buffers (10mM Tris-HCl pH 7.6, 1mM das EDTA) Band, Zerstampfung, Hitze zu 65oC für ca. hinzu. 5 Minuten, fügen 200l des Phenols, Turbulenz, Hitze 65°C für 3 Min., Turbulenz hinzu.
6. Microfuge 5 Minuten, löschen supernant
7. Fügen Sie 100 L T.E. Phenol, Turbulenz, Hitze 65°C 3 Min. Turbulenz hinzu
8. Microfuge, Pool supernants.
9. Chloroformextrakt (ca. 400 UL), microfuge 3 Minuten.
10. EtOH Niederschlag, 1/10 Vol. 3M Na0Ac, 2.5 Vol. hinzufügend. EtOH.
11. -20°C 1-2+hrs; Drehbeschleunigung 30 Min., trocknen unten, holen oben in verwendbares Vol. 0.1X T.E.

Spitzen für DNA Agarose-Gel-Reinigung

• Stellen Sie die Transport-Belichtungseinheit auf lange UVWELLENLÄNGE ein (oder das Kleinleistungs). Dieses ist eine große Methode, die Zeitmenge und Energie der UVCDna Berührung herabzusetzen. Dieses setzt die UVMUTAGENESE der DNA herab.
• Ordnung weg so viel von Agarose vom Band, wie möglich, ohne DNA zu löschen. Dieses hilft in herabsetzenagaroseverschmutzung, die DNA Reinigung erhöht.
• Wenn Sie erhalten, sind kommerzielle Installationssätze des Problemgebrauches wie spin-columns.There einige ausgezeichnete Installationssätze für das Extrahieren von von DNA, wenn Sie sie sich leisten können. Diese enthalten Installationssätze von Qiagen, vom Sigma und von anderen Firmen.

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