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Bakterielles Genomic DNA Lokalisierung Protokoll

Genomic DNA Lokalisierung vom Bateria Protokoll

Vorbereitung Methode für die Lokalisierung von geneomic DNA vom Bakterium mit Triton Reinigung

• Wachsen Sie einige Kolonien - große scale-15ml Kulturen.
• Ernten Sie die Zellen in ein einzelnes eppendorf Gefäß oder in ein 15 ml Wegwerfgefäß abhängig von dem Datenträger.
• Setzen Sie Tablette mit 300ul STET Buffer erneut aus (900ul).
• Nachdem Sie erneut ausgesetzt haben, fügen Sie 30ul RNase/lysozyme Mischung hinzu (100ul).
• Kochen Sie Tablette für 1 Minute 15 Sekunden (eine Minute 45 Sekunden).
• Spinnen Sie in microfuge für 15 Minuten.
• Nehmen Sie Supernatant- und Phenolextrakt mit STET- gesättigtem Phenol 150ul (500ul).
• Spinnen Sie und nehmen Sie Supernatant. Fügen Sie die Lithiumchlorverbindung 1/10 Datenträgers 4M hinzu (sterilisiert). Lassen Sie auf Eis für 5-10 Minuten sitzen.
• Spinnen Sie und nehmen Sie Supernatant. Fügen Sie gleiches Datenträgerisopropanol hinzu. Funktelegraphie für 5 Minuten.
• Drehbeschleunigung. Keine Tablette ist sichtbar. Nicht, versetzen DNA wird gehaftet an der Seite vollständig herauf Gefäß in Panik.
• Wichtig: Wäsche mit dem 80% Äthanol (95% veranläßt den Rückstand Triton auszufällen)
• Setzen Sie Tablette in 50-200ul erneut aus.
• Lysozym-RNasemischung 10mg/ml Lysozym 1mg/ml Speicher der RNase-(preiswerter Grad des Gebrauches (BMB) anstatt RNase A, die zu kostspielig ist), 50mM Tris-HCl pH8.0 an -20oC in den kleinen Aliquoten. Nicht refreeze, nachdem es aufgetaut hat.
• STET 8% Saccharose 5% Triton X-100 50mM Tris-HCl (pH8.0) 50mM EDTA pH 8.0 Filter entkeimen. Speicher an 4oC