Bioinformatics, Protokolle, DNA RNS Protein Proteomics
Fördern Sie,/Machen Sie Bekannt &
Binden Sie mit uns &
Treten Sie mit uns in Verbindung &
Über uns &
Helfen Sie uns
Haupt > Zelle > transfection > index.php
Haupt > Zelle > transfection > index.php
 |
|---|
Sie müssen registrieren, bevor Sie auf unseren Foren bekanntgeben oder unsere hochentwickelten Funktionen benutzen können. Register Jetzt! Sein freies und schnell!
Bereits registriert? LOGON jetzt unten.
Bereits registriert und vergaß Ihr Kennwort? Klicken unten, zum es wieder herzustellen.
Stellen Sie Verlorenes Kennwort Wieder her
Verbinden Sie jetzt - es ist schnell und frei!
Molekulare Station ist DAS größte Netz der Forscher, der Wissenschaftler und der Wissenschaft Geliebten überall!
Die großen Männer der Wissenschaft sind Oberste Künstler. ~Martin H. Fischer
Diese Transfection Site ist Ihr Portal für alle Sachen, die auf dem transfection der Zellen mit DNA Plasmid oder Vektor, der RNS ob siRNA oder RNAi oder sogar des recombinant Proteins in Verbindung gestanden werden. Wir versehen Sie mit allen Hintergrundinformationen, Protokolle für Zelle transfection, Optimierung und Analyse Jobsteps und Zelle transfection Fehlersuchinformationen, um der entscheidende Experte zu werden!
Transfection beschreibt die Einleitung des Fremdmaterials in eukaryotic Zellen mit einem Virusvektor oder andere Mittel der Übertragung.
Das Bezeichnung transfection für Nichtvirenmethoden wird häufig in der Referenz auf Säugetier- Zellen verwendet, während die Bezeichnung Transformation bevorzugt wird, um Nichtviren-DNA Übertragung im Bakterium und Nichttier in den eukaryotic Zellen wie Pilzen, Algen und Betrieben zu beschreiben.
Transfection der Tierzellen bezieht gewöhnlich mit ein, vorübergehenden Poren oder ' der Bohrungen in der Zelle Plasmamembrane zu öffnen, um das Heben des Materials zu erlauben. Genetisches Material (wie supercoiled Plasmid DNA oder siRNA Konstruieren) oder sogar Proteine wie Antikörper, können sein transfected. Zusätzlich zum electroporation kann transfection durchgeführt werden, indem man ein kationisches Lipid mit dem Material mischt, um Liposome zu produzieren, die mit der Zelle Plasmamembrane fixieren und ihre Ladung nach innen niederlegen.
Die ursprüngliche Bedeutung von transfection war ' Infektion durch Transformation ', d.h. Einleitung von DNA (oder von RNS) von einem Eukaryotevirus oder -bakteriophage in Zellen, und das resultiert in einer Infektion. Weil die Bezeichnung Transformation eine andere Richtung in der Tierzelle Biologie (eine genetische Änderung, langfristige Ausbreitung erlaubend in der Kultur oder im Eigentumserwerb typisch von den Krebszellen) hatte, erwarb das Bezeichnung transfection, für Tierzellen, seine anwesende Bedeutung einer Änderung in den Zelle Eigenschaften, die durch Einleitung von DNA verursacht wurden.
Transfection ist eine Methode, durch die experimentelle DNA in eine kultivierte Säugetier- Zelle gesetzt werden kann. Solche Experimente werden normalerweise mit geklonter DNA durchgeführt, die codierte Befehlsfolgen enthält und Regionen (Förderer, usw.) steuern um zu prüfen ob die DNA ausgedrückt wird. Da die geklonte DNA weitgehend geändert worden sein kann (zum Beispiel, können verbindliche Sites des Proteins auf dem Förderer geändert worden sein oder gelöscht worden sein), wird transfection häufig verwendet, um zu prüfen, ob eine bestimmte Änderung die Funktion eines Gens beeinflußt.
Transfection Diagramm:
Die Fähigkeit synthetisieren RNS im Labor ist kritisch zu vielen Techniken. Radioaktive und nicht-radioaktive RNS-Prüfspitzen werden für viele Protokolle benoetigt, und sie können Kleinin den in-vitroübertragungreaktionen leicht synthetisiert werden, ihren Gebrauch in den Fleckhybridationen und in den Nukleaseschutzproben erlaubend.
In-vitroübertragung benötigt eine gereinigte lineare DNA Schablone, die einen Förderer, Ribonucleotidtriphosphate, ein Buffersystem enthält, das DTT und Magnesium enthält
In-vitroübertragung benötigt eine gereinigte lineare DNA Schablone, die einen Förderer, Ribonucleotidtriphosphate, ein Buffersystem enthält, das DTT und Magnesium enthält
Es gibt verschiedene Methoden des Einführens fremder DNA in eine eukaryotic Zelle. Viele Materialien sind als Fördermaschinen für transfection benutzt worden, das in drei Arten geteilt werden kann: (kationische) Polymer-Plastiken, Liposome und nanoparticles.
Eine der preiswertesten (und wenige zuverlässige) Methoden ist transfection durch das Kalziumphosphat, ursprünglich entdeckt von F. L. Graham und von A. J. van Der Eb in benötigtem 1973[citation ] (sehen Sie auch [ 1 ]). die HEPES-gepufferte salzige Lösung (HeBS) Phosphationen enthalten wird mit einer Kalziumchlorverbindung Lösung kombiniert, welche die DNA enthält, um zu sein-, transfected. Wenn die zwei kombiniert werden, bildet sich ein feiner Niederschlag des positiv belasteten Kalziums und des negativ belasteten Phosphats und bindet die DNA, um zu sein, transfected auf seiner Oberfläche. Die Aufhebung des Niederschlags wird dann den Zellen hinzugefügt, um zu sein transfected (normalerweise eine Zellkultur gewachsen in einem monomolekularen Film). Durch einen Prozeß nicht völlig verstanden, nehmen die Zellen etwas von dem Niederschlag und mit ihm, die DNA auf.
Andere Methoden benutzen in hohem Grade ausgebrittene organische Mittel, sogenannte dendrimers, um die DNA zu binden und sie in die Zelle zu erhalten. Eine sehr leistungsfähige Methode ist die Einbeziehung der DNA, zum zu sein transfected in den Liposomen, d.h. die kleinen, Membrane-gesprungenen Körper, die irgendwie der Struktur einer Zelle ähnlich sind und mit der Zelle Membrane wirklich fixieren können und gibt die DNA in die Zelle frei. Für eukaryotic Zellen wird das gegründete Lipid-Kation transfection gewöhnlich benutzt, weil die Zellen empfindlicher sind.
Eine andere Methode ist der Gebrauch der kationischen Polymer-Plastiken wie Deae-Dextran oder polyethylenimine. Die negativ belastete DNA bindet an das polycation und der Komplex wurde durch die Zelle über endocytosis aufgenommen.
Eine direkte Annäherung an transfection ist die Gengewehr, in der die DNA zu einem nanoparticle eines trägen Körpers verbunden wird (geläufig Gold) der dann direkt in den Kern der Zielzelle "geschossen" wird. DNA kann in Zellen mit Viren als Fördermaschine auch eingeführt werden. In solchen Fällen wird die Technik Virentransduction genannt, und, die Zellen sollen transduced.
Andere Methoden von transfection enthalten nucleofection, electroporation, Hitzeschlag, magnetofection und eigene transfection Reagenzien wie Lipofectamine, Dojindo Hilymax, Fugene, jetPEI, Effectene oder DreamFect.
Für die meisten Anwendungen von transfection, ist es genügend, wenn Gen wird nur vorübergehend ausgedrückt transfected. Da die DNA, die im transfection Prozeß eingeführt wird, normalerweise nicht in das Kerngenom eingesetzt wird, ist die fremde DNA am neueren Stadium verloren, wenn die Zellen Mitosis durchmachen. Wenn es gewünschtes, daß transfected, Gen bleibt wirklich im Genom der Zelle ist und seine Tochterzellen, ein beständiges transfection auftreten müssen.
Um dieses zu vollenden, ist ein anderes Gen Co-transfected, die der Zelle etwas Auswahlvorteil gibt, wie Widerstand in Richtung zu einem bestimmten Giftstoff. Einiges (sehr wenige) von transfected Zellen hat zufällig eingesetzt das fremde genetische Material in ihr Genom. Wenn der Giftstoff, in Richtung zu dem das Gen Co-transfected Widerstand leistet, dann der Zellkultur hinzugefügt wird, nur jene wenigen Zellen mit den fremden Genen, die in ihr Genom eingesetzt werden, können sich stark zu vermehren, während andere Zellen sterben. Nachdem sie diesen Auswahldruck während einiger Zeit, nur angewendet haben, die Zellen mit einem beständigen transfection bleiben und können weiter kultiviert werden.
Ein geläufiges Mittel für beständiges transfection ist Geneticin, alias G418, das ein Giftstoff ist, der durch das Produkt des beständigen Gens des Neomycins neutralisiert werden kann.
In-vitroübertragung benötigt eine gereinigte lineare DNA Schablone, die einen Förderer, Ribonucleotidtriphosphate, ein Buffersystem enthält, das DTT und Magnesium enthält
Sie müssen JETZT REGISTRIEREN , um eine Frage im Transfection Forum bekanntzugeben. LOGON jetzt, wenn Sie bereits registriert haben.
Verzicht/Bezeichnungen des Services &
Privacy policy& ©2005-2007 molekulares Station.com, alle Rechte
vorbehalten.
Schicken Sie einem Freund diese Seite
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
