Zellen-Zerstörung-Methoden-Protokoll

Zellenzerstörung oder zellulare Unterbrechung ist eine Zellenbiologiemethode für die Freisetzung von biologischen Molekülen einschließlich Organellen, Proteine, DNA, RNS und Lipide aus einer Zelle heraus.

Für die meisten Zellen ist milde Osmose normalerweise genug zum lyze die Zellen. Dieses wird getan, indem man die Ionenstärke der umgebenden Lösung senkt und die Zellen veranlaßt zu schwellen und den Impuls, der ihren Inhalt freigibt.

Milde surfactans sind zusätzlich zu den mechanischen Zerstörungmethoden häufig benutzt.

Mechanische oder körperliche Zerstörung-Methoden umfassen:

• mechanische Bewegung
• Druck
• Sonorisierung
• Stickstoffbombe oder Stickstoffimpulszerstörungmethode
• Ultraschall mit kleinen Prüfspitzen

Diese Jobstepps werden geleitet, um sicherzustellen, dass komplett von der Zelle und von seinen zellularen Bestandteilen einschließlich Zusammenbruch der organellar und Kernmembranen sich trennen Sie.

Wegen der hohen Kosten des Wachsens der Zellen, normalerweise nur eine kleine Menge zellulares Material ist vorhanden. Es ist folglich notwendig, leistungsfähig zu sein, wenn man Zellen sicherzustellen auflöst, dass das Maximum des verwendbaren Materials erreicht wird. Häufig werden einige Methoden in der Kombination angewendet, um fast komplette Zerstörung sicherzustellen.

Zellenzerstörung ist für die Extraktion von DNA, von RNS und von Proteinen von den Zellen lebenswichtig. Folglich wird sie in den meisten Zellenbiologietechniken und sogar in den Molekularbiologietechniken benötigt.

Zellenzerstörung wird in seinem Verbrauch begrenzt, während sie die Zellenmembrane benötigt durchbohrt zu werden und den freigegeben zu werden Zelleninhalt. Diese aufgelösten Zellen sterben und können nicht wieder gezüchtet werden oder gewachsen werden.

Es gibt viele Faktoren, zum zu betrachten, welche zu verwenden Zellenzerstörungmethode oder wie man sie leitet.

Datenträger Zellen

Die Menge aufzulösen der Zellen ist ein wichtiger Parameter in der Zellenzerstörung. Wenn Sie nur sehr haben

Wenn nur einige Mikroliter der Probe vorhanden sind, muss Sorgfalt angewendet werden, um Verlust herabzusetzen und Querkontamination zu vermeiden.

Unterbrechung der Zellen, wenn Hunderte oder sogar Tausenden Liter Material in einer Produktionsumgebung verarbeitet werden, stellt eine andere Herausforderung dar. Durchsatz, Leistungsfähigkeit und Reproduzierbarkeit sind Schlüsselfaktoren.

Zahl der Zellen-Proben zu Lyze

Häufig es gibt viele Zellenproben zum lyze. Es gibt viele Ausgaben, zum zu betrachten, wann, dies einschließlich Querverschmutzung der Proben, die Geschwindigkeit der Verarbeitung und die Ausrüstungsreinigung nach jeder Probe tuend aufgelöst wird.

Schwierigkeit der Zellen zu Lyze

Einige Zellen sind ziemlich schwierig aufzulösen. Während die Zerstörungschwierigkeit sich erhöht, wird eine größere Zerstörungkraft oder eine höhere Ionenstärke der Buffer benötigt, um die Zellen leistungsfähig zu stören.

Für schwierigere Zerstörung der Zellenproben wie Hefeproben, gibt es eine steile Zunahme der Verarbeitungsleistung, der Zeit und der Kosten, die benötigt werden.

Für die schwierigsten Proben zum lyze, wie bakteriellen Sporen, benötigen diese die mechanischen Kräfte, die mit den chemischen oder enzymatischen Bemühungen kombiniert werden. Das Problem ist sogar mit mehrfachem und rauere Methoden, normalerweise man erzielt begrenzte Unterbrechungs-Leistungsfähigkeiten.

Leistungsfähigkeit der Zellen-Zerstörung

Abhängig von welchem Teil der Zelle, zerlegen Organell oder Sie Notwendigkeit zu lokalisieren, Überzerstörung kann Ihr gewünschtes Produkt beeinflussen in Bruchteile.

Wenn subzellulare Fraktionierung verwendet wird, ist es wichtiger, eine empfindliche Zerstörung zu haben, zum der intakten subzellularen Organells zu erzielen Bestandteile eines. Offensichtlich erzielen Sie eine niedrigere Leistungsfähigkeit der Zerstörung und folglich fordern mehr Zellen. Um diese Zellenzerstörung processesses einzustufen, werden die Zeit die Zellen zu stören und die Reproduzierbarkeit der Methode wichtigere Faktoren.

Zellen-Zerstörung gegen das lokalisiert zu werden Molekül

Zu bieten ist sehr wichtig, die Zerstörungmethode dem Protein, das Sie lokalisiert benötigen. Wenn es ein Kernprotein ist, interessieren Sie sich wird benötigt, um die Zelle zuerst aufzulösen und die Kernmembrane dann zu lokalisieren. Nachdem die Kernmembrane lokalisiert ist, dann kann man die Kernmembrane auflösen und das Molekül des Interesses freigeben. Diese Methodenlehre verringert die Verschmutzung der Moleküle, die von anderen zellularen Fächern/von Organellen sind.

Außerdem abhängig von Molekül muss die Sorgfalt zum Gebrauch oder nicht zu bestimmten Zerstörunglösungen oder -methoden des Gebrauches angewendet werden. Z.B. wenn Sie versuchen, ein Phosphoprotein zu lokalisieren, das für Phosphatasen empfindlich ist, ist es nicht eine gute Idee, das Phosphoprotein Tausenden Proteasen und Phosphataseenzymen aufzulösen und auszusetzen. Ihr Molekül vor den rauen oder enzymatischen Bedingungen zu schützen ist wichtig. Die Temperatur (niedrige Temperatur der Zerstörung) und der Verbrauch der hemmenden Moleküle (wie Protease- und Phosphatasehemmnisse) ist in diesen Zerstörungfällen wichtig.