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Zellen in einer Nebenkultur weiterzüchten - Zellkultur

Zellkultur

Zellen-Nebenkultur-Protokoll

IN EINER NEBENKULTUR WEITERZÜCHTEN DER ZELLEN

  • Erhalten Sie DMEM Media 4C; Trypsin-20C; BSA-20C;
  • Setzen Sie sich in 36mL von DMEM in konischen Gefäßplastik
  • Fügen Sie 4mL von BSA Media 36mL DMEM hinzu;
  • Erhalten Sie Spritze und Filter;
  • Saugen Sie Media mit Spritze auf.  Fügen Sie Filter hinzu. 
  • Schieben Sie Media durch Filter auf Spritze hinaus.
  • Wiederholen Sie zweimal, um die ganze Datenträger zu erhalten. 
  • Setzen Sie sich in das neue konische Plastikgefäß. 
  • Löschen Sie alte Media, indem Sie in Becher ausgeben; BENUTZEN Sie NICHT SAUGAPPARAT (erhalten Sie Verschmutzung!!)
  • Fügen Sie typsin 3mL Kultur hinzu.  Trypsin mit Zugzellen weg vom Kulturbehälter.
  • Setzen Sie Behälter in Brutkasten.  Minute der Wartezeit 2; Nehmen Sie heraus;  untersuchen Sie Mikroskop. 
  • Versuchen Sie, weniger Büschel zu erhalten.  Einzelnere Zellen.
  • Löschen Sie die meisten von Trypsin, indem Sie in Becher ausgeben.
  • Setzen Sie sich zurück in Brutkasten. Überprüfen Sie häufig.
  • Schlagen Sie Behälter auf Seiten, um Unterseite auf weniger Büscheln zu überprüfen; untersuchen Sie Mikroskop.
  • Wenn viele einzelnen Zellen sehen Sie, entlang zu schwimmen; Groß!
  • Fügen Sie Media größerem Behälter hinzu; 1:5/1:3verdünnung (3-5 Behälter größer).
  • Fügen Sie 10mL (T75) großem Behälter, 5mL (T25) zum kleinen Behälter hinzu.
  • Saugen Sie heraus die meisten (5mL der Zellen von T25). Fügen Sie T75 hinzu.
  • Lassen Sie einige Zellen im kleinen Behälter.  Fügen Sie Media kleinem Behälter hinzu.  Überprüfen Sie innen Mikroskop auf Einzelzellen;  Brüten Sie im Brutkasten 37C aus. 

    • Sehen Sie andere Zelle-Protokolle an unserem Zellen-Biologie-und Zellkultur-Protokoll-Verzeichnis.
     

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