Agarose-Gel-Elektrophorese

Diese Site der Agarose-Gel-Elektrophorese ist Ihr Portal für alle Sachen, die auf der Agarosegel-Elektrophoresetechnik und seiner Analyse in Verbindung gestanden werden. Wir versehen Sie mit allen Hintergrundinformationen, Protokollen, Analysenjobsteps, Sichtbarmachung und Störungssucheinformationen für laufende Agarosegele, damit DNA, RNS oder Protein dem entscheidenden Experten in der Agarosegelelektrophorese steht!

Agarose-Gel-Elektrophorese-Inhaltsverzeichnis

• Was ist Agarose-Gel-Elektrophorese?
• Hintergrund
• Anwendungen
• Materialien
• Buffer
• Systemumstellung
• Lösende Begrenzungen auf Agarose-Gele
  
• Vorbereitung
• Protokoll
• Sichtbarmachung
• Gel-Analyse
• Agarose-Gel-Elektrophorese-Videos
• Andere Agarose-Gel-Elektrophorese-Protokolle
• Störungssuche-Agarose-Gele
• Diskussions-Themen für Agarose-Gel-Elektrophorese
• Erhalten Sie Hilfe auf Ihrem Agarose-Gel-Problem

Was ist Agarose-Gel-Elektrophorese?

Agarosegelelektrophorese ist eine Methode, die in der Biochemie und in der Molekularbiologie angewendet wird, um DNA zu trennen, oder RNS-Moleküle durch Größenjedoch Proteine können auf Agarosegelen auch getrennt werden. Trennung der Moleküle wird erzielt, indem man negativ - belastete Nukleinsäuremoleküle durch eine Agarosematrix in einem elektrischen Feld verschiebt (sehen Sie Elektrophorese). Kürzere Moleküle bewegen sich schneller und migrieren weiter als länger eine.

Anwendungen von Agarose-Gel-Elektrophorese

Systemumstellung in den Agarose-Gelen

Lösende Begrenzungen auf Agarose-Gele

Agarosegele können für die Trennung der DNA-Fragmente, die von 50 niedrigen Paaren bis zu einigen megabases (Millionen Unterseiten) reichen durch Elektrophorese benutzt werden. Häufiger jedoch, wird Agarosegelelektrophorese verwendet, um DNA von PCR und vom Klonen in der Strecke 100bp zu 15kb ungefähr zu trennen. Abläufe sind ungefähr 30 Minuten - 1 Stunde lang.

Kleines DNAs oder RNAs (kleiner als 100bp) werden besser durch Polyacrylamidgele getrennt, gleichwohl 2-3% Agarosegele ausreichend sein können, sogar Fragmente 50bp von den viel größeren Nukleinsäuren zu trennen.

Vor kurzem jedoch, ist es, dass bis ein niedriger Paargrößenunterschied auf einem 3% Agarosegel mit entschlossen extrem sein könnte - niedrigen Leitfähigkeitmedium wie 1 des Lithiummillimeter borsauren Salzes gezeigt worden (Brody JR., Calhoun ES, Gallmeier E, Creavalle SE TD-, Kern (2004). Ultraschnelle hochauflösende Agaroseelektrophorese von DNA und von RNS unter Verwendung der niedrigen-molarity leitenden Media. Biotechniques. 37:598 - 602.).

Tabelle des Agarose-Gel-Prozentsatzes und der leistungsfähigen Strecke der Trennung:

Wie Sie sehen können, dass niedrige Prozentsatzagarosegele für die Trennung der großen DNA-Moleküle am besten sind, während hoch, sind Prozentsatzgele für kleineres DNAs am besten.

DNA-Reinigung mit Agarose-Gel-Extraktion

Wie vor erwähnt, erlaubt Agarosegelelektrophorese die Trennung und folglich die Reinigung von DNA für Klonen. Jedoch benötigt dieses normalerweise niedrige Agarose des hohen Reinheitsgrades Schmelz, wenn die DNA vom Gel extrahiert werden soll.

Agarose-Gel-Elektrophorese-Buffer

Abhängig von der Größe der DNA electrophoresed und die Anwendung, verschiedene Buffer kann für Agaroseelektrophorese verwendet werden. TAE Buffer (oder Tris Azetat EDTA) ist der geläufigste benutzte Agarosegel-Elektrophoresebuffer. TAE hat die niedrigste Dämpfungsfähigkeit der Buffer, gleichwohl TAE die beste Auflösung für größere DNA anbietet. Jedoch benötigt TAE eine Niederspannung und mehr Zeit.

Jedoch ist TBE Buffer (Tris/Borate/EDTA) für kleinere DNA-Fragmente häufig benutzt (IE kleiner als 500bp).

Natriumtetraborat oder SB-Buffer ist ein neuer Buffer, gleichwohl er für lösenden Fragmente größeren Kb als 5 erfolglos ist. Jedoch hat SB Vorteile in seiner niedrigen Leitfähigkeit und erlaubt höhere Spannungen (bis 35 V/cm). Dieses konnte eine kürzere Analysenzeit für Routineelektrophorese gewähren.