Welcome to Molecular Station! Velkommen til Molekylær station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du er nødt til at registrere før du kan skrive indlæg på vores fora eller brug vores avancerede funktioner. Register Now! Tilmeld dig nu! Its Free and Fast! Dens frie og hurtigt!

Already registered? Allerede registreret? Login now below. Login nu nedenfor.

User Name: Bruger Navn:

Password:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Allerede registreret og Har du glemt dit password? Click below to recover it. Klik nedenfor for at genoprette den.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Tilmeld dig nu - det er hurtigt og gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekylær Station er det største netværk af forskere, videnskabsmænd og videnskab kærester overalt!

Recent Forum Posts Nyt Forum Posts

FACS

The FACS Technique De FACS Technique

Resting lymphocytes comprise many functional subpopulations, which are identified and distinguished from each other on the basis of heir differential expression of cell surface proteins, which can be detected using specific antibodies. Resting lymfocytter omfatter mange funktionelle delpopulationer, som er identificeret og adskiller sig fra hinanden på grundlag af arvinger differentierede udtryk for cellens overflade proteiner, som kan afsløres ved hjælp af specifikke antistoffer.

Flow Cytometry Flowcytometri

A powerful tool for defining and quantifying lymphocytes is the flow cytometer, which detects and counts individual cells passing in a stream through a laser beam. Et kraftfuldt værktøj til at definere og kvantificere lymfocytter er flowcytometer, som registrerer og tæller i de enkelte celler passerer i en strøm gennem en laserstråle. A flow cytometer equipped to separate the identified cells is called a fluorescence-activated cell sorter (FACS). Et flowcytometer rustet til at adskille de identificerede celler kaldes en fluorescens-Activated Cell Sorter (FACS). These instruments are used to study the properties of cell subsets identified using monoclonal antibodies to cell-surface proteins. Disse instrumenter er vant til at studere egenskaberne for cellen undersæt identificeret ved hjælp af monoklonale antistoffer til celle-overflade proteiner. Individual cells within a mixed population are first tagged by treatment with specific monoclonal antibodies labeled with fluorescent dyes, or by specific antibodies followed by labeled anti-immunoglobulin antibodies. Individuelle celler inden for en blandet befolkning er først mærkede ved behandling med specifikke monoklonale antistoffer mærket med fluorescerende farvestoffer, eller af specifikke antistoffer efterfulgt af mærket anti-immunglobulin antistoffer. The mixture of labeled cells is then forced with a much arger volume of saline through a nozzle, creating a fine stream of liquid containing cells spaced singly at intervals . Blandingen af mærkede celler er derefter tvunget med en meget arger mængden af saltvand gennem en dyse, som skaber en fin strøm af væske, der indeholder celler linieafstand enkeltvis med mellemrum. As each cell passes through a laser beam it scatters the laser light, and any dye molecules bound to the cell will be excited and will fluoresce. Da hver celle passerer gennem en laserstråle det scatters det laserlys, og enhver farvestof molekyler bundet til cellen vil blive ophidset og fluorescerer.

Sensitive photomultiplier tubes detect both the scattered light, which gives information on the size and granularity of the cell, and the florescence emissions, which give information on the binding of the labeled monoclonal antibodies and therefore on the expression of cell-surface proteins by each cell. Følsomme photomultiplier rør opdage både de spredte lys, som giver oplysninger om størrelsen og granularitetskravene af cellen, og florescence emissioner, som giver oplysninger om binding af mærket monoklonale antistoffer og derfor udtryk for celle-overflade proteiner, som hver celle . In the cell sorter, the signals passed back to the computer are used to generate an electric charge, which is passed from the nozzle through the liquid stream at the precise time that the stream breaks up into droplets, each containing no more than a single cell; droplets containing a charge can then be deflected from the main stream of droplets as they pass between plates of opposite charge, so that positively charged droplets are attracted to a negatively charged plate, and vice versa. I cellen Sorter, signalerne sendes tilbage til computeren bruges til at generere en el-afgift, som er gået fra dysen gennem den flydende strøm på den nøjagtige tid, at streame pauser op i dråber, som hver indeholder ikke mere end en enkelt celle ; Dråber indeholdende en afgift kan derefter blive afledt fra de største strøm af dråber, som de passerer mellem bunde i modsatte afgift, så positivt ladede dråber er tiltrukket af en negativt ladet plade, og vice versa. In this way, specific subpopulations of cells, distinguished by the binding of the labeled antibody, can be purified from a mixed population of cells. På denne måde vil specifikke delpopulationer af celler, der adskiller sig ved binding af mærket antistof, kan renses fra en blandet population af celler. Alternatively, to deplete a population of cells, the same fluorochrome can be used to label different antibodies directed at marker proteins expressed by the various undesired cell types. Alternativt til at udtømme en population af celler, det samme fluorochrome kan bruges til at mærke forskellige antistoffer rettet mod markør-proteiner udtrykt ved de forskellige uønskede celletyper.

Cell Sorting Celle Sortering

The cell sorter can be used to direct labeled cells to a waste channel, retaining only the unlabeled cells. Den Cell Sorter kan bruges til direkte mærkede celler til et spild kanal, bevarer kun de uden etiket celler. When cells are labeled with a single fluorescent antibody, the data from flow cytometer are usually displayed in the form of a histogram of fluorescence intensity vs. cell numbers. Når cellerne er stemplet med en enkelt fluorescerende antistof, data fra flowcytometeret der normalt vises i form af et histogram af fluorescens-intensiteten vs celle numre. If two or more antibodies are used, each coupled to different fluorescent dye, then the data are more usually displayed in he form of a two-dimensional scatter diagram or as a contour diagram, where the fluorescence of one dye-labeled antibody is plotted against that of a second, with the result that a population of cells labeling with one antibody can be further subdivided by its labeling with the second antibody. Hvis to eller flere antistoffer er brugt, hver koblet til forskellige fluorescerende farvestof, så dataene er mere normalt vises i han form af en to-dimensional scatter diagram eller som en kontur diagram, hvor fluorescens af One Dye-mærket antistof er afbildes mod , en anden med det resultat, at en population af celler med etikette med et antistof kan underinddeles ved sin mærkningssoftware med andet antistof. By examining large numbers of cells, flow cytometry can give quantitative data on the percentage of cells bearing different molecules. Ved at undersøge et stort antal celler, flowcytometri kan give kvantitative data om andelen af celler med forskellige molekyler. As the power of FACS technology has grown, progressively more antibodies labeled with distinct fluorescent dyes can be used at the same time. Som magt FACS teknologi er vokset gradvist mere antistoffer mærket med forskellige fluorescerende farvestoffer kan anvendes på samme tid.

Three, four and even five color analyses can now be handled by very powerful machines Tre, fire eller endda fem farver analyser nu kan håndteres af meget kraftige maskiner

FACS Protocols FACS protokoller