Welcome to Molecular Station! Velkommen til Molekylær station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du er nødt til at registrere før du kan skrive indlæg på vores fora eller brug vores avancerede funktioner. Register Now! Tilmeld dig nu! Its Free and Fast! Dens frie og hurtigt!

Already registered? Allerede registreret? Login now below. Login nu nedenfor.

User Name: Bruger Navn:

Password:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Allerede registreret og Har du glemt dit password? Click below to recover it. Klik nedenfor for at genoprette den.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Tilmeld dig nu - det er hurtigt og gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekylær Station er det største netværk af forskere, videnskabsmænd og videnskab kærester overalt!

Recent Forum Posts Nyt Forum Posts

Bookmark Bookmark Site Bookmark Bookmark Site

Agar Plates Bacterial Culture Agar Pladerne Bakteriel Kultur

Information on the Growth of Bacterial Cultures using Agar Culture Plates Oplysninger om vækst af bakteriekulturer bruger Agar Kultur Plader

Table of Contents: Indholdsfortegnelse:

Agar Plate and Agar Media Troubleshooting and Forum Topics Agar plade Agar Media Fejlfinding og Forum Emner

Related Microbiology Articles Relaterede Mikrobiologi artikel

Join the Microbiology Newsletter ! Join the Mikrobiologi Nyhedsbrev!

What is Agar - Definition? Hvad er Agar - begreb?

Agar or agar-agar (from a Malay word meaning " vegetable"), the substance which is used in preparing one kind of solid culture medium for bacteriological work, is a pro duct prepared from various seaweeds found near the Indian Ocean and in Chinese and Japanese waters. Agar eller agar-agar (fra et malajisk ord betyder "vegetabilsk"), det stof der er anvendt ved tilberedningen af en form for fast kultur medie til bakteriologisk arbejde, er et pro ventilationskanal tilberedt fra forskellige tang fundet i nærheden af Det Indiske Ocean og i kinesisk og Japansk farvand. This type of seaweed has several common names, as Ceylon or Jaffna moss, Bengal isinglass, etc. Various species are used for food and the trade is considerable. Denne form for tang har flere fælles navne, som Ceylon eller Jaffna mos, Bengal husblas osv. Forskellige arter, der bruges til fødevarer og handel er betydelige.

Background and History on Microbiology using Agar Nutrient Broth and Plates Baggrund og historie om Mikrobiologi bruger Agar Næringsstof bouillon og plader

Payen, a French chemist -(about 1859), obtained the agar jelly from the seaweed, Gelidium corneum, in the following manner : The seaweed was allowed to stand for some time in a cold dilute solution of hydrochloric acid; the acid was removed by rinsing several times with water, then the seaweed was placed in a cold dilute solution of ammonia; next the ammonia was removed by repeated rinsing with cold water. Payen, en fransk kemiker, - (ca. 1859), fremstillet agaren gelé fra tang, Gelidium corneum, på følgende måde: tang fik lov at stå i nogen tid i en kold fortyndet saltsyre, eddikesyre blev fjernet ved skylning flere gange med vand, da tangen blev anbragt i en kold fortyndet opløsning af ammoniak; næste ammoniak blev fjernet ved gentagen skylning med koldt vand. During this process, the seaweed lost 53% of its weight in mineral salts, coloring matter, and organic constituents. Under denne proces, tang mistet 53% af sin vægt i mineralske salte, farve sag, og organiske bestanddele. The remaining portion was boiled in water, during which process the vegetable jelly was extracted. Den resterende del blev kogt i vand, i hvilken proces de vegetabilske gelé blev udtrukket. The solution so obtained was poured off, leaving the useless sediment behind. Den løsning, således fremkomne blev hældt ud, forlader nytteløs sediment bagefter. This jelly is the same in composition as that existing in the vegetable tissues; it has not been changed chemically, as is collagen in the preparation of gelatin. Denne gelé er den samme sammensætning som det, der findes i vegetabilske væv, det er ikke blevet ændret kemisk, som det er kollagen i forberedelsen af gelatine. The commercial agar is most probably prepared by evaporating this solution to dryness by different means. Den kommercielle agar højst sandsynlig er udarbejdet af inddampningsskål denne løsning til tørhed på forskellig måde.

Agar usually comes into the hands of the bacteriologist as long, slender, grayish-white strips, or as blocks, or more especially in recent years, in the form of a gray-white pow der of European manufacture. Agar normalt kommer i hænderne på bacteriologist så lang, slank, grayish-hvide bånd, eller som blokke, eller mere specielt i de seneste år, i form af en grå-hvid Pow der for europæisk fremstilling.

Agar, in contrast with gelatin, is a carbohydrate, ie, it consists of a combination of carbon, hydrogen and oxygen only. Agar, i modsætning til gelatine, er et kulhydrat, dvs den består af en kombination af kulstof, brint og ilt. Traces of nitrogen are present as impurities. Spor af kvælstof er til stede som urenheder. The above qualitative determinations of its elementary constit uents were made by Payen, by Parumbaru and by Hueppe, who made their determinations on agar from different sources. Ovenstående kvalitative bestemmelser af sine elementære constit uents blev foretaget af Payen ved Parumbaru og ved Hueppe, der tilkendegav deres afgørelser på agar fra forskellige kilder. As far as can be ascertained, its empirical formula has not yet been investigated to any extent. Så vidt det kan konstateres, dens empiriske formel er endnu ikke blevet undersøgt til nogen grad.

Like gelatin, however, agar is a reversible colloid. Ligesom gelatine, dog agar er en reversibel colloid. It soaks up in cold water, dissolves in hot water after a long boiling to a tasteless and odorless clear solution, and solid ifies upon cooling to a more or less opaque jelly. Det soaks op i koldt vand, opløses i varmt vand efter en lang kogning til en smagløs og lugtfri klar opløsning, og fast ifies efter afkøling til en mere eller mindre uigennemskuelig gelé. Its watery solution is neutral or nearly neutral to phenol phthalein; still, a drop or two of twentieth normal sodium hydrate is sufficient to make the pink color perceptible. Dens vandig opløsning er neutral eller næsten neutral til phenol phthalein; stadig en dråbe eller to af tyvende normal natrium hydrat er tilstrækkeligt at gøre den lyserøde farve mærkbart.

The colloidal properties of agar are not destroyed by a long-continued heating at a high temperature, nor by the action of ordinary microorganisms as are those of gelatin. Den kolloid egenskaber agar er ikke ødelagt af en lang fortsat opvarmning på en høj temperatur, eller ved hjælp af almindelige mikroorganismer, som er dem af gelatine. The above properties, however, are influenced and may be wholly impaired by the reaction of the liquid in which the agar is dissolved. De ovennævnte egenskaber, er imidlertid påvirket og kan være helt nedsat ved reaktion af den væske, der agaren er opløst.

The reaction of the liquid, ie, whether it is acid or alkaline, influences the agar as to its solubility, solidity, color, transparency, filterability and amount of condensa tion water. Reaktionen af væske, det vil sige, om det er surt eller alkalisk, påvirker agar med hensyn til dens opløselighed, soliditet, farve, gennemsigtighed, filterability og mængden af condensa tion vand. If agar is dissolved in a liquid of an acidity equivalent to 0.1% HC1, the agar dissolves very readily, filters quickly, the resultant filtrate being a light yellow, transparent, slippery, watery solution which does not solidify upon cooling. Hvis agar opløses i en væske af en surhedsgrad svarende til 0,1% HC1, agar opløses meget let, filtre hurtigt, den resulterende filtratet er en lys gul, gennemsigtig, glatte, vandig opløsning, som ikke er stivnet ved afkøling. If a smaller percentage of hydro chloric acid is used, solidification occurs (below 40 C.) but the jelly will not " stand up " and is therefore useless for agar slant or plate cultures. Hvis en mindre procentdel af vandkraft chloric syre anvendes, solidificering opstår (under 40 C.), men gelé vil ikke "stå op" og er derfor ubrugelige for agar skrå eller plader kulturer. A large amount of con densation water is present also. En stor del af den con densation vand er til stede også.

If agar is dissolved in a weak alkaline or neutral broth, a thick, reddish-brown, viscous liquid is obtained which filters slowly and solidifies quickly at 40 C., to a very solid, opaque, dry jelly, having but little condensation water; it retains its shape well in slants and in plates. Hvis agar opløses i et svagt basisk eller neutral bouillon, en tyk, rødlig-brun, tyktflydende væske er fremstillet som filtre langsomt og fast hurtigt ved 40 C., til en meget solid, uigennemsigtige, tør gelé, der, men lidt kondensvand vand; det bevarer sin form i god slants og plader. Thus the value of the agar as a solid culture medium is raised or lowered according to the cjegree of alkalinity or acidity. Således er værdien af den agar som en fast kultur medie er hæves eller sænkes efter de cjegree af alkalinitet eller aciditet.

It must be noted in addition, however, that when once the solidifying property of agar is destroyed by the presence of an excess of acid in its solution, this property can never be regained by neutralization with alkali; the acid per manently destroys the reversibility of the colloid. Det skal bemærkes endvidere, at når når fast ejendom agar er ødelagt af tilstedeværelsen af et overskud af syre i sin løsning, denne ejendom kan aldrig blive genvundet ved neutralisering med alkali, syre pr manently ødelægger reversibel Det colloid.

The melting-point of agar (of 1.5% in neutral solution) is 97 C. and although its solidifying point is at 40 C., when once it has solidified it will stand up in the thermostat at a temperature of 50 C. For bacteriological purposes, only that form of agar can be used which remains fluid at from 38 to 40 C. Agar which remains fluid only at a temperature above this point would be too hot when in a fluid state for use; the vitality of organisms introduced would be impaired or destroyed by the high temperature. Den smeltende-punkt i agar (fra 1,5% i neutral opløsning) er 97 C. og selv om dens fast punkt er på 40 C., når når den er solidificeret det vil stå op i termostaten ved en temperatur på 50 C. For bakteriologiske formål, skal kun den form for agar kan bruges som stadig væske på fra 38 til 40 C. Agar som forbliver flydende kun på en temperatur over dette punkt ville blive for varm, når de er i en flydende tilstand til brug for vitalitet organismer indført ville være forringet eller ødelagt af den høje temperatur.

Advantages and Disadvantages as Agar as a Nutrient Media Fordele og ulemper Agar som et næringsstof Media

Difficulties are encountered in the preparation of a solid culture medium from agar, due to its slow solubility, viscosity and consequent slow filterability. Vanskeligheder er stødt på i forbindelse med udarbejdelsen af en solid kultur medium end agar på grund af sin langsomme opløselighed, viskositet og deraf følgende langsom filterability. Its solution (digestion) is effected, as mentioned above, by a long heating in a water-bath, steam sterilizer, autoclav, or over a free flame. Dens løsning (fordøjelse) er foretaget, som nævnt ovenfor, af en lang opvarmning i et vandbad, damp sterilizer, autoclav, eller over en fri flamme. The length of time required for complete digestion depends upon three things: The reaction of the liquid in which the agar is dissolved, the per cent content of agar, and the method of dissolving. Den tid er nødvendige for fuldstændig fordøjelse afhænger af tre ting: Den reaktion fra væske, der agaren er opløst, per cent indholdet af agar, og metoden til at opløse. The influence of the reaction of agar solutions has been treated above. Indflydelsen af reaktionen hos agar løsninger er blevet behandlet ovenfor. For general culture use, however, ordinary agar is made +15 Fuller's scale (agar solidifies with difficulty above +30 Fuller's scale). For almindelige kultur brug, dog ordinære agar er lavet +15 Fuller's skala (agar fast vanskeligt ovenfor +30 Fuller's skala).

One per cent agar is much more easily soluble under equal conditions than a higher per cent. Et pct agar er langt mere let opløseligt på lige vilkår end en højere procent. One and one half per cent is the amount used in ordinary agar media, giving a somewhat stiffer and thus more desirable jelly. One og en halv procent er det beløb, der anvendes i almindelige agar medier, der giver en noget hårdere og dermed mere ønskeligt gelé.

Agar is digested most rapidly over a free flame. Agar er fordøjet de fleste hurtigt over en fri flamme. If not heated sufficiently, after the filtration and sterilization of the agar by the intermittent method, a flocculent precip itate frequently appears in the previously clear medium. Hvis ikke opvarmet tilstrækkeligt, efter filtrering og sterilisering af agaren ved intermitterende metode, en flocculent precip lette hyppigt optræder i den tidligere klart medium. This can be made to disappear in most cases by subjecting to the temperature of the autoclav (120 C. 15 Ibs.). Dette kan gøres for at forsvinde i de fleste tilfælde ved at underkaste at temperaturen i autoclav (120 C. 15 IBS.).

Agar for culture media should be entirely clear when liquid, and homogeneously opaque-translucent when solid; it should have a translucence sufficient to allow deep colonies on plates or stab cultures to be observed readily; it should not contain flocculent material, sediment, or pieces of cotton or filter paper, as these hinder typical colony development of microorganisms and, to the inexperienced, may some times be mistaken for colonies. Agar for kultur medier skal være fuldstændig klart, da flydende, og ensartet uigennemsigtig-gennemskinnelige når fast, og det bør have en translucence tilstrækkelig til at tillade dybe kolonier på plader eller stikke kulturer, der skal overholdes let, og det må ikke indeholde flocculent materiale, sediment, eller stykker bomuld eller filtrerpapir, da disse hæmmer typiske koloni udvikling af mikroorganismer og så uerfaren, kan nogle gange være forveksles med kolonier.

In the first methods ever used for making agar culture media, instead of filtering the hot agar through filter paper, absorbent cotton, or asbestos, it was allowed to cool, during which process the sediment settled to the bottom; when solid the sediment was cut off. I første metoder stadig benyttes til fremstilling af agar kultur, medier, i stedet for at filtrere den varme agar gennem filter papir, vat, eller asbest, blev det afkøles, i hvilken proces sedimentet fast på havbunden, når fast sedimentet blev skåret slukket. This method was not desirable, as the clearness of the resultant agar would depend upon the rate of cooling; the slower the cooling, the more completely would sedimentation take place. Denne metode blev ikke ønskeligt, da klarere på den resulterende agar vil afhænge af graden af køling den langsommere afkøling, jo mere fuldstændig vil sedimentering finde sted.

Agar is not a food for microorganisms in general, ie, it is not affected by the digestive enzymes of most bacteria, as is gelatin. Agar er ikke en fødevare for mikroorganismer i almindelighed, dvs det er ikke berørt af fordøjelsesfremmende enzymer fleste bakterier, som er gelatine. However, a few bacteria are known which have the power of liquefying agar, among which are B. gelaticus n. Men et par bakterier er kendt som har beføjelse til flydende agar, heriblandt åre B. gelaticus n. sp. (gran) and Bad. (Gran) og Bad. Nenckii, both of which are found, as would be expected, in sea water. Nenckii, som begge er fundet, som man ville forvente i havvand. This compara tive inertness of agar renders it valuable for the preparation, of solid synthetic media, the value of which may be en hanced by subjecting the commercial agar to natural fermentation during which process any traces of avail able food substances are used up by the microorganisms present. Denne sammenlignende tive inaktive af agar gør det værdifuldt for forberedelse, af fast syntetiske medier, den værdi, som kan da hanced ved at underkaste den kommercielle agar til naturlige gæring, i hvilken proces ethvert spor af resultatløse stand fødevarer stoffer anvendes op af mikroorganismer gave. (Beijerinck.)

Agar is of special use in bacteriological work in which the cultivation of microorganisms must be conducted at a temperature above the melting-point of gelatin. Agar er af særlig anvendelse i bakteriologisk arbejde, hvor dyrkning af mikroorganismer, skal føres på en temperatur over den smeltende-point af gelatine. This feature has made possible the great strides that have been taken in medical bacteriology, as many pathogenic bacteria can be isolated and grown only with difficulty at tempera tures below that of the body. Denne funktion har gjort det muligt for store fremskridt, der er blevet taget i medicinsk bakteriologi, da mange sygdomsfremkaldende bakterier kan isoleres og dyrkes kun med besvær på temperamalerier strukturerne under niveauet i kroppen.

EXERCISE 9. ØVELSE 9. PREPARATION OF NUTRIENT AGAR FORBEREDELSE AF NÆRINGSSTOF AGARNAERINGSSUBSTRAT

Apparatus. Apparatur. 3.5 liter agate-ware pail; 15 gms. 3,5 liter agat-WARE spand; 15 gms. Agar; 10 gms. Agar; 10 gms. Peptone; 5 gms. Pepton 5 gms. Salt; 10 gms. Salt; 10 gms. Egg albumen (or one egg); 500 cc sterile meat infusion; 500 cc tap water; titration apparatus; N/20 NaOH; N/l NaOH; phenol phthalein (indicator); distilled water; large funnel; plaited filter paper; filling funnel; sterile test tubes; sterile liter flask; coarse balances; large gas burner; 1 liter measuring cup; apparatus for steam sterilization. Egg albumin (eller et æg), 500 cc steril kød infusion; 500 cc ledningsvand; titrering apparat; N/20 NaOH N / l NaOH; phenol phthalein (indikator); destilleret vand; stor tragt; flettet filtrerpapir; påfyldning tragt ; Sterile reagensglas; sterile liter maalekolbe; grove balancer store gas-brænder, 1 liter måling Cup og apparater til fremstilling af damp sterilisering.

Method. Metode. 1. In a 3 liter agate ware pail place 15 gms. I en 3 liter agat ware spand sted 15 gms. Of agar in 500 cc of tap water. Af agar i 500 cc ledningsvand.

2. Wash the agar well, separating the shreds and squeez ing it through the hands. Vask agar godt, adskillelse af laser og squeez ING det via hænderne.

3. Decant the dirty water, measuring the amount poured Dekanteres beskidt vand, der måler størrelsen hældes

42

GENERAL MICROBIOLOGY Almen mikrobiologi

off; replace with the same amount of clean tap water. off; erstatte med samme mængde rent vand fra hanen.

Repeat. Gentag.

4. Dissolve over a free flame and boil for five minutes, stirring constantly. Opløs over en fri flamme og koges i fem minutter under konstant omrøring. The solu tion must be entirely free from lumps of agar. Den løsning tion skal være helt fri for klumper af agar.

5. Add 1% Witte's peptone and 0.5% salt to the boiling agar. Tilsæt 1% Witte's pepton og 0,5% salt til kogning agar.

6. To 500 cc of meat in fusion add 10 gms. Til 500 cc af kød i fusion tilføje 10 gms. Of egg al bumen which has been well mixed with 100 cc of tap water. Af ægget al bumen som er blevet godt blandet med 100 cc ledningsvand. (Put the egg albumen in a tumbler and add enough water to form a paste. Stir until smooth and then add the remain ing water. One egg; well beaten, (Sæt ægget æggehvidestof i et krus og tilsæt vand nok til at danne en masse. Omroeres, indtil glatte og tilføj derefter forblive ING vand. Et æg; godt slået,

FIG. Fig. 9. Hot Water Funnel for may be substituted.) Mix all Filtering Agar or Gelatin. Varmt vand Funnel om, kan erstattes.) Bland alle Filtrering agar eller gelatine. Thoroughly Grundigt

7. Pour the melted agar mixture slowly into the meat infusion, stirring constantly. Hæld det smeltede agar blanding langsomt ind i kødet infusion, omrøring konstant. Heat in the autoclav at 120 C. for forty-five minutes or for an hour in flowing steam. Varme i autoclav ved 120 C. for fem og fyrre minutter eller en time i strømmende damp.

Note. The time for this heating may be lengthened to advantage, but never shortened. Den tid for denne opvarmning kan blive forlænget til fordel, men aldrig forkortes. If agar has not been heated sufficiently before filtration, a flocculent precipitate will form in the tubes upon heating in flowing steam. Hvis agar ikke har været opvarmet tilstrækkeligt før filtrering, en flocculent bundfald vil formularen i rør ved opvarmning i strømmende damp. In most cases this may be caused to disappear by heating for a short time in the autoclav at 15 Ibs. I de fleste tilfælde kan dette være årsag til at forsvinde ved opvarmning i en kort periode i autoclav ved 15 IBS.

8. Titrate with N/20 NaOH. Der titreres med N/20 NaOH.

9. Adjust the reaction of the medium to +15 with normal NaOH or normal HC1. Juster reaktion på mellemlang til +15 med normal NaOH eller normal HC1. Retitrate and readjust the reaction if necessary. Retitrate og justere reaktion hvis det er nødvendigt.

10. Counterpoise and note the weight. Counterpoise og bemærk vægt.

11. Boil fifteen minutes over a free flame, stirring con stantly, Kog femten minutter over en fri flamme, omrøring con stantly,

DUNHAM'S PEPTONE SOLUTION 43 DUNHAM'S pepton LØSNING 43

12. Counterpoise and make up any loss in weight with boiling distilled water. Counterpoise og kompensere for eventuelle tab i vægt med kogende vand.

13. Filter boiling hot through plaited filter paper just previously washed with boiling water. Filter kogende varmt gennem flettet filtrerpapir bare tidligere vaskes med kogende vand. Pass the filtrate through the same paper until clear. Pass filtratet gennem samme papir, indtil klar.

14. Fill 60 to 70 sterile test tubes, using approximately 8 cc of the medium for each tube. Udfyld 60 til 70 sterile reagensglas, med omkring 8 cc af mediet for hver tube.

15. Heat in flowing steam twenty minutes on three suc cessive days. Varm i strømmende damp tyve minutter i tre slags cessive dage.

16. At the end of the final heating, place the tubes of agar in an inclined position to solidify (do not allow the medium to touch the plug) so that a large surface is pre sented for the cultivation of microorganisms. Ved afslutningen af den sidste opvarmning, place de rør af agar i en tilbøjelig stand til at størkne (ikke tillader mellemlang til touch stikket), således at en stor overflade er præ senterede for dyrkning af mikroorganismer. These are called agar slants. Disse kaldes agar slants.

Note. If agar tubes are to be used only for agar slants, less of the medium is needed in the tube than when they are to be used for plating. Hvis agar-rør er kun anvendt til agar slants, mindre af mediet er behov for i glasset, end når de skal bruges til plettering.

17. To sterilize a large flask of agar, heat for thirty minutes on four successive days. For at sterilisere en stor kolbe af agar, varme i tredive minutter på fire på hinanden følgende dage.

References for Agar Bacterial Culture Henvisninger til Agar Bakteriel Kultur

SMITH, ERWIN F.: Bacteria in Relation to Plant Diseases. SMITH, Erwin F.: Bakterier i Tilknytning til plantesygdomme. Vol. Bind. I, Jeg,

pp. 31-36. Several illustrations. Flere illustrationer. SCHULTZ, NK: Zur Frage von der Bereitung einiger Nahrsubstrate. Schultz, NK: Zur Frage von der Bereitung einiger Nahrsubstrate.

Cent. F. Bakt. F. Bakt. I. Orig., Bd. I. Orig., Bd. 10, 1891, p. 10, 1891, s. 57.