Welcome to Molecular Station! Velkommen til Molekylær station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Du er nødt til at registrere før du kan skrive indlæg på vores fora eller brug vores avancerede funktioner. Register Now! Tilmeld dig nu! Its Free and Fast! Dens frie og hurtigt!

Already registered? Allerede registreret? Login now below. Login nu nedenfor.

User Name: Bruger Navn:

Password:

Remember Me? Remember Me?

Already registered and Forgot your password? Allerede registreret og Har du glemt dit password? Click below to recover it. Klik nedenfor for at genoprette den.

Recover Lost Password Recover Lost Password

Join now - it's fast and free! Tilmeld dig nu - det er hurtigt og gratis!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekylær Station er det største netværk af forskere, videnskabsmænd og videnskab kærester overalt!

Recent Forum Posts Nyt Forum Posts

Bookmark Bookmark Site Bookmark Bookmark Site

Mycoplasma Contamination | Cell Culture Mycoplasma forurening | cellekultur

We include here for cell culture labs, information on mycoplasma contaminations and the latest mycoplasma forum discussions for all your contamination questions and discussions. Vi inkluderer her for cellekultur Labs, oplysninger om Mycoplasma forureningsperioder og de seneste Mycoplasma forum diskussioner for alle dine forurening spørgsmål og diskussioner.

Mycoplasma Background Mycoplasma Baggrund

Mycoplasmas are a genus of bacteria that lack a cell wall. Mykoplasmata er en slægt af bakterier, som mangler en celle væg. Due to a lack of a cell wall, they are resistant to many antibiotics including penicillin or other beta-lactam antibiotics that target cell wall synthesis. På grund af manglen på en celle væg, de er resistente over for mange antibiotika, herunder penicillin eller andre beta-lactam antibiotika, at målet cellevæg syntese.

Mycoplasma are either parasitic or saprophytic. Mycoplasma er enten parasitære eller saprophytic. Several Mycoplasma are disease-causing in humans, including M. pneumoniae, which is an important cause of atypical pneumonia and other respiratory disorders, and M. genitalium, which is believed to be involved in pelvic inflammatory diseases. Adskillige Mycoplasma er sygdomsfremkaldende hos mennesker, herunder M. pneumoniae, som er en vigtig årsag til atypisk lungebetændelse og andre respiratoriske lidelser, og M. genitalium, som menes at være involveret i pelvic inflammatoriske sygdomme. They may cause or contribute to some cancers. De kan forårsage eller bidrage til nogle kræftformer.

Genus Mycoplasma Slægt Mycoplasma

The genus Mycoplasma is one of several genera within the class Mollicutes. Slægten Mycoplasma er en af flere forskellige slægter inden for den klasse Mollicutes. Mollicutes are bacteria which have small genomes, lack a cell wall and have a low GC-content (18-40 %). Mollicutes er bakterier, som har små genomer, manglende en cellevæg og har en lav GC-indhold (18-40%).

There are over 100 recognized species of the genus Mycoplasma. Der er over 100 anerkendte arter af slægten Mycoplasma. Their genome size ranges from 0.58 1.38 megabase-pairs. Deres genom størrelse svinger fra 0,58 1,38 megabyte-par. Mollicutes are parasites or commensals of humans, animals (including insects), and plants; the genus Mycoplasma is by definition restricted to vertebrate hosts. Mollicutes er parasitter eller kommensale af mennesker, dyr (også insekter) og planter; slægten Mycoplasma er per definition begrænset til hvirveldyr værter. Cholesterol is required for the growth of species of the genus Mycoplasma as well as certain other genera of mollicutes. Kolesterol er nødvendig for væksten af arter af slægten Mycoplasma samt visse andre slægter af mollicutes. Their optimum growth temperature is often the temperature of their host if warmbodied (eg 37 degrees Celsius in humans) or ambient temperature if the host is unable to regulate its own internal temperature. Deres optimal vækst temperaturen ofte er temperaturen af deres vært, hvis warmbodied (f.eks 37 grader Celsius i mennesker) eller omgivende temperatur, hvis værten ikke er i stand til at regulere sine egne interne temperatur. Analysis of 16S ribosomal RNA sequences as well as gene content strongly suggest that the mollicutes, including the mycoplasmas, are closely related to either the Lactobacillus or the Clostridium branch of the phylogenetic tree (Firmicutes sensu stricto). Analyse af 16S ribosomale RNA-sekvenser, såvel som genet indhold kraftigt tyder på, at mollicutes, herunder mykoplasmata, er tæt knyttet til enten Lactobacillus eller Clostridium gren af den phylogenetic tree (Firmicutes snæver forstand).

Cell Lines and Mycoplasmas Cellelinjer og mykoplasmata

In cell cultures, mycoplasmas may induce cellular changes, including chromosome aborations, changes in metabolism and cell growth. I cellekulturer, mykoplasmata kan fremkalde cellulære ændringer, herunder kromosom aborations, ændringer i stofskiftet og cellernes vækst. Severe mycoplasma infections may destroy a cell line or render expensive or precious cell lines useless. Svær Mycoplasma infektioner kan ødelægge en cellelinje eller gøre dyre eller ædle cellelinjer nytteløs.

Cell Culture Contamination with Mycoplasma Cellekultur Kontaminering med Mycoplasma

Mycoplasmas are often found in research laboratories as contaminants in cell culture. Mykoplasmata er ofte fundet i forskningslaboratorier som forureninger i celle kultur. Mycoplasmal cell culture contamination occurs due to contamination from individuals or contaminated cell culture medium ingredients. Mycoplasmal cellekultur forureningen opstår som følge af forurening fra enkeltpersoner eller smittet cellekulturvaeske ingredienser.

Mycoplasma Detection Methods Mycoplasma Påvisningsmetoder

Mycoplasma cells are usually smaller than 1 µm and therefore quite difficult to detect with conventional microscopy methods. Mycoplasma celler er som regel mindre end 1 μ m og derfor meget vanskeligt at opdage med konventionel mikroskopi metoder. Detection techniques include: Detektionsteknikker omfatte:

• PCR
• Real-time PCR Real-time PCR
• Plating on sensitive Agar Plating om følsomme Agar
• DNA stains including DAPI or or Hoescht Stain DNA pletter herunder DAPI eller eller Hoescht Stain

Hoechst Stain Mycoplasma Contamination Detection Protocol Hoechst Stain Mycoplasma Kontaminering Detection protokol

A Hoechst (Sigma, catalog #:H6024) staining method for Mycoplasma: En Hoechst (Sigma, catalog #: H6024) farvning metode til Mycoplasma:

1. For Adherent cells, place a sterile cover glass in petri dish. For vedhængende celler, sted et sterilt dække glas i petriskålen. Add 2-3 drops of cell suspension in the middle of coverglass (depending on the growth rate of your cells). Der tilsættes 2-3 dråber cellesuspension i midten af coverglass (afhængig af væksten i dine celler).
2. Then carefully add 2-3 ml of medium without disturbing the cells. Så forsigtigt tilføje 2-3 ml medium uden at forstyrre celler. Grow the cells until they are 50 -70% confluent. Grow de celler, indtil de er 50 -70% sammenflydende.

Fixing Cells: Fastsættelse celler:

1. Prepare cell Fixative which is a mix fo 3:1 Methanol : glacial acetic acid (M:AA). Forbered celle fikseringsmiddel, der er en blanding af 3:1 Methanol: iskold eddikesyre (M: AA). Make sure you prepare this fresh before use. Husk at forberede denne frisk før brugen.
2. Discard medium from growing cells. Kassér medium end voksende celler. Add 2 ml of the Methanol : glacial acetic acid M:AA solution dropwise onto the side of the plate (not directly onto the cells). Tilsæt 2 ml af Methanol: iskold eddikesyre M: AA løsning dropwise på den side af pladen (ikke direkte på celler). Swirl the plate and discard solution. Hvirvel pladen og skille løsning.
3. Add 2 ml of M:AA, swirl and leave on for 2-3 minutes at room temperature. Tilsæt 2 ml M: AA, hvirvel og overlade den til 2-3 minutter ved stuetemperatur.
4. Discard M: AA solution and rinse with water Kassér M: AA løsning og skylles med vand
5. Leave to air dry (you can keep the plate until you are ready to stain) Hoecht stain (cat# 33258 from Sigma) stock concentration = 0.1 mg/ml in water You can filter sterilize at this stage using a 0.2uM filter Wrap container in aluminium foil Store at 4 oC Working solution Prepare fresh each time as necessary Make 1:1000 dilution (0.1 µg/ml) of stock in water Orlov til luft tørre (du kan holde pladen, indtil du er klar til at farve) Hoecht pletten (kat # 33258 fra Sigma) bestand koncentration = 0,1 mg / ml i vand Du kan filtrere sterilisere på nuværende tidspunkt bruger en 0.2uM filter Ombryd beholder i aluminiumsfolie Opbevares ved 4 oC Working løsning laves frisk hver gang det er nødvendigt Foretag 1:1000 fortynding (0,1 μ g / ml) af bestanden i vand

Staining Cells: Farvning celler:

1. Add enough Hoechst stain to cover the entire cover slip (use 1-2ml for a small Petri dish). Tilføj nok Hoechst pletten til at dække hele dække skridsikker (brug 1-2ml for en lille petriskål).
2. Leave the stain on for 45 minutes - 1 hour (in the dark). Lad plet på i 45 minutter - 1 time (i mørke).
3. Rinse well with water. Skyl godt med vand.
4. Mount on a microscope slide (mountant mix: 22 mM Citric Acid; 55.6 mM disodium phosphate; 50% glycerol, pH mix to 5.5) place a drop or two on cover slip (cells up) and place cover slip (cells down) on slide. Mount om et mikroskop slide (mountant mix: 22 mm Citronsyre; 55,6 mM dinatriumphosphat, 50% glycerol, pH-mix til 5.5) anbringe en dråbe eller to om dækning skridsikker (celler) og sted dække skridsikker (celler ned) på dias .
5. Visualise under fluorescence microscope Visualiseres under fluorescens mikroskop

Note: store Hoechst stain at 4oC at least, or aliquot into the freezer for long-term storage. Bemærk: Opbevar Hoechst pletter på 4oC i det mindste, eller alikvot i fryseren for langsigtet opbevaring.