home > protein > protein-purification > index.php home> bílkoviny> protein-čištění> index.php
 |
|---|
Copyright 2006 Molecular Station Copyright 2006 Molekulární stanice
Protein purification is vital in the characterisation of your protein of interest. Protein je životně důležitý pro čištění v charakterizaci bílkovin na Váš zájem. Purification of your protein allows one to study the function of the protein, and its enzymatic activity. Čištění Vašeho bílkovin umožňuje jedné studovat funkce bílkovin, a jeho enzymatické aktivity. Stuctural information from the protein can also be obtained from purified proteins including NMR, 3-D information such as protein crystallization. Stuctural informace z bílkovin lze rovněž získat od vyčištěné proteiny včetně NMR, 3-D informací, jako jsou bílkoviny krystalizace.
So how does one go about purifying a protein? Tak, jak se najednou o očišťování proteinu?
Proteins can readily be visualized and differentiated by electrophoresis methods.ÿ Theses gel techniques can also be used to obtain small quantities (micrograms) of purified polypeptides.ÿ However, they do not provide large amounts of purified proteins in their native state.ÿ Substantial quantities of purified proteins, of the order of many milligrams, are needed to elucidate fully their three-dimensional structure and their mechanism of action.ÿ Several thousand proteins have been purified in active form on the basis of such characteristics as size, solubility, charge and specific binding affinity.ÿ At each step in purification, the preparation is assayed for a distinctive property of the protein of interest (eg enzymatic activity) to assess the efficacy of the procedure. Proteiny mohou být snadno a zviditelní se liší podle metody elektroforézy. Teze gel techniky mohou být rovněž použita k získání malého množství (mikrogramů) vyčištěné polypeptidů. Ty však neposkytují velké množství vyčištěné bílkovin v jejich nativním stavu. Značná množství bílkovin čištěný , V řádu mnoha miligramů, jsou potřebné pro objasnění plně jejich tří-dimenzionální strukturu a mechanismus jejich účinku. Několik tisíc proteinů byly vyčištěné v aktivní podobě na základě takové vlastnosti, jako velikost, rozpustnost, poplatky a konkrétní závazné afinitu. Na každém kroku na čištění, přípravu je stanoven obsah na charakteristické vlastnosti bílkovin zájmů (např. enzymatické aktivity) k posouzení účinnosti řízení.
Proteins can be separated from small molecules by dialysis through a semi-permeable membrane, such as cellulose membrane with pores.ÿ Molecules having dimensions significantly greater than the pore diameter are retained inside the dialysis bag, wwhereas smaller molecules and ions traverse the pores of such a membrane and emerge in the dialysis outside the bag. Proteiny mohou být odděleny od malých molekul, které potřebují dialýzu prostřednictvím semi-propustné membrány, jako je celulóza s membránou pórů. Molekul s rozměry výrazně vyšší, než je průměr pórů jsou uchovávány uvnitř vaku dialýzu, wwhereas menších molekul a iontů traverz na pórů takové membránou a objevit v dialýzu mimo vak.
More discriminating separation on the basis of size can be achieved by the technique of gel-filtration chromatography.ÿ The sample is applied to the top of the column consisting of porous beads made of an insoluble but highly hydrated polymer such as dextran or agarose (which are carbohydrates) or polyacrylamide.ÿ Sephadex, Sepharose, and Bio-gel are commonly used commercial preparations of these beads, which are typically 100 micrometers in diameter.ÿ Small molecules can enter these beads but large ones cannot.ÿ The result is that small molecules are distributed both in the aqueous solution inside the beads and between them, whereas large molecules are located only in the solution between the beads.ÿ Large molecules flow more rapidly through this column and emerge first, because a smaller volume is accessible to them.ÿ It should be noted that the order of emergence of molecules from a column of porous beads is the reverse of the order in gel electrophoresis, in which a continuous polymer framework impedes the movement of large molecules.ÿ Much larger quantities of protein can be separated by gel filtration chromatography than by gel electrophoresis but at the price of lower resolution. Více diskriminační separace na základě velikosti lze dosáhnout technikou gel-filtrační chromatografie. Vzorek je použit na horní straně kolona sestávající z porézních perličky vyrobenými z nerozpustné, ale vysoce hydratované polymeru, například dextran nebo agarózy (které jsou sacharidy) nebo polyakrylamidovém. Sephadex, Sepharose, a Bio-Gel jsou běžně užívaných komerčních přípravků na tyto korálky, které jsou obvykle 100 mikrometrů v průměru. malých molekul lze zadat tyto korálky, ale velké ne. Výsledkem je, že malé molekuly jsou distribuovány jak ve vodném roztoku uvnitř korálky a mezi nimi, zatímco velké molekuly jsou umístěny pouze v roztoku mezi korálky. velkých molekul tok rychleji prostřednictvím tohoto sloupce a objevit jako první, protože menší objem je jim přístupné. Je třeba poznamenat, že pořadí vzniku molekuly z kolony z porézních perel je zadní straně pořadí, v gelu, elektroforéza, při které se na průběžné polymeru rámci brání pohybu velkých molekul. Daleko větší množství bílkovin může být odděleny gel filtrační chromatografie než v gelu elektroforéza, ale za cenu nižšího rozlišení.
The solubility of most proteins is lowered at high salt concentrations.ÿ This effect, called salting out, is very useful, though not well understood.ÿ The dependence of solubility on salt concentration differs from one protein to another.ÿ Hence salting out can be used to fractionate proteins.ÿ Salting out is also useful for concentrating dilute solutions of proteins. Na rozpustnost nejvíce bílkoviny je snížena na vysokou koncentrací soli. Tento jev, tzv. solení ven, je velmi užitečné, když nejsou dobře srozumitelná. Závislost rozpustnosti na koncentraci soli se liší od jednoho proteinu na druhý. Solení Proto může být použita k destilovat proteiny. Solení se je také užitečné pro soustředění zředěné roztoky proteinů.
Copyright 2006 Molecular Station Copyright 2006 Molekulární stanice
Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | ©2005-2007 Molecular Station.com, All rights reserved. Disclaimer / Podmínky poskytování služeb | Ochrana soukromí | © 2005-2007 molekulární Station.com, Všechna práva vyhrazena.
Send this page to a friend Pošlete tuto stránku svému příteli
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
