Welcome to Molecular Station! Vítejte na molekulární Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musíte se registrovat, než budete moci odeslat na naše fóra, nebo využít naše moderní prvky. Register Now! Zaregistrujte se nyní! Its Free and Fast! Jeho svobodný a Fast!

Already registered? Už jste se zaregistroval? Login now below. Přihlášení nyní níže.

User Name: Uživatelské jméno:

Password: Heslo:

Remember Me? Zapamatovat si?

Already registered and Forgot your password? Už jste se zaregistroval a Zapomněli jste heslo? Click below to recover it. Klikněte níže k zpětnému to.

Recover Lost Password Získat zpět ztracené heslo

Join now - it's fast and free! Připojte se nyní - je to rychlé a zdarma!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekulární stanice je největší síť výzkumných pracovníků, vědců a vědy milovníky kdekoliv!

Recent Forum Posts Nový fóru

Protein Protocols Bílkoviny protokoly

Protein Encyclopedia Bílkoviny Encyklopedie

Protein Bioinformatics Bílkoviny Bioinformatika

Protein Science Forum Protein Science fórum

Protein Blog Bílkoviny Blog

DNA News DNA Novinky

Lowry Protein Assay Protocol Lowry Bílkoviny Obsah protokolu

Protein Concentration Determination by the Lowry Prtoein Assay Protocol Stanovení koncentrace bílkovin v Lowry Prtoein Puncovní protokolu

Materials Materiály

1. Complex-forming reagent: Prepare immediately before use by mixing the following stock solutions in the proportion 100:1:1 (by vol), respectively: Komplexní-tvořící činidlo: Připravte bezprostředně před použitím smícháním následujících skladem řešení v poměru 100:1:1 (objemově), v tomto pořadí:
Solution A: 2% (w/v) Na2CO3 in distilled water. Roztok A: 2% (w / v) Na2CO3 v destilované vodě.
Solution B: 1% (w/v) CuSO4ú5H2O in distilled water. Roztok B: 1% (w / v) CuSO4 5H2O v destilované vodě.
Solution C: 2% (w/v) sodium potassium tartrate in distilled water. Roztok C: 2% (w / v) sodného vinan draselný v destilované vodě.

2. Prepare 2 N NaOH. Připravte 2 N NaOH.

3. Folin reagent (commercially available): Use at 1 N concentration. Folin reagent (komerčně dostupné): Používejte v 1 N koncentraci.

4. Standards: Use a stock solution of standard protein (eg, bovine serum albumin fraction V) containing 2 mg/mL protein in distilled water, stored frozen at –20øC. Normy: Použití standardního zásobního roztoku bílkoviny (např. hovězí sérový albumin frakce V) obsahující 2 mg / ml bílkovin v destilované vodě, skladují zmrazené při teplotě -20 ø C. Prepare standards by diluting the stock solution with distilled water as follows: Připravte norem ředění zásobního roztoku destilovanou vodou takto:

Stock solutionÿÿ (µL)ÿÿÿÿ 0ÿÿÿÿÿÿÿÿ 2.5 ÿÿÿÿ 5 ÿÿÿÿÿÿÿÿ 12.5 ÿÿÿ 25 ÿÿÿÿÿÿ 50 ÿÿÿÿÿÿ 125 ÿÿÿÿ 250 ÿÿÿÿ 500 Zásobního roztoku (μ L) 0 2,5 5 12,5 25 50 125 250 500

Water ÿÿÿÿÿÿÿÿÿÿÿÿÿ ÿ(µL)ÿÿÿÿ 500 ÿÿÿ ÿ498 ÿÿÿ 495 ÿÿÿÿ 488 ÿÿÿÿ 475 ÿÿÿÿ 450 ÿÿÿÿ 375 ÿÿÿÿ 250 ÿÿÿÿ 0 Voda (μ L) 500 498 495 488 475 450 375 250 0
Protein conc. Bílkoviny conc. ÿÿ (µg/mL) 0 ÿÿÿÿÿÿÿ ÿ10 ÿÿÿÿÿ 20 ÿÿÿÿÿÿ 50 ÿÿÿÿÿÿ 100 ÿÿÿÿ 200 ÿÿÿÿ 500 ÿÿÿÿ 1000 ÿÿ 2000 (μ g / ml) 0 10 20 50 100 200 500 1000 2000

Method Metoda

1. To 0.1 mL of sample or standard, add 0.1 mL of 2 N NaOH. Na 0,1 ml vzorku nebo standard, přidá se 0,1 ml 2 N NaOH. Hydrolyze at 100øC for 10 min in a heating block or boiling water bath. Hydrolyzovat při 100 ø C po dobu 10 min ve vytápění bloku nebo vařící vodní lázni.

2. Cool the hydrolysate to room temperature and add 1 mL of freshly mixed complex-forming reagent. Hydrolyzát ochladí na pokojovou teplotu a přidejte 1 ml čerstvě smíšené komplex-tvořící činidlo. Let the solution stand at room temperature for 10 min. Nechte se roztok při pokojové teplotě po dobu 10 min.

3. Add 0.1 mL of Folin reagent, using a vortex mixer, and let the mixture stand at room temperature for 30–60 min (do not exceed 60 min). Přidat 0,1 ml Folin reagent, pomocí vírové mixer, a nechte směs při pokojové teplotě po dobu 30-60 min (nepřesahují 60 min).

4. Read the absorbance at 750 nm if the protein concentration was below 500 µg/mL or at 550 nm if the protein concentration was between 100 and 2000 µg/mL. Přečtěte si absorbance při 750 nm v případě, že koncentrace proteinu byla nižší než 500 μ g / ml nebo při 550 nm v případě, že koncentrace proteinu byla mezi 100 a 2000 μ g / ml.

5. Plot a standard curve of absorbance as a function of initial protein concentration and use it to determine the unknown protein concentrations. Plot standardní křivka absorbance v závislosti na počáteční koncentraci bílkovin a použít k určení neznámé koncentrace proteinu.

Lowry Method References Lowry Metoda Odkazy

Based on protocol by Jakob H. Waterborg. Založené na protokolu o Jakob H. Waterborg.

Lowry et al. J. Lowry et al. J. Biol. Biol. Chem . Chem. 193: 265-275 (1951) 193: 265-275 (1951)

Related Protein Concentration Articles Související články proteinů

Lowry Method Protocol Lowry Metoda protokolu

Protein Concentration Koncentrace proteinu

Protein Concentration Protocol Koncentrace proteinu protokolu

Lowry Protein Assay Lowry Bílkoviny Obsah

Bradford Assay Bradford Puncovní

Bradford Assay Protocol Bradford Puncovní protokolu

Protein Articles: Bílkoviny články:

Western Blot Home Western Blot Home

Immunoprecipitation Home Immunoprecipitation Home