Welcome to Molecular Station! Vítejte na molekulární Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musíte se registrovat, než budete moci odeslat na naše fóra, nebo využít naše moderní prvky. Register Now! Zaregistrujte se nyní! Its Free and Fast! Jeho svobodný a Fast!

Already registered? Už jste se zaregistroval? Login now below. Přihlášení nyní níže.

User Name: Uživatelské jméno:

Password: Heslo:

Remember Me? Zapamatovat si?

Already registered and Forgot your password? Už jste se zaregistroval a Zapomněli jste heslo? Click below to recover it. Klikněte níže k zpětnému to.

Recover Lost Password Získat zpět ztracené heslo

Join now - it's fast and free! Připojte se nyní - je to rychlé a zdarma!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekulární stanice je největší síť výzkumných pracovníků, vědců a vědy milovníky kdekoliv!

Recent Forum Posts Nový fóru

Bookmark Bookmark Site Záložka Záložka Site

Bradford Protein Assay Bradford Bílkoviny Obsah

Protein Concentration Determination by the Bradford Assay Stanovení koncentrace bílkovin v Bradford Puncovní

A simple procedure for the determination of protein concentration in solutions is the Bradford protein assay which was described first by Bradford (Bradford et al., 1976). Jednoduchý postup pro určení obsahu proteinů v řešení je Bradford bílkovin rozboru, který byl popsán nejprve Bradford (Bradford et al., 1976).

An estimation of protein concentration is essential to be done rapidly and accurately in many fields of protein study. Odhad koncentrace proteinu je nezbytné, aby bylo provedeno rychle a přesně v mnoha oblastech bílkovin studie. The Bradford assay has become the preferred method for quantifying protein in many laboratories. Na Bradford testu se stala preferovanou metodou pro kvantifikaci bílkovin v mnoha laboratořích. This technique is simpler, faster, and more sensitive than the Lowry method. Tato technika je jednodušší, rychlejší a citlivější než Lowry metody. Furthermore, when compared with the Lowry method, it is subject to less interference by common reagents and nonprotein components of biological samples. Navíc, ve srovnání s Lowry metody, pokud je v něm méně zásahů společné činidla a nonprotein složek biologické vzorky.

The Bradford assay relies on the binding of the dye Coomassie Blue G-250 to protein. Na Bradford testu závisí na závazné pro barviva Coomassie Blue G-250 na bílkoviny.

Detailed studies indicate that the free dye can exist in four different ionic forms for which the pKa values are 1.15, 1.82, and 12.4. Podrobné studie ukazují, že volný barviva mohou existovat ve čtyřech různých iontových formách, pro které je pKa hodnoty jsou 1,15, 1,82 a 12,4. Of the three charged forms of the dye that predominate in the acidic assay reagent solution, the more cationic red and green forms have absorbance maxima at 470 nm and 650 nm, respectively. Ze tří účtovány formy barvivo, které převládají v kyselém rozboru činidlo řešení, tím více kationtových červené a zelené formuláře maxima absorbance při 470 nm a 650 nm, resp. In contrast, the more anionic blue form of the dye, which binds to protein, has an absorbance maximum at 590 nm. V kontrastu s tím aniontové formě modré barvivo, které váže na bílkoviny, má maximální absorbance při 590 nm.

Thus, the quantity of protein can be estimated by determining the amount of dye in the blue ionic form. Proto se množství bílkovin lze odhadnout na základě stanovení výše barvivo v modré iontovou formu. This is usually achieved by measuring the absorbance of the solution at 595 nm. To je obvykle dosaženo pomocí měření absorbance roztoku při 595 nm.

The dye appears to bind most readily to arginyl and lysyl residues of proteins. Barvivo Zdá se váží nejvíce snadno k arginyl a lysyl zbytků bílkovin. This specificity can lead to variation in the response of the assay to different proteins, which is the main drawback of the method. Tato zvláštnost může vést k rozdílům v reakci na rozboru do různých bílkovin, což je hlavní nevýhodou této metody. The original Bradford assay shows large variation in response between different proteins. Původní Bradford testu ukazuje velké rozdíly v reakci mezi různými proteiny. Several modifications to the method have been developed to overcome this problem. Některé změny metody byly vyvinuty pro překonání tohoto problému.

However, these changes generally result in a less robust assay that is often more susceptible to interference by other chemicals. Nicméně, tyto změny zpravidla za následek méně robustní rozboru, který je často náchylné k rušení od jiných chemických látek. Consequently, the original method devised by Bradford remains the most convenient and widely used formulation. V důsledku toho je originální metoda, kterou Bradford zůstává i nadále nejvíce vyhovuje a široce používaná formulace. Two types of assay are described here: the standard assay, which is suitable for measuring between 10 and 100 µg of protein, and the microassay, which detects between 1 and 10 µg of protein. Dva druhy testu jsou popsány zde: standardním testu, který je vhodný pro měření mezi 10 a 100 μ g bílkovin, a microassay, které zjistí mezi 1 a 10 μ g bílkovin. The latter, although more sensitive, is also more prone to interference from other compounds because of the greater amount of sample relative to dye reagent in this form of the assay. Ten, i když citlivější, je také více náchylné k rušení od jiných sloučenin vzhledem k větším množství vzorku v poměru k barvivo činidla v této podobě rozboru.

see also: Bradford Protein Assay Protocol viz též: Bradford Bílkoviny Obsah protokolu

Bradford Method References Bradford Metoda Odkazy

Bradford, Anal. Bradford, Anal. Biochem. Biochem. 72 : 248, 1976. 72: 248, 1976.

Protein Protocols Bílkoviny protokoly

Protein Encyclopedia Bílkoviny Encyklopedie

Protein Bioinformatics Bílkoviny Bioinformatika

Protein Science Forum Protein Science fórum

Protein Blog Bílkoviny Blog

DNA News DNA Novinky