Welcome to Molecular Station! Vítejte na molekulární Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musíte se registrovat, než budete moci odeslat na naše fóra, nebo využít naše moderní prvky. Register Now! Zaregistrujte se nyní! Its Free and Fast! Jeho svobodný a Fast!

Already registered? Už jste se zaregistroval? Login now below. Přihlášení nyní níže.

User Name: Uživatelské jméno:

Password: Heslo:

Remember Me? Zapamatovat si?

Already registered and Forgot your password? Už jste se zaregistroval a Zapomněli jste heslo? Click below to recover it. Klikněte níže k zpětnému to.

Recover Lost Password Získat zpět ztracené heslo

Join now - it's fast and free! Připojte se nyní - je to rychlé a zdarma!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekulární stanice je největší síť výzkumných pracovníků, vědců a vědy milovníky kdekoliv!

Recent Forum Posts Nový fóru

PCR Protocols PCR protokolů	PCR Bioinformatics and Databases PCR Bioinformatika a databáze	Learn about PCR Získejte informace o PCR	PCR Kits and Products PCR sady a produkty	PCR Forum PCR fórum	PCR Books PCR Knihy

PCR Samples and Template DNA PCR Vzorky DNA a šablony

Template DNA and Samples for PCR Šablona Vzorky DNA a pro PCR

Guidelines for template DNA and samples for PCR: Pokyny pro modelové vzorky DNA a pro PCR:

PCR Samples:ÿ Types, Amount and Purity PCR Vzorky: Druhy, množství a čistotu

Types of Samples for PCR Druhy vzorků pro PCR

Single- or double-stranded DNA of any origin may be a PCR sample. Jedno-nebo dvoulůžkových-uvízlých DNA jakéhokoli původu, může být PCR vzorku. Templates that can be used for amplification include animal, bacterial, plant, or viral. Šablony, které mohou být použity pro zesílení patří zvířat, bakteriální, rostlinné, nebo virovou. Conversion of RNA molecules, including total RNA, poly (A+) RNA, viral RNA, tRNA, or rRNA must occur prior to amplification when using these as templates to so-called complementary DNA (cDNA) by the enzyme reverse transcriptase (either MuLV or recombinant, rTth DNA polymerase). Konverze z molekuly RNA, včetně celkové RNA, poly (A +) RNA, virové RNA, tRNA, rRNA, nebo musí dojít před zesílení při použití těchto šablon, jak to tak-zvané komplementární DNA (cDNA) pomocí enzymu reverzní transkriptázy (buď MuLV nebo rekombinantní, rTth DNA polymerázy).

Amount of Material for PCR Částka Materiál pro PCR

Starting material amount, required for PCR can be as little as a single molecule.ÿ As a basis, up to nanogram amounts of DNA cloned template, up to microgram amounts of genomic DNA, or up to 105 DNA target molecules are best for initial PCR testing. Výchozí materiál částky, požadované pro PCR může být stejně málo jako jediná molekula. Jako základ, a to až do částky nanogramů DNA klonovaného šablony, a to až do částky mikrogramů na genomické DNA, nebo až na 105 cílových molekul DNA jsou nejlepší pro počáteční PCR testování .

Purity of Template and Sample for PCR Čistota šablony a vzorku pro PCR

Purity of the DNA sample that will be used for PCR amplification does not need not be high. Čistota DNA vzorků, které budou použity pro PCR amplifikace nebude, nemusí být vysoká. A single cell, a crude cell lysate, or even a small sample of degraded DNA template is usually adequate for successful amplification. Jediná buňka, a surové buněčné lysate, nebo dokonce i malý vzorek z degradované DNA šablony je obvykle dostatečná pro úspěšné amplifikace. The requirements of sample purity must be that the target contains at least one intact DNA strand encompassing the amplified region and that the impurities associated with the target be dilute so as to not inhibit enzyme activity. Požadavky na čistotu vzorku musí být, že cíl obsahuje alespoň jedno neporušené DNA oblast zahrnující amplifikované oblasti, a že nečistoty spojené s cílovou se zředí tak, aby nebyly inhibují aktivity enzymu. Be that as it may, for some amplifications, such as long PCR, it may be necessary to consider the quality and quantity of the DNA sample. Nicméně je zřejmé, u některých amplifications, jako jsou dlouhé PCR, může být nezbytné vzít v úvahu kvalitu a množství DNA vzorku. For example: 1. Pro příklad: 1. When more template molecules are available, there is less occurrences of false positives caused by either cross-contamination between samples or “carryover” contamination from previous PCR amplifications. Při více molekul šablony jsou k dispozici, tam je méně falešných pozitivních událostí způsobených buď kříž-kontaminace mezi vzorky nebo "přenosu" kontaminace z předchozích PCR amplifications.

2. When the PCR amplifications lacks specificity or efficiency, or when the target sequences are limited, there is a greater chance of inadequate product yield. Při PCR amplifications postrádá specifičnost nebo účinnost, nebo je-li cílové sekvence jsou omezené, je větší šance na neodpovídající výrobek výnos.

3. When the fraction of starting DNA available to PCR is uncertain, it is increasingly difficult to determine the target DNA content. Když zlomek začíná DNA k dispozici PCR není znám, je stále obtížnější určit cílovou DNA obsah.