Welcome to Molecular Station! Vítejte na molekulární Station!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musíte se registrovat, než budete moci odeslat na naše fóra, nebo využít naše moderní prvky. Register Now! Zaregistrujte se nyní! Its Free and Fast! Jeho svobodný a Fast!

Already registered? Už jste se zaregistroval? Login now below. Přihlášení nyní níže.

User Name: Uživatelské jméno:

Password: Heslo:

Remember Me? Zapamatovat si?

Already registered and Forgot your password? Už jste se zaregistroval a Zapomněli jste heslo? Click below to recover it. Klikněte níže k zpětnému to.

Recover Lost Password Získat zpět ztracené heslo

Join now - it's fast and free! Připojte se nyní - je to rychlé a zdarma!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekulární stanice je největší síť výzkumných pracovníků, vědců a vědy milovníky kdekoliv!

Recent Forum Posts Nový fóru

Automated Edman Degradation Automatizovaný Edman Rozklad

Amino Acid Sequences can be determined by Automated Edman Degradation Amino Acid Posloupnosti lze zjistit Automatizovaný Edman Rozklad

The amino acid composition of the peptide is determined.ÿ The peptide is hydrolyzed into its constituent amino acid by heating it in 6 N HCl at 110øC for 24 hours.ÿ Stanford Moore and William Stein showed that amino acids in hydrolysates can be separated by ionexchange chromatography on columns of sulfonated polystyrene and quantitated by reacting them with ninhydrin. Aminokyseliny složení těchto peptidů je určena. V peptid je hydrolyzované do jeho aminokyseliny, které vytápění je v 6 N HCl při 110 ø C po dobu 24 hodin. Stanford Moore a William Stein ukázalo, že aminokyseliny v hydrolyzátů může být odděleny ionexový chromatografie na sloupy sulfonated polystyrenu a quantitated které reagují s ninhydrin.

Amino acids treated this way give an intense blue color, except for praline, which gives a yellow color because it contains a secondary amino group.ÿ The concentration of amino acid in a solution is proportional to the optical absorbance of the solution after heating it with ninhydrin.ÿ This technique can detect a microgram (10nmol) of an amino acid, which is about the amount present in a thumbprint. Aminokyseliny ošetřené tímto způsobem poskytují intenzivnější modrou barvu, kromě bonbón, který dává žlutou barvu, protože obsahuje sekundární amino skupiny. Koncentrace aminokyselin v roztoku je úměrná optické absorbance roztoku po zahřátí to s ninhydrin . Tato technika může odhalit mikrogramů (10nmol) z aminokyselin, což je zhruba částka, které jsou ve otisk palce.

As little as a nanogram (10 pmol) of an amino acid can be detected by means of fluorescamine, which reacts with the a-amino group of a highly fluorescent product.ÿ The identity of the amino acid is revealed by its elution volume, which in the volume of buffer used to remove the amino acid from the column. Jako malej jako nanogramů (10 pmol) z aminokyselin mohou být odhaleny pomocí fluorescamine, která reaguje s a-amino skupin na vysoce fluoreskující produkt. Totožnost aminokyselin je zjeveno jeho eluci objemu, který v objem vyrovnávací paměti používané k odstranění aminokyseliny se z kolony.

The amino-terminal residue of a protein or peptide can be identified by labeling it with a compound that forms a stable covalent link. Na amino-terminal reziduí na protein nebo peptid může být identifikován označovat to za sloučeninu, která vytváří stabilní kovalentní vazby.

Fluorodinitrobenzene (FDNB) was first used for this purpose by Frederick Sanger.ÿ Dabsyl chloride is now commonly used because it forms intensely colored derivatives that can be detected with high sensitivity.ÿ It reacts with an uncharged a-NH2 group to form a sulfonamide derivative that is stable under conditions that hydrolyze peptide bonds. Fluorodinitrobenzene (FDNB) byl poprvé použit pro tento účel Frederick Sanger. Dabsyl chlorid je nyní běžně používaný, protože jej tvoří intenzivně barevné deriváty, které lze zjistit s vysokou citlivostí. Reaguje s nezatížený a-NH2 skupinou, čímž se vytvoří derivát, který je sulfonamid stabilní za podmínek, které hydrolyzovat peptid dluhopisů.

Although the dabsyl method for determining the amino-terminal residue is sensitive and powerful, it cannot be used repeatedly on the same peptide because the peptide is totally degraded in the acid-hydrolysis step.ÿ Pehr Edman devised a method for labeling the amino-terminal residue and cleaving it from the peptide without disrupting the peptide bonds between the other amino acid residues.ÿ The Edman degradation sequentially removes one residue at a time from the amino end of a peptide.ÿ Phenyl isothiocyanate reacts with the uncharged terminal amino group of the peptide to form a phenylthiocarbamoyl derivative.ÿ Then, under mildy acidic conditions, a cyclic derivative of the terminal amino acid is liberated, which leaves an intact peptide shortened by one amino acid. Ačkoli dabsyl metody pro stanovení amino-terminal zbytek je citlivý a silný, nemůže být použit opakovaně na stejný peptid, protože peptid je naprosto degradovala v kyselé hydrolýzy-krok. Pehr Edman vypracovali metodu označovat amino-terminal reziduí štípání a to z peptid bez narušení peptidové vazby mezi ostatní aminokyseliny reziduí. Edman V rozkladu postupně odstraňuje jeden reziduí v době od konce amino o peptid. fenyl isothiokyanat reaguje s nezatížený koncová amino skupiny z peptidu na formu a phenylthiocarbamoyl derivátu. Potom, podle mildy kyselém prostředí, je cyklický derivát aminokyseliny terminálu je osvobodili, který opustí neporušené peptid zkrácena o jednu aminokyselinu.

Analyses of protein structures have been markedly accelerated by the development of sequenators, which are automated instruments for the determination of amino acid sequence.ÿ In a liquid-phase sequenator, a thin film of protein in a spinning cylindrical cup is subjected to the Edman degradation.ÿ The reagents and extracting solvents are passed over the immobilized film of protein, and the released PTH-amino acid is identified by high-pressure liquid chromatography (also called high-performance liquid chromatography, HPLC). Analýzy proteinových struktur byly výrazně urychlit rozvoj sequenators, které jsou automatizovaných nástrojů pro stanovení sekvence aminokyselin. V kapalné fáze-sequenator, tenké vrstvy bílkovin v spřádání válcovitý pohár vystaven na Edman rozkladu. Činidla a těžby rozpouštědla se prošli po znehybněné film z bílkovin, a uvolní PTH-aminokyselina je identifikován vysoký-kapalinová chromatografie (také se nazývá high-účinná kapalinová chromatografie, HPLC).

One cycle of the Edman degradation is carried out in less than two hours.ÿ By repeated degradations, the amino acid sequence of some fifty residues in a protein can be determined.ÿ Gas-phase sequenators can analyze picomole quantities of peptides and proteins.ÿ This high sensitivity makes it feasible to analyze the sequence of a protein sample eluted from a single band of an SDS-polyacrylamide gel. Jeden cyklus z Edman degradace probíhá v méně než dvě hodiny. Opakovaným zhoršování, sekvenci aminokyselin asi padesát zbytků v bílkovině mohou být stanoveny. Plyn-fáze sequenators lze analyzovat picomole množství peptidy a bílkoviny. Tato vysoká citlivost je možné analyzovat sekvence proteinu vzorku eluováno z jediné kapely z SDS-polyakrylamidovém gelu.