home > dna > sap-shrimp-alkaline-phosphatase-protocol > index.php home> dna> SAP-krevety-alkalické fosfatázy-protokol-> index.php
 |
|---|
You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Musíte se registrovat, než budete moci odeslat na naše fóra, nebo využít naše moderní prvky. Register Now! Zaregistrujte se nyní! Its Free and Fast! Jeho svobodný a Fast!
Already registered? Už jste se zaregistroval? Login now below. Přihlášení nyní níže.
Already registered and Forgot your password? Už jste se zaregistroval a Zapomněli jste heslo? Click below to recover it. Klikněte níže k zpětnému to.
Recover Lost Password Získat zpět ztracené heslo
Join now - it's fast and free! Připojte se nyní - je to rychlé a zdarma!
Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Molekulární stanice je největší síť výzkumných pracovníků, vědců a vědy milovníky kdekoliv!
Research is what I'm doing when I don't know what I'm doing. Výzkum je to, co jsem dělal, když nevím, co bych dělal. ~Wernher Von Braun ~ Wernher von Braun
Shrimp alkaline phosphatase or SAP, is an enzyme which catalyzes the dephosphorylation of 5’ phosphates from nucleic acid dephosphorylating RNA or DNA ends. Krevety alkalické fosfatázy nebo SAP, je enzym, který catalyzes na dephosphorylation na 5 'fosfáty z nukleové kyseliny dephosphorylating RNA nebo DNA končí.
Note that PCR products and also primers do not have phosphatases on their free ends, and therefore need to be phosphorylated prior to cloning if you are going to use a de-phosphorylated vector! Všimněte si, že produkty PCR primery a také nemají phosphatases na jejich volného konce, a proto musí být fosforylovány před klonování, pokud budete používat de-fosforylovány vektor!
SAP is temperature unstable are therefore you can easily deactivate this enzyme (compared to CIP!). SAP je nestabilní teploty se proto můžete snadno deaktivovat tento enzym (ve srovnání s CIP!). SAP is deactivated with 65øC water bath incubation for 15 minutes. SAP je deaktivován s 65 ø C vodní lázeň inkubační dobu 15 minut.
You get virtually no reaction. Dostanete prakticky žádná reakce. SAP requires at least 10mM MgCl2 (but optimal enzyme activity of shrimp alkaline phosphatase is at 20-25mM MgCl2) and it works well at pH 8.0. SAP vyžaduje minimálně 10mm MgCl2 (ale optimální aktivity enzymu na krevety alkalické fosfatázy je na 20-25mm MgCl2) a funguje to i při pH 8,0.
To dephosphorylate 1 pmol of DNA ends (2.5 ug of 3 Kb plasmid), for 1hr at 37øC you need: Chcete-li dephosphorylate 1 pmol DNA končí (2,5 ug na 3 Kb plazmid), na 1hod při teplotě 37 ø C, co potřebujete:
0.1 units of SAP for 5' overhangs, 0.2 units for blunt and 0.5 units for 3' over hangs. 0,1 jednotek na SAP pro 5 'přesahy, 0,2 jednotky pro tupé a 0,5 jednotky pro 3' nad zablokuje.
Enzyme comes 1 unit per ul, Thus to be safe you can use approx.0.5 units for 2 ug. Enzym pochází 1 jednotka na ul., tak aby bylo bezpečné, můžete použít approx.0.5 jednotky pro 2 ug.
TIPS: SAP Enzyme can be added directly to restriction digest! TIPY: SAP enzymů mohou být přidány přímo k omezení výtah! Thus the whole proceeding including restriction enzyme digestion, dephosphorylation, enzyme inactivation, ligation or 5’ end-labeling can be performed in one single tube by just adding the appropriate reagents. Proto celé řízení, včetně omezení trávicí enzym, dephosphorylation, inaktivaci enzymu, ligatura nebo 5 'end-značení je možné provést v jednom tubusu pouhým přidáním vhodného činidla. This will allow you to save time and be efficient! To Vám umožní ušetřit čas a být efektivní!
Discuss and post questions about it in the Shrimp Alkaline Phosphatase and DNA Cloning Forum ! Projednat a po otázky o tom v Shrimp alkalické fosfatázy a DNA, klonování fóra!
DNA Cloning Guide Klonování DNA Průvodce
DNA Gel Electrophoresis Gel DNA elektroforézu
Restriction Enzyme Digestion - all you need to know ! Omezení enzymové Domácí lékárnička - vše co potřebujete vědět!
Genomic DNA Isolation Protocol Izolace genomické DNA protokolu
Baceteria DNA Isolation Baceteria Izolace DNA
DNA Transformation - Contains History of DNA DNA Transformace - Obsahuje Historie DNA
Find other protocols at our DNA Protocols external resource directory or see our DNA protocols . Najít další protokoly v naší DNA protokoly vnějších zdrojů, nebo adresář naleznete v naší DNA protokoly.
Related: Související:
DNA Microarray Protocols DNA Microarray protokoly
Visit DNA Bioinformatics . Navštivte DNA, bioinformatiky.
Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | ©2005-2007 Molecular Station.com, All rights reserved. Disclaimer / Podmínky poskytování služeb | Ochrana soukromí | © 2005-2007 molekulární Station.com, Všechna práva vyhrazena.
Send this page to a friend Pošlete tuto stránku svému příteli
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
