Separating the two Strands of a DNA double Helix Třídicí dvou částí DNA dvojšroubovice

While the ratios of G to C and A to T in an organism's DNA are fixed, the GC content (percentage of G +C) can vary considerably from one DNA to another.When a DNA solution is heated enough, the non-covalent forces that hold the two strands together weaken and finally break.When this happens, the two strands come apart in a process known as DNA denaturation, or DNA melting.The temperature at which the DNA strands are half denatured is called the melting temperature, or Tm. I když se poměry G C a A T v organismu DNA jsou stanovena, GC obsah (procento G + C) se mohou značně lišit od jedné DNA do DNA another.When roztok se zahřeje natolik, non-kovalentní síly , které mají obě linie spolu oslabit a nakonec break.When se to stane, dva prameny pocházejí od sebe v procesu, známé jako DNA, denaturace, nebo DNA melting.The teplota, při které DNA prameny jsou pololetní denaturovaného se nazývá bod tání, nebo Tm . The amount of strand separation, or melting, is measured by the absorbance of the DNA solution at 260nm.Nucleic acids absorb light at this wavelength because of the electronic structure in their bases, but when two strands of DNA come together, the close proximity of the bases in the two strands quenches some of this absorbance.When the two strands separate, this quenching disappears and the absorbance rises 30%-40%.This is called hyperchromic shift. Částka oblast separace, nebo tavení, se měří absorbance DNA v roztoku kyseliny 260nm.Nucleic absorbovat světlo na této vlnové délky, protože na elektronické struktury ve svých základnách, ale když dvě části DNA stýkají, těsné blízkosti základů v obou pramenů hasí některé z těchto absorbance.When dvě samostatné větve, to hašení zmizí a absorbance vzroste o 30% -40%. Tomu se říká hyperchromic směny.
The GC content of DNA has a significant effect on its Tm.The higher a DNA's GC content, the higher its Tm.Why should this be?One of the forces holding the two strands of DNA together is hydrogen bonding.Also GC pairs form three hydrogen bonds, whereas AT pairs have only two.It stands to reason, then that two strands of DNA rich in G and C will hold to each other more tightly than those of AT-rich DNA. Na GC obsah DNA má významný vliv na jeho Tm.The vyšší DNA z GC obsah, tím vyšší jeho Tm.Why by to být? Jeden z sil drží dvě části DNA spolu se vodík bonding.Also GC párů tvoří tři vodíkových vazeb, vzhledem k tomu, že páry mají pouze two.It stojí na důvod, pak by dvě části DNA bohatých na G a C budou držet si navzájem těsněji, než které jsou bohaté na AT-DNA.
Heating is not the only way to denature DNA.Organic solvents such as dimethyl sulfoxide and formamide, or high pH, disrupt the hydrogen bonding between DNA strands and promote denaturation.Lowering the salt concentration of the DNA solution also aids denaturation by removing the ions that shield the negative charges on the two strands from one another.At low ionic strength, the mutually repulsive forces of the negative charges are strong enough to denature the DNA ar a relatively low temperature. Topení není jediným způsobem, jak denaturovat DNA.Organic rozpouštědla jako dimethyl sulfoxidu a formamid, nebo vysoké pH, rozvracení vodíkové vazba mezi řetězců DNA a podporovat denaturation.Lowering koncentrace soli na DNA řešení také pomůcky denaturaci odstraněním iontů, které štít negativní poplatků na dva prameny z jednoho another.At nízkou iontovou sílu, vzájemně repulzivní síly na negativní poplatky jsou dostatečně silné, aby denaturovat DNA ar relativně nízké teplotě.