home > transfection > index.php начало> transfection> index.php
 |
|---|
You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Трябва да се регистрирате преди да можете да публикувате на нашите форуми, или да използвате допълнителни функции. Register Now! Регистрирайте се! Its Free and Fast! Тяхното свободно и бързо!
Already registered? Вече сте регистрирани? Login now below. Вход за сега по-долу.
Already registered and Forgot your password? Вече сте регистрирани и Забравили сте паролата си? Click below to recover it. Кликнете по-долу, за да го възстанови.
Recover Lost Password Забравена Забравена парола
Join now - it's fast and free! Присъединете се към момента - това е бързо и безплатно!
Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Молекулярна станция е най-голямата мрежа от изследователи, учени и любители на науката навсякъде!
There is no prescribed route to follow to arrive at a new idea. Не е предписан маршрут да следват за да се стигне до нова идея. You have to make the intuitive leap. Трябва да се направи интуитивно високосна. But the difference is that once you've made the intuitive leap you have to justify it by filling in the intermediate steps. Но разликата е, че след като сте направили скок интуицията ви се наложи да го мотивира с попълването на междинни стъпки. In my case, it often happens that I have an idea, but then I try to fill in the intermediate steps and find that they don't work, so I have to give it up. В моя случай, тя често се случва, че имам една идея, но след това се опитвам да попълни в междинни стъпки и откриете, че те не работят, така че аз трябва да го даде. ~Stephen W. Hawking ~ W. Стивън Хокинг
This Transfection site is your portal for all things related to the transfection of cells with DNA plasmid or vector, RNA whether siRNA or RNAi, or even recombinant protein. Това е вашият сайт Transfection портал за всички неща, свързани с transfection на клетки с ДНК плазмид или вектор, РНК, дали siRNA или RNAi, или дори рекомбинантен протеин. We provide you with all the background information, protocols for cell transfection, optimization and analysis steps, and cell transfection troubleshooting information to become the ultimate expert! Ние ви осигури цялата информация, протоколи за клетъчни transfection, оптимизиране и анализ стъпки, и клетки transfection информация за отстраняване на проблеми да се превърне в крайна експерт!
Transfection describes the introduction of foreign material into eukaryotic cells using a virus vector or other means of transfer. Transfection описва въвеждането на чуждестранните материали в eukaryotic клетки с вируса на вектор или други средства за превод.
The term transfection for non-viral methods is most often used in reference to mammalian cells, while the term transformation is preferred to describe non-viral DNA transfer in bacteria and non-animal eukaryotic cells such as fungi, algae and plants. Терминът transfection за не-вирусни методите е най-често използвани при позоваване на клетки от бозайници, като срокът трансформация е удобно да се опише не-вирусната ДНК трансфер в бактерии и не-животински клетки eukaryotic като гъби, водорасли и растения.
Transfection of animal cells typically involves opening transient pores or 'holes' in the cell plasma membrane, to allow the uptake of material. Transfection от животински клетки обикновено включва временно отваряне на порите или "дупки" в клетъчната мембрана плазма, за да може усвояването на материала. Genetic material (such as supercoiled plasmid DNA or siRNA constructs), or even proteins such as antibodies, may be transfected. Генетичен материал (например supercoiled плазмида ДНК или изгражда siRNA), или дори протеини, като антитела, може да бъде transfected. In addition to electroporation, transfection can be carried out by mixing a cationic lipid with the material to produce liposomes, which fuse with the cell plasma membrane and deposit their cargo inside. В допълнение към electroporation, transfection може да се извършва чрез смесване на един катионен липидната с материали за производство на liposomes, които предпазител с клетъчната мембрана и плазмени депозита си товар вътре.
The original meaning of transfection was 'infection by transformation', ie introduction of DNA (or RNA) from a eukaryote virus or bacteriophage into cells, resulting in an infection. Първоначалната смисъла на transfection беше "инфекция с трансформация", т.е. въвеждането на ДНК (или РНК) от Еукариоти вирус или bacteriophage в клетки, което води до инфекция. Because the term transformation had another sense in animal cell biology (a genetic change allowing long-term propagation in culture, or acquisition of properties typical of cancer cells), the term transfection acquired, for animal cells, its present meaning of a change in cell properties caused by introduction of DNA. Тъй като терминът трансформация е друг смисъл в ветеринарно-клетъчна биология (а генетични промени, позволяващи на дългосрочно размножаване на културата, или придобиването на имота, характерни за раковите клетки), терминът transfection придобити, за животински клетки, смисъла му до момента на промяна в клетка имота, причинени от въвеждането на ДНК.
Transfection is a method by which experimental DNA may be put into a cultured mammalian cell. Transfection е метод, чрез който опитни ДНК могат да бъдат пуснати в култивирани клетки на бозайници. Such experiments are usually performed using cloned DNA containing coding sequences and control regions (promoters, etc) in order to test whether the DNA will be expressed. Такива опити обикновено се осъществяват с помощта на клонирани ДНК последователности, съдържащи за кодиране и контрол на регионите (стимулатори, и т.н.) с цел проверка дали ДНК ще бъде изразена. Since the cloned DNA may have been extensively modified (for example, protein binding sites on the promoter may have been altered or removed), transfection is often used to test whether a particular modification affects the function of a gene. Тъй като клонирани ДНК да е била широко модифициран (например протеини, обвързващи сайтове за промотор май са били променени или премахнати), transfection често се използва, за да тествате дали дадена промяна засяга функцията на ген.
Transfection Diagram: Transfection Схема:
The ability to synthesize RNA in the laboratory is critical to many techniques. Способността да synthesize РНК в лабораторията е от решаващо значение за много техники. Radiolabeled and non-radiolabeled RNA probes are required for many protocols, and they can be synthesized easily in small scale in vitro transcription reactions allowing their use in blot hybridizations and nuclease protection assays. Radiolabeled и не-radiolabeled РНК вероятно са задължителни за много протоколи, и те лесно могат да бъдат синтезирани в малък мащаб ин витро транскрипция реакции, позволяваща използването им в blot hybridizations и защита nuclease тестове.
In vitro transcription requires a purified linear DNA template containing a promoter, ribonucleotide triphosphates, a buffer system that includes DTT and magnesium Ин витро транскрипция изисква пречистена линейни ДНК шаблон, съдържащ промотор, ribonucleotide трифосфати, буферна система, която включва DTT и магнезий
In vitro transcription requires a purified linear DNA template containing a promoter, ribonucleotide triphosphates, a buffer system that includes DTT and magnesium Ин витро транскрипция изисква пречистена линейни ДНК шаблон, съдържащ промотор, ribonucleotide трифосфати, буферна система, която включва DTT и магнезий
There are various methods of introducing foreign DNA into a eukaryotic cell. Има различни методи за въвеждане на чуждестранни ДНК в eukaryotic клетка. Many materials have been used as carriers for transfection, which can be divided into three kinds: (cationic) polymers, liposomes and nanoparticles. Много от материалите са били използвани като носители на transfection, които могат да се разделят на три вида: (катиони) полимери, liposomes и наночастици.
One of the cheapest (and least reliable) methods is transfection by calcium phosphate, originally discovered by FL Graham and AJ van der Eb in 1973[citation needed] (see also [1]). Един от най-евтините (и малко надеждни) методи е transfection от калциев фосфат, първоначално открит от FL Греъм и AJ ван дер ИБ през 1973 г. [цитиране необходими] (вж. също [1]). HEPES-buffered saline solution (HeBS) containing phosphate ions is combined with a calcium chloride solution containing the DNA to be transfected. HEPES-буфериран физиологичен разтвор (HeBS), съдържащи фосфат йони е съчетано с калциев хлорид разтвор, съдържащ ДНК да се transfected. When the two are combined, a fine precipitate of the positively charged calcium and the negatively charged phosphate will form, binding the DNA to be transfected on its surface. Когато двамата са комбинирани, глоба утайка на положително натоварени на калций и фосфор, ще окаже негативно натоварени форма, задължителни за ДНК да се transfected на нейната повърхност. The suspension of the precipitate is then added to the cells to be transfected (usually a cell culture grown in a monolayer). Спирането на утайка се добавят към клетките да се transfected (обикновено клетъчни култури, отглеждани в МОНОСЛОЙНИ). By a process not entirely understood, the cells take up some of the precipitate, and with it, the DNA. Чрез процес не е напълно разбираем, клетките да минат някои от утайка, и с него, на ДНК.
Other methods use highly branched organic compounds, so-called dendrimers, to bind the DNA and get it into the cell. Други методи използват силно branched органични съединения, така наречените dendrimers, да се обвърже с ДНК и си го в клетка. A very efficient method is the inclusion of the DNA to be transfected in liposomes, ie small, membrane-bounded bodies that are in some ways similar to the structure of a cell and can actually fuse with the cell membrane, releasing the DNA into the cell. А е много ефективен метод за включване на ДНК да се transfected в liposomes, т.е. малки, мембранно-ограничени органи, които са дори в някои отношения подобно на структурата на клетките и може действително предпазител с клетъчна мембрана, освобождаване на ДНК в клетки . For eukaryotic cells, lipid-cation based transfection is more typically used, because the cells are more sensitive. За eukaryotic клетки, липид-катион основава transfection е по-обикновено се използват, тъй като клетките са по-чувствителни.
Another method is the use of cationic polymers such as DEAE-dextran or polyethylenimine. Друг метод е използването на катионен полимери, като например DEAE-dextran или polyethylenimine. The negatively charged DNA binds to the polycation and the complex is taken up by the cell via endocytosis. В отрицателно натоварени с ДНК се свързва с polycation и комплекса е заета от клетката чрез ендоцитоза.
A direct approach to transfection is the gene gun, where the DNA is coupled to a nanoparticle of an inert solid (commonly gold) which is then "shot" directly into the target cell's nucleus. А директен подход към transfection е ген пистолет, където ДНК е съчетано с nanoparticle на инертни твърди (често злато), която след това се "снима" направо в целта клетката ядрото. DNA can also be introduced into cells using viruses as a carrier. ДНК може да бъде въведена в клетки, използвайки вируси като превозвач. In such cases, the technique is called viral transduction, and, the cells are said to be transduced. В такива случаи, техника се нарича вирусен transduction, и, клетките са тези да бъдат transduced.
Other methods of transfection include nucleofection, electroporation, heat shock, magnetofection and proprietary transfection reagents such as Lipofectamine, Dojindo Hilymax, Fugene, jetPEI, Effectene or DreamFect. Други методи за transfection включват nucleofection, electroporation, топлина шок, magnetofection и патентовани transfection реагенти като Lipofectamine, Dojindo Hilymax, Fugene, jetPEI, Effectene или DreamFect.
For most applications of transfection, it is sufficient if the transfected gene is only transiently expressed. За повечето приложения на transfection, че е достатъчно, ако transfected ген е само transiently изразена. Since the DNA introduced in the transfection process is usually not inserted into the nuclear genome, the foreign DNA is lost at the later stage when the cells undergo mitosis. Тъй като ДНК, въведени в transfection процес обикновено не се включва в ядрената геном, чуждестранните ДНК се губи по-късен етап, когато клетките се подлагат mitosis. If it is desired that the transfected gene actually remains in the genome of the cell and its daughter cells, a stable transfection must occur. Ако тя е желана, че transfected ген всъщност остава в генома на клетката и неговата дъщеря клетки, стабилна transfection трябва да се случи.
To accomplish this, another gene is co-transfected, which gives the cell some selection advantage, such as resistance towards a certain toxin. Да се направи това, на друг ген е съ-transfected, която дава предимство клетки около селекцията, като например резистентност към някои токсини. Some (very few) of the transfected cells will, by chance, have inserted the foreign genetic material into their genome. Някои (много малко) от transfected клетки ще, по случайност, са включени чуждия генетичен материал в техния геном. If the toxin, towards which the co-transfected gene offers resistance, is then added to the cell culture, only those few cells with the foreign genes inserted into their genome will be able to proliferate, while other cells will die. Ако токсини, към които съ-transfected ген предлага съпротива, след което се добавя към клетъчната култура, само тези няколко клетки с чужди гени, включени в техния геном, ще бъде в състояние да proliferate, докато други клетки ще умре. After applying this selection pressure for some time, only the cells with a stable transfection remain and can be cultivated further. След прилагането на тази селекция натиск за известно време, само на клетки с transfection остава стабилна и може да бъде обработвана допълнително.
A common agent for stable transfection is Geneticin, also known as G418, which is a toxin that can be neutralized by the product of the neomycin resistant gene. Създава се обща агент, за стабилна transfection е Geneticin, известен също като G418, който е на токсини, които могат да бъдат неутрализирани от продукта на неомицин резистентен ген.
In vitro transcription requires a purified linear DNA template containing a promoter, ribonucleotide triphosphates, a buffer system that includes DTT and magnesium Ин витро транскрипция изисква пречистена линейни ДНК шаблон, съдържащ промотор, ribonucleotide трифосфати, буферна система, която включва DTT и магнезий
You must REGISTER NOW to post a question in the Transfection Forum. Вие трябва да се регистрирате сега, за да публикувате въпрос в Transfection форум. Login now if you have already registered. Вход за сега, ако вече сте регистрирани.
Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | ©2005-2007 Molecular Station.com, All rights reserved. Отговорности / Условия за ползване | Поверителност | © 2005-2007 молекулярна Station.com, Всички права запазени.
Send this page to a friend Изпратете страницата на приятел
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
