Welcome to Molecular Station! Добре дошли в молекулярна станция!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Трябва да се регистрирате преди да можете да публикувате на нашите форуми, или да използвате допълнителни функции. Register Now! Регистрирайте се! Its Free and Fast! Тяхното свободно и бързо!

Already registered? Вече сте регистрирани? Login now below. Вход за сега по-долу.

User Name: Име:

Password: Парола:

Remember Me? Запомни ме?

Already registered and Forgot your password? Вече сте регистрирани и Забравили сте паролата си? Click below to recover it. Кликнете по-долу, за да го възстанови.

Recover Lost Password Забравена Забравена парола

Join now - it's fast and free! Присъединете се към момента - това е бързо и безплатно!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Молекулярна станция е най-голямата мрежа от изследователи, учени и любители на науката навсякъде!

Recent Forum Posts Нова Форум постове

Bookmark Bookmark Site Bookmark Bookmark сайт

Real-time PCR PCR в реално време

Real time and Quantitative PCR В реално време и количествен PCR

Introduction to Real-Time PCR Въведение в реално време PCR

Real-time PCR is a type of quantitative PCR which measures the amount of cDNA or mRNA in a sample, either from a population of cells (tissue or cell culture), or recently even from a single cell. Real-time is used commonly to determine the expression of a gene's mRNA, and its expression levels (copy number of mRNA) during certain conditions (such as treating cells with a drug).  Real-time PCR can be used to compare normal (control) samples to disease samples, giving an idea as to expression changes which occur with pathogenesis.  Real-time PCR due to its sensitivity is also used in the detection of pathogens in the blood such as viruses. PCR в реално време е от този тип количествен PCR, който мерки размерът на cDNA или mRNA в проба, или от населението на клетки (тъкани или клетъчна култура), или наскоро дори и от една клетка. Реално време се използва често за определяне на изразяване на един ген на mRNA, и словото му нива (копие номер на mRNA) при определени условия (например лечение на клетки с употребата на наркотици). PCR в реално време може да се използва за сравняване на нормалното (контрола) проби за болестта на проби, като представа както за изразяване промени, с които се срещам се с патогенезата. PCR в реално време, поради своята чувствителност се използва също така и в разкриването на патогени в кръвта, например вируси.

The development of real-time quantitative PCR has eliminated the variability traditionally associated with quantitative PCR, thus allowing the Развитието на реално време количествен PCR елиминира изменчивост, традиционно асоциирани с количествен PCR, като по този начин позволява на
routine and reliable quantitation of PCR products. рутинни и надеждни quantitation на PCR продукти.

Table of Contents Таблица Съдържание

Introduction to Real-time PCR Въведение в реално време PCR

Real Time PCR: Advantages of Real-time PCR PCR в реално време: Предимства на PCR в реално време

History of Real-Time PCR История на PCR в реално време

Real-time PCR systems Available В реално време PCR наличните системи

Real-time PCR Protocols В реално време PCR протоколи

Mechanism of Real-time PCR Механизъм на PCR в реално време

Real Time PCR: Advantages of Real-time PCR PCR в реално време: Предимства на PCR в реално време

Each cell type expressess a set of mRNA molecules, known as a transcriptome.  In response to stimuli, cells are able to up-regulate or down-regulate factors such as protein enzymes inside the cell by regulating the mRNA levels of these factors.  mRNA levels are not always correlated with protein levels so some caution is necessary, however generally mRNA levels do loosely correspond to protein levels.  Measuring the mRNA levels of certain factors inside a cell using real-time pcr is a method which will give clues as to the amounts of these factors or proteins. Всяка клетка тип expressess набор от mRNA молекули, известни като transcriptome. В отговор на стимули, клетки са в състояние да регулира-нагоре или надолу-регулиране на фактори, като например протеини, ензими, вътре в клетките чрез регулиране на mRNA нива на тези фактори. MRNA нива не винаги са свързани с нивата на протеин, така че някой е необходимо повишено внимание, но като цяло нивата на mRNA свободно да съответстват на протеинови нива. mRNA измерване на нивата на някои фактори в клетка, използвайки реално време pcr е метод, който ще даде улики по отношение на сумите, на тези фактори или протеини.

Traditionally, mRNA levels inside the cell were measured using Northern blotting.  This technique is regarded as a gold-standard in the measurement of gene expression/mRNA levels as it uses radiolabeled probe to label the RNA, which is then quantified using a scintillation counter giving very accurate readings. Традиционно mRNA нива вътре в клетката бяха измерени чрез Северна blotting. Тази техника се счита за златен стандарт в измерването на генното изразяване / mRNA нива, което използва radiolabeled сонда за етикет на РНК, което е след това количествено използване на различни като контра много точни измервания. Northern blotting although very accurate had several disadvantages including the use of radioactivity. Северна blotting, въпреки че имаше няколко много точни недостатъци, включително използването на радиоактивност. Northern blotting required the accurate measurement of mRNA and total RNA from cells extracted in order to compare samples. Северна blotting изисква точно измерване на mRNA и общо РНК от клетки, извлечени с цел да сравняват проби. This was a problem because although detection methods were very accurate, error could be introduced into Northern blotting (or RNA dot/slot blotting) through differences in total RNA/mRNA levels between samples (ie cell treatments, different tissues, different animals, etc.).  It also required relatively large amounts of RNA which required large numbers of cells. Това е проблем, защото макар и методите за откриване бяха много точни, грешка, може да бъде въведена в Северна blotting (или РНК точкова / слот blotting) чрез разликите в общото РНК / mRNA нива между пробите (т.е. килия отношение, различни тъкани, различни животни и др ). Тя също изисква сравнително големи суми на РНК, което изисква голям брой клетки. Recently, mRNA gene quantification or real-time pcr methods have been improved and are easier to perform and do not require the use of radioactivity.  Researchers often only have access to small amounts of cells especially in the fields of stem cell research and primary cell research, and real-time pcr has made it possible to quantify mRNA levels from even very small numbers of cells and lately even single cells.  However, this extreme sensitivity of real-time pcr methods makes it vital to protect one's samples from contamination, which would lead to false results. Наскоро, mRNA ген количествено или в реално време pcr методи са подобрени и са лесни за изпълнение и не изисква използването на радиоактивност. Изследователите често имат достъп само на малки суми на клетки, особено в областта на стъбло килия проучване и първични клетъчни изследвания , Както и в реално време pcr даде възможност да се изчисли mRNA нива дори и от много малък брой клетки и напоследък дори единични клетки. Въпреки това, тази изключителна чувствителност на реално време, pcr методи, го прави от жизненоважно значение да се защитят нечии проби от замърсяване, което би доведе до неверни резултати. Current real-time pcr methods and systems also do not require the measurement of mRNA or cDNA sample concentrations before real-time pcr is conducted. Текущи в реално време pcr методи и системи, също не се нуждаят от измерване на mRNA или cDNA проба концентрации, преди реално време pcr се провежда.

History of Real-Time PCR История на PCR в реално време

Higuchi et al.1,2 pioneered the analysis of PCR kinetics by constructing a system that detects PCR products as Higuchi E.T. al.1, 2 въведен за първи път анализ на PCR кинетика от изграждането на система, която разпознава PCR продукти, както
they accumulate. те се натрупват. This “real-time” system includes the intercalator ethidium bromide in each amplification reaction, Това "реално време" Системата включва intercalator ethidium бромид във всяка усилвателя реакция,
an adapted thermal cycler to irradiate the samples with ultraviolet light, and detection of the resulting fluorescence един адаптиран термични cycler да irradiate проби с ултравиолетова светлина, както и за откриване на получения флуоресценция
with a computer-controlled cooled CCD camera. с компютърно контролирани охлажда CCD камера. Amplification produces increasing amounts of double-stranded Усилвателя произвежда увеличаване на размера на двойно усукана
DNA, which binds ethidium bromide, resulting in an increase in fluorescence. ДНК, която се свързва ethidium бромид, което води до увеличаване на флуоресценция. By plotting the increase in fluorescence С нарастването на изчертаване флуоресценция
versus cycle number, the system produces amplification plots that provide a more complete picture of the против цикъл номер, системата произвежда усилвателя участъци, които осигуряват по-пълна картина на
PCR process than assaying product accumulation after a fixed number of cycles. PCR процес, отколкото assaying продукт, след натрупване на определен брой цикли.

External sites: see Real Time PCR at Real Time PCR Info! Външни сайтове: виждате в реално време PCR в реално време PCR инфо!

References for Real-Time PCR Препратки за PCR в реално време

1. Higuchi, R., Dollinger, G., Walsh, PS, and Griffith, R. 1992. Higuchi, Р., Dollinger, Г., Walsh, PS, и Грифит, Р. 1992. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Едновременно усилвателя и откриване на специфични ДНК последователности.
Biotechnology 10:413–417. Biotechnology 10:413-417.

2. Higuchi, R., Fockler, C., Dollinger, G., and Watson, R. 1993. Higuchi, Р., Fockler, В., Dollinger, Г., и Уотсън, Р. 1993. Kinetic PCR: Real time monitoring of DNA amplification reactions. Кинетичната PCR: реално време, контрол на ДНК амплификация реакции.
Biotechnology 11:1026–1030. Biotechnology 11:1026-1030.

Real-Time PCR Protocols В реално време PCR протоколи	Real-Time PCR Bioinformatics and Databases В реално време PCR биоинформатиката и бази данни	Learn about Real-Time PCR Научете повече за PCR в реално време	Real-Time PCR Kits and Products В реално време PCR комплекти и продукти	Real-Time PCR Forum В реално време PCR форум	Real-Time PCR Books В реално време PCR книги