Welcome to Molecular Station! Добре дошли в молекулярна станция!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Трябва да се регистрирате преди да можете да публикувате на нашите форуми, или да използвате допълнителни функции. Register Now! Регистрирайте се! Its Free and Fast! Тяхното свободно и бързо!

Already registered? Вече сте регистрирани? Login now below. Вход за сега по-долу.

User Name: Име:

Password: Парола:

Remember Me? Запомни ме?

Already registered and Forgot your password? Вече сте регистрирани и Забравили сте паролата си? Click below to recover it. Кликнете по-долу, за да го възстанови.

Recover Lost Password Забравена Забравена парола

Join now - it's fast and free! Присъединете се към момента - това е бързо и безплатно!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Молекулярна станция е най-голямата мрежа от изследователи, учени и любители на науката навсякъде!

Recent Forum Posts Нова Форум постове

Proteomics Home Proteomics Начало	Proteomic Protocols Molecular Station Proteomic протоколи молекулярна станция	Proteomic Protocols (external links) Proteomic протоколи (външни връзки)	Proteomic Bioinformatics Proteomic Биоинформатика	Proteomic FAQ Proteomic Въпроси и отговори	Proteomic Kits and Products Proteomic комплекти и продукти	Proteomic Forum Proteomic форум	Proteomics Blog Proteomics Blog	Books on Proteomics Книги за Proteomics	Proteomic News Proteomic Новини

Protein Identification Techniques Протеин методи за идентификация

Proteins can be seperated by 2-D Gel Electrophoresis and Identified with Mass Spectrometry Протеини могат да бъдат разделени на 2-D гел-електрофореза и идентифицирани с масова спектрометрия

Protein content of a cell is estimated to consist of thousands of different types of proteins Съдържание на протеини в клетка, се очаква да се състои от хиляди различни видове протеини
with a dynamic range of expression. с динамичен диапазон на изразяване. The technology that is currently being used involves the retrieval of the protein components, fractionation of this very complex mixture, Технологията, че в момента се използва включва извличане на протеинови съставки, фракциониране на тази много сложна смес,
enzymatic proteolysis of each separated and isolated species, extensive mass spectrometric analysis and finally matching the structural data generated against a database of known proteins or anticipated genome expression products. ензимна proteolysis на всеки разделени и изолирани вид, широко маса спектрометричен анализ, и накрая, който структурните данните, получени от базата данни на протеини, известни или очаквани геном словото продукти.
This procedure involves an initial step using 1- or 2-dimensional electrophoresis (DE). Тази процедура включва начална стъпка използвайки 1 - или 2-квадрат електрофореза (Германия). Using 1-DE, proteins are separated on the basis of molecular mass; the technique is reproducible and can be used for proteins in the mass range of 10–300 kDa, but does have limited resolution. Използване на 1-DE, протеини, са разделени на основата на молекулярната маса; техниката е възпроизводими и могат да бъдат използвани за протеини в масово гама от 10-300 kDa, но не са ограничени резолюция.
For separation of more complex protein mixtures, 2-DE is the preferred method. За отделяне на по-сложни протеинови смеси, 2-DE е предпочитан метод. This involves separating the proteins first according to their net charge by an isoelectric focusing step and then, in the second dimension, according to their molecular mass employing sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) which gives a high separation efficiency. Това предполага отделяне на протеини първи в зависимост от тяхната нетна такса от isoelectric акцент стъпка и след това, във второто измерение, в зависимост от тяхната молекулна маса dodecyl използването на натриев сулфат-полиакриламидна гел-електрофореза (SDS-страница), която отдава голямо разделение ефективност.
Mass spectrometry (MS) is the method of choice for the identification Масова спектрометрия (MS) е метод на избор за идентификация
of the separated proteins, and 2-DE and mass spectrometry разделени на белтъци, и 2-DE и масова спектрометрия
now represent a technology by which several thousand proteins can be separated, detected and identified in an automated fashion. Сега представлява технология, с която няколко хиляди протеини могат да бъдат разделени, открити и идентифицирани по автоматизиран начин.
Proteomics methodology is initially done by protein separation and location by 2-DE followed by excision of the proteins of interest which then undergo proteolytic digestion to yield a mixture of peptide fragments. Proteomics методика първоначално е направено от протеин, разделяне и място с 2-DE, последвана от ексцизия на протеини на интереси, които след това преминават proteolytic храносмилането да добива смес от пептид фрагменти. The peptides are analysed by mass spectrometry, initially using MALDI-MS for molecular mass determination and generation of a peptide mass fingerprint. В пептиди са анализирани от масова спектрометрия, първоначално чрез МАЛДИ-МС за молекулна маса, решителност и генериране на пептид маса пръстови отпечатъци. If database searching at this stage yields ambiguous results, a second mass spectrometric analysis, ESI-MS/MS, is used to generate sequence information which is used for more stringent database searching. Ако търсите базата данни на този етап добиви неясни резултати, втори маса спектрометричен анализ, ESI-MS/MS, се използва за генериране на последователността информация, която се използва за база данни, които търсят по-строги.
From the mass spectrum obtained on analysis of the protein digest mixture, the peptide mass map or peptide mass fingerprint ie the molecular masses of the peptide fragments, can be ascertained. От масата на радиочестотния спектър, получени при анализ на усвояването на протеини смес, за пептид маса на сайта или пептид маса, пръстови отпечатъци, т.е. молекулните маси на пептид фрагменти, могат да бъдат установени. Often, if the amino acid sequence is sufficiently unique and the mass Често, ако аминокиселина последователност е достатъчно уникална и масата
accuracy sufficiently high, the mass map can be used to search databases 12–15 to identify the protein successfully without the need for further analyses. точност достатъчно високо, масата на сайта могат да бъдат използвани за търсене на бази данни за идентифициране на 12-15 протеин успешно, без да е необходимо за по-нататъшни анализи. If, however, database searching leads to ambiguous results, then further MS analyses, involving the use of tandem mass spectrometry (MS/MS), are undertaken sequentially on each peptide in the mixture to generate a sequence, or partial sequence, known as a sequence tag, for these peptides. Ако, обаче, база данни, търсене, води до неясни резултати, а след това допълнително MS анализи, които включват използването на тандем масова спектрометрия (MS / MS), се извършват последователно върху всеки пептид в сместа да генерира последователност или частична последователност, известна като последователност маркер, за тези пептиди. This is frequently achieved by the use of ESI-MS/MS19 and usually an additional purification step must be performed to separate the peptides from the salts and detergents that may be present which cause attenuation of the peptide signal. Това често се постига чрез употребата на ESI-MS/MS19 и обикновено допълнително очистване стъпка трябва да се извърши за разделяне на пептиди от соли и почистващи препарати, които могат да присъстват, които причиняват attenuation на пептид сигнал.

Further database searching with both the molecular mass of the peptide Допълнителна база данни с търсене както на молекулярната маса на пептид
and the sequence tag information should lead to unambiguous protein identification. и редицата таг информацията, следва да доведат до недвусмислени протеин идентификация.