home > protein-microarrays > protein-chip-capture > index.php начало> протеин-microarrays> протеин чипове за улавяне> index.php
 |
|---|
 |  |  |  |  |  |
|---|---|---|---|---|---|
Protein Array Protocols Протеин множество протоколи | Protein Array Bioinformatics Протеин масив Биоинформатика | Learn about Protein Arrays Научете повече за протеин масиви | Protein Array Kits and Products Протеин масив комплекти и продукти | Protein Array Forum Протеин масив форум | Proteomic News Proteomic Новини |
Protein and Antibody Microarray Chips Протеин и антитела Microarray чипове
Capture Molecules and their Limitations Уловете молекули и техните Ограничения
The most common form of analytical protein arrays are antibody microarrays in which antibodies (or antibody mimics) that bind specific antigens are arrayed on a glass slide at high density. Най-честата форма на аналитична протеин масиви са антитела microarrays, в която антитела (антитела или mimics), които свързват специфични антигени са подредена върху стъклена слайд най-висока плътност. A lysate is passed over the array and the bound antigen is detected after washing. А lysate е преминал през масив и обвързана антиген е открита след измиване. The biggest challenge with these methods is producing reagents that identify the protein of interest and with high enough specificity in a high-throughput fashion. Although antibodies are the traditional reagent of choice for detecting proteins in complex mixtures, polyclonal sera are often not specific and are expensive to produce. Най-голямото предизвикателство на тези методи е за производство на реагенти, които се идентифицира протеин от интерес и с достатъчно висока специфичност по-висока производителност мода. Въпреки, че антителата са традиционните реактив на избор за откриване на протеини в сложни смеси, polyclonal серуми често са специфични и не са скъпи за производство. Also, the conventional hybridoma method of producing highly specific monoclonal antibodies is time-consuming, laborious and costly (8). Също така, hybridoma конвенционален метод за производство на високо специфични моноклонални антитела е времето, консумиращи, труден и скъп (8).
Several studies using antibodies have recently been conducted despite the obstacles in obtaining specific antibodies. Няколко проучвания, използващи антитела, които наскоро бяха проведени въпреки пречките при получаване на специфични антитела. In one of the largest studies to date, Sreekumar et al. В един от най-големите проучвания, към днешна дата, Sreekumar и др. spotted 146 distinct antibodies on glass to monitor the alternations of protein quantity in LoVo colon carcinoma cells. петниста 146 различни антитела върху стъкло за наблюдение на alternations на протеин в количество, карцином на дебелото черво LoVo клетки. Their results revealed radiation-induced up-regulation of many interesting proteins, including p53, DNA fragmentation factor 40 and 45, tumour necrosis factor-related ligand, as well as down-regulated proteins (58). Техните резултати показват радиация индуцирана до регулиране на много интересни протеини, включително и p53, ДНК фрагментацията фактор 40 и 45, тумор-некротичен фактор, свързани с лиганд, както и определяне на регулираните-протеини (58).
To date, most antibody microarrays were produced with several dozen or a few hundred commercially available poly- or mono-clonal antibodies. Although tens of thousands of antibodies are commercially available, this number is insufficient because for most proteins there are no available antibodies. The fact that many antibodies are glycosylated and contain large protein-based supporting structures means that they often cross-react with more than one target protein. This can contribute to a large number of false positives (9). Thus another problem has been obtaining high-specificity antibodies. До този момент най-антитяло microarrays са произведени с няколко десетки или няколко сто на пазара много-или моно-клонова антитела. Въпреки че десетки хиляди антитела се предлагат на пазара, този брой е недостатъчен, тъй като за повечето протеини не са на разположение на антитела. За Фактът, че много антитела са glycosylated и съдържа голям протеин, базирани подкрепящи структури, означава, че те по-често реагират с повече от една цел протеин. Това може да допринесе за голям брой фалшиви положителен (9). По този начин един друг проблем е получаването на високо спецификата на антитела.
One of the greatest problem with antibody arrays is specificity. Една от най-големите проблеми с антитела масиви е спецификата. Proteins are often present in a very large dynamic range (106); thus, reagents that might have high affinity for one protein, but are low affinity for another will still exhibit detection of the lower affinity protein if it is much more prevalent (9). Протеини, често присъстват в много голям динамичен обхват (106); по този начин, реагенти, които биха могли да имат висок афинитет за един белтък, но са ниски афинитет към друг все още ще имат за откриване на по-нисък афинитет протеин, ако тя е много по-преобладаващи (9) . One group investigated the ability of 115 well-characterized antibody–antigen pairs to react in high-density microarrays on modified glass slides. Една група разследвани способността на 115-добре характеризира антиген-антитяло двойки да реагира по-висока плътност microarrays за промяна стъкло пързалки. 30% of the pairs showed the expected linear relationships, indicating that a fraction of the antibodies were suitable for quantitative analysis (33). 30% от двойки показа очакваното линейни връзки, което показва, че част от антителата са подходящи за количествен анализ (33). Many groups have been using sandwich assays to avoid this problem. A sandwich assay is performed by spotting the first antibody on the array and then detecting the using a second antibody that recognizes a different part of the proteins. Много групи са били използване на сандвич-тестове за да се избегне този проблем. A сандвич тест се изпълнява от spotting първото антитяло от масив и след това откриване на използване на второ антитяло, че признава различна част от протеини. This approach dramatically increases the specificity of the antigen detection, but required that a least two high-quality antibodies exist for each antigen to be detected (8). Този подход драстично увеличава специфичността на откриване на антиген, но се изисква, че поне две висококачествени антитела съществуват за всеки антиген, за да бъдат открити (8).
Next: Antibody Microarrays: Problems and Solutions Следваща: Antibody Microarrays: проблеми и решения
References for Protein and Antibody Microarrays Препратки за протеин и Antibody Microarrays
Back to: Връщане:
Introduction and Background to Protein Chips and Antibody Chips. Въведение и на фона на протеини чипове и Antibody Чипове.
Types of Antibody and Protein Chips Видове на антитела и протеини Чипове
Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | ©2005-2007 Molecular Station.com, All rights reserved. Отговорности / Условия за ползване | Поверителност | © 2005-2007 молекулярна Station.com, Всички права запазени.
Send this page to a friend Изпратете страницата на приятел
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
