Welcome to Molecular Station! Добре дошли в молекулярна станция!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Трябва да се регистрирате преди да можете да публикувате на нашите форуми, или да използвате допълнителни функции. Register Now! Регистрирайте се! Its Free and Fast! Тяхното свободно и бързо!

Already registered? Вече сте регистрирани? Login now below. Вход за сега по-долу.

User Name: Име:

Password: Парола:

Remember Me? Запомни ме?

Already registered and Forgot your password? Вече сте регистрирани и Забравили сте паролата си? Click below to recover it. Кликнете по-долу, за да го възстанови.

Recover Lost Password Забравена Забравена парола

Join now - it's fast and free! Присъединете се към момента - това е бързо и безплатно!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Молекулярна станция е най-голямата мрежа от изследователи, учени и любители на науката навсякъде!

Recent Forum Posts Нова Форум постове

Bookmark Bookmark Site Bookmark Bookmark сайт

PCR Based Site Directed Mutagenesis PCR базиран сайт, насочени мутагенеза

Polymerase Chain Reaction Site Mutagenesis Полимеразноверижна реакция сайт мутагенеза

Learn about PCR based site directed mutagenesis. Научете повече за PCR базиран сайт, насочени мутагенеза.

(Refer to Diagram Below) (Обърнете се към Долната диаграма)

Begin first with a plasmid containing a gene with a TAC tyrosine codon that we want to alter to a TTC phenylalanine codon. Започнете първо с плазмида, съдържащи един ген, с ТАС тирозин codon, че ние искаме да се променят до TTC фенилаланин codon. In order to accomplish this we need to change the AT pair (blue) in the original to a TA pair. За да се направи това ние трябва да се промени при деца (син) в оригинал на ТС двойка. This plasmid was isolated from a normal strain of E.coli that methylates the As of GATC sequences. Това беше изолирана от плазмид нормална щам на E.coli, че methylates на Както на GATC последователности. The methyl groups are indicated in yellow. В метил групи са в жълто. The following steps are performed to accomplish this: В следващите стъпки се изпълняват да се направи това:

• Heat the plasmid to separate its strands. Жега на плазмида за отделяне му направления.
• We then anneal mutagenic primers that contain the TTC codon, or its reverse complement, GAA. Ние тогава anneal мутагенни грундове, които съдържат TTC codon, или неговото обратно допълни, GAA. The altered base in each primer is indicated in pink. В променя във всяка база първо се посочва в розово.
• We then perform a few rounds of PCR (about 8) with the mutagenic primers to amplify the plasmid with the altered codon. Ние след това да извършите няколко кръга на PCR (около 8), с мутагенни грундове да се разширят на плазмид с променен codon. We use a heat stable DNA polymerase, such as Pfu polymerase, to minimize mistakes in copying the plasmid. Ние използваме топлинна стабилна ДНК полимеразноверижна, като Pfu полимеразноверижна, за да сведете до минимум грешките при копиране на плазмида.
• We then treat the DNA in the PCR reaction with DpnI to digest the methylated wild-type DNA. Ние тогава лечение на ДНК в PCR реакция с DpnI да дайджест на methylated дивия тип ДНК. Since the PCR product was made in vitro, it is not methylated and is not cut. Тъй като PCR продукт беше направено ин витро, не е methylated и не отрязани. Lastly we transform E. coli cells with the treated DNA. На последно място сме трансформира Д. коли клетки, третирани с ДНК. In principle, only the mutated DNA survives to transform. По принцип, само за мутирали ДНК надживява да се променим. This is checked by sequencing the plasmid DNA from several clones. Това е проверена от плазмида секвениране на ДНК от различни клонове.



Factors for a Successful PCR Фактори за успешен PCR

Can't Find Your Problem? Не можете да намерите Вашия проблем? Make sure you see the PCR Forum for PCR troubleshooting and solutions to common problems. Уверете се, че сте видите PCR форум за PCR за отстраняване на проблеми и решения на общи проблеми. You can also post questions to other researchers by simply registering and then clicking on Post New Thread or the question mark below! Можете също така да публикувате въпроси на други изследователи, просто се регистрирате и след това щракнете върху Публикуване на Нова тема, или въпросителен знак по-долу!

PCR Articles PCR членове

PCR Troubleshooting PCR Проблеми?

PCR History PCR История

PCR Primer Design PCR първия дизайн

Primer Extension Primer Разширение

PCR Enzymes PCR Ензими

Factors for Successful PCR Фактори за успешен PCR

PCR Based Site Directed Mutagenesis PCR базиран сайт, насочени мутагенеза

Analysis of PCR Reactions Анализ на PCR реакции

Real Time PCR PCR в реално време

Mutagenesis Forum Topics Мутагенеза Форум Теми

Threads Теми
Thread Title / Poster Нишката Звание / постер	Last Post Последно мнение	Replies Отговори	Views Прегледи
please help me-basic information about site-directed mutagenesis PCR моля, помогнете ми-основна информация за сайтове, насочени мутагенеза PCR trypsin трипсин	05-01-2008 06:21 PM 05-01-2008 06:21 ч. by kmunson779 » от kmunson779 »	1	145
site directed mutagenesis using Invitrogen Genetailor мутагенеза, насочена сайт използвайки Invitrogen Genetailor satishreddy27 satishreddy27	06-19-2007 03:34 PM 06-19-2007 03:34 ч. by satishreddy27 » от satishreddy27 »	0	526

You must REGISTER NOW to post a help question in the Gel Electrophoresis Forum. Вие трябва да се регистрирате сега, за да публикувате помогне въпрос в гел-електрофореза форум. Login now if you have already registered. Вход за сега, ако вече сте регистрирани.

PCR Forum Topics PCR Форум Теми

Rt-pcr In RT-PCR ,wih bandf of my intrest we also got two extra light band.how can i improve my result.should i decrease my primer concentration?or should i... RT-pcr В RT-PCR, wih bandf на моя интерес, ние също получи две допълнителни светлината band.how мога да подобря моето result.should и намаляване моето първо концентрация? Или да i. ..
GSTP1 promotor - unspecific product Hello, I have a problem with interpretation of PCR products’ length. GSTP1 Промотор - unspecific продукт Здравейте, Имам проблем с тълкуването на PCR продукти "дължина. The length of a template DNA sequence (human GSTP1 promotor) is about 1650bp... Дължината на шаблон ДНК последователност (човешки GSTP1 Промотор) е около 1650bp ...
New to PCR techniques Hello there! Нови техники за PCR Здравейте там! my name is 'Dare and I'm doing my undergraduate project on Genetic characterization of chickens with mtDNA. моето име е "Детски игри и съм това ми Бакалавърския проект за генетични характеристики на пилетата с mtDNA. I would really appreciate... АЗ уж действително оценявам ...
PCR Troubleshooting Guide Hi everyone, we are trying to setup a PCR Troubleshooting Guide. PCR Ръководство за отстраняване на проблеми с висока всички, които се опитват да задайте PCR Ръководство за отстраняване на проблеми. Please help by posting common problems and their solutions here. Моля, помогнете чрез публикуване на общи проблеми и техните решения тук. thanks:notworthy: благодаря: notworthy:
PCR contamination I have a problem during PCR program. PCR заразяване Имам проблем по време на PCR програма. add templete DNA, dNTP, primer, polymerase, etc..to ep tube. добави templete ДНК, dNTP, първо, полимеразноверижна и др. тръба на ЕП. then I forgot to add oiling UU:mellow: so.. След това Забравих да добавите oiling делител: мек: така .. I... I. ..
PCR, incomplete products? Hello, I am using iproof high-fedility polymerase to amplify a DNA fragment 6kb in size from a genome. PCR, непълна продукти? Здравейте, аз съм използвайки iproof високо fedility полимеразноверижна да се разширят ДНК фрагмент 6kb в размер от генома. With Taq that's almost impossible but iproof... С Taq това е почти невъзможно, но iproof ...
PCR Inhibition by DNA HELLO ALL! PCR инхибиране от ДНК, здравей на всички! I have a big pcr problem. Имам голям проблем pcr. I am trying to conduct a pcr using plasmid DNA I purified using a Qiagen midi kit. Аз съм се опитват да проведат pcr използване на плазмида ДНК I пречистена чрез Qiagen midi кит. I am using this DNA to make... Аз съм използвате тази ДНК, за да ...
plz help in these questions 1-What dNTP do for PCR ? plz помагам на тези въпроси в 1-Какво dNTP направи за PCR? 2- My PCR samples stay at the top of the agarose gel while the ladder showed a complete run? 2 - Моят PCR проби на гостите в началото на agarose гел, докато лика показа пълния работи?
Re-PCR trouble Hello everyone. Re-PCR проблеми Здравейте всички. I am trying to amplify a gene, and at the same time to introduce point mutations, to enable the digestion with a specific enzyme of... Аз съм се опитват да разширят ген, и в същото време да се въведе точка мутации, за да даде възможност на храносмилането със специфичен ензим от ...
Volume Loss during PCR?!! So I run my PCR tubes for 30 cycles with a volume of 15ul. Том Загуби по време на PCR?! Така че пускам моите PCR тръби в продължение на 30 цикъла, с обем на 15ul. All capped tightly, but I end up with 8-10 ul volume after PCR. Всички таван плътно, но до края с 8-10 ул обем след PCR. I tried spinning them down... Аз се опитах предене ги ...
You must REGISTER NOW to post a question in the PCR Forum by clicking Вие трябва да се регистрирате сега, за да публикувате въпрос във форума, като щракнете PCR here . тук.

View More PCR discussions and troubleshooting in the: PCR Forum Преглед Още PCR дискусии и отстраняване на неизправности в: PCR форум

Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | ©2005-2007 Molecular Station.com, All rights reserved. Отговорности / Условия за ползване | Поверителност | © 2005-2007 молекулярна Station.com, Всички права запазени.

Send this page to a friend Изпратете страницата на приятел