Welcome to Molecular Station! Добре дошли в молекулярна станция!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Трябва да се регистрирате преди да можете да публикувате на нашите форуми, или да използвате допълнителни функции. Register Now! Регистрирайте се! Its Free and Fast! Тяхното свободно и бързо!

Already registered? Вече сте регистрирани? Login now below. Вход за сега по-долу.

User Name: Име:

Password: Парола:

Remember Me? Запомни ме?

Already registered and Forgot your password? Вече сте регистрирани и Забравили сте паролата си? Click below to recover it. Кликнете по-долу, за да го възстанови.

Recover Lost Password Забравена Забравена парола

Join now - it's fast and free! Присъединете се към момента - това е бързо и безплатно!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Молекулярна станция е най-голямата мрежа от изследователи, учени и любители на науката навсякъде!

Recent Forum Posts Нова Форум постове

Membrane Hybridization to Screen a Library Мембрана хибридизация на екрана библиотека

Screening Libraries using Membrane Hybridization Прожекция на библиотеките чрез мембрана хибридизация

Under the conditions of temperature and ion concentration found in cells, DNA is maintained in a duplex (two-stranded) structure by the hydrogen bonds that form betwen the A and T bases and G and C bases in each strand. При условията на температура и йонна концентрация в клетки, ДНК се запазва в дуплекс (две усукани) структура от водородни връзки, които образуват betwen А и Т бази и G и C бази във всяка една нишка. DNA duplexes can be denatured into single strands by heating them, usually in a dilute salt solution (eg, 0.01 M NaCl), or by raising the pH above 11. ДНК duplexes може да бъде денатуриран направления в едно от тях отопление, обикновено в размиване на сол разтвор (например, 0,01 M NaCl), или чрез повишаване на рН над 11. If the temperature is lowered and the ion concentration in the solution is raised, or if the pH is lowered to neutrality, the AT and GC base pairs reform between complementary single strands. Ако температурата е понижен и йонна концентрация на разтвора е повдигнат, или ако рН е понижена до неутралност на АТ и GC база двойки реформата между допълват едно направления.

This process goes by many names: renaturation, reassociation, hybridization, annealing. Този процес върви с много имена: renaturation, reassociation, хибридизация, annealing. In a mixture of nucleic acids, only complementary single strands (or strands containing complementary regions) will reassociate; the extent of their reassociation is virtually unaffected by the presence of noncomplementary strands. В смес от Нуклеинова киселини, само допълват едно направления (или направления, съдържащи допълнителни региони) ще reassociate; степента на тяхната reassociation е почти незасегнати от наличието на noncomplementary направления. Such molecular hybridization can take place between two complementary strands of either DNA or RNA, or between an RNA strand and a DNA strand. Такива молекулно хибридизация може да се осъществи между двете взаимно допълващи се направления на някоя ДНК и РНК, или между една нишка РНК и ДНК нишка. To utilize molecular hybridization in the detection of specific DNA clones, single stranded DNA from recombinant DNA molecules is attached to a solid support, commonly a nitrocellulose filter or treated nylon membrane. Да се използват молекулярната хибридизация при откриване на специфични ДНК клонове, единични изолирани ДНК от рекомбинантна ДНК молекули е приложен към една солидна подкрепа, често един nitrocellulose филтър или третирани найлон мембрана. When a solution containing single0stranded nucleic acids is dried on such a membrane, the single strands become irreversibly bound to the solid support in a manner that leaves most of the bases available for hybridization to a complementary strand. Когато разтвор, съдържащ single0stranded Нуклеинова киселини е сух на такава мембрана, единната направления стане необратимо обвързване на солидна подкрепа по начин, който оставя повечето от наличните бази за хибридизация на допълнителни нишка. Although the chemistry if this irreversible binding is not well understood, the procedure is very useful. Макар и химия, ако това не е необратим задължителен добре се разбира, процедурата е много полезно. The membrane is then incubated in a solution containing radioactively labeled single-stranded DNA (or RNA) that is complementary to some of the nucleic acid bound to the membrane. В мембрана се инкубират в разтвор, съдържащ radioactively означени с един усукана ДНК (или РНК), която е в допълнение към някои от Нуклеинова киселина обвързана с мембрана.

Under hybridization conditions (near neutral pH, 40-65 C, 0.3-0.6 M NaCl), this labeled probe hybridizes to the complementary nucleic acid bound to the membrane. Под хибридизация условия (близо до неутрална рН, 40-65 С, 0.3-0.6 M NaCl), това с надпис на проби hybridizes на допълнителни Нуклеинова киселина обвързана с мембрана. Any excess probe that does not hybridize is washed away, and the labeled hybrids are detected by autoradiography of the filter. Всяко надвишаване на проби, които не hybridize се измиват веднага, както и с надпис хибриди са открити от autoradiography на филтъра. The recombinant lamda virions present in plaques of a lawn of E. coli are transferred to a nylon membrane by placing the membrane on the surface of the petri dish. В рекомбинантен lamda virions момента в плаки на тревата на E. коли се прехвърля в найлон мембрана чрез поставяне на мембрана върху повърхността на Петри антена. Many of the viral particles in each plaque absorb to the surface of the membrane, but many virions remain in the plaques on the surface of the nutrient agar in the petri dish containing a large number of individual lamda clones is reproduced on the surface of the membrane. Много от вирусни частици във всяка пластина поглъща до повърхността на мембрана, но много virions остават в плаки върху повърхността на хранителен агар в блюдо на Петри, съдържащи голям брой индивидуални lamda клонове е възпроизведен върху повърхността на мембрана .

The original petri dish is refrigerated to store the collection of lamda clones. Оригиналът на Петри ястие е в хладилни камери за съхранение на събирането на lamda клонове. The membrane is then incubated in an alkaline solution, which disrupts the virions, releasing and denaturing the encapsulated DNA. В мембрана се инкубират в алкален разтвор, който нарушава от virions, освобождаване и денатуриране на капсулирани ДНК. The membrane is then dried, fixing the recombinant lamda DNA to the membrane's surface. В мембрана е после сух, определяне на рекомбинантна ДНК lamda за мембрана повърхност. Next, the membrane is incubated with a radiolabeled probe under hybridization conditions. След това, в мембрана е инкубатор с radiolabeled сонда при хибридизация условия. Unhybridized probe is washed away, and the filter is subjected to autoradiography. Unhybridized сонда се измиват веднага, а филтъра е подложен на autoradiography.

The appearence of a spot on the autoradiogram indicates the presence of a recombinant lamda clone containing DNA complementary to the probe. Появата на едно място на autoradiogram показва наличието на рекомбинантна ДНК, съдържащи lamda клонинг допълнение към сонда. The position of the spot on the autoradiogram corresponds to the position on the original petri dish where that particular clone formed a plaque. Позицията на място за autoradiogram съответства на позицията на оригиналната антена, където Петри, че специално клонинг формирали плака. Since the original petri dish still contains many infectioua virions in each plaque, viral particles from the identified clone can be recovered for replacing by aligning the autoradiogram and the petri dish and removing viral particles from the clone corresponding to the spot. От първоначалния блюдо Петри все още съдържа много infectioua virions във всяка пластина, вирусни частици от идентифицирани клонове могат да бъдат възстановени за замяна с Присъединяване на autoradiogram и Петри антена и премахване на вирусните частици от клонинг, съответстваща на място. A similar technique can be applied for screening a plasmid library in E.coli cells. Подобна техника може да бъде приложена за скрининг един плазмида библиотека в E.coli клетки.