Welcome to Molecular Station! Добре дошли в молекулярна станция!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Трябва да се регистрирате преди да можете да публикувате на нашите форуми, или да използвате допълнителни функции. Register Now! Регистрирайте се! Its Free and Fast! Тяхното свободно и бързо!

Already registered? Вече сте регистрирани? Login now below. Вход за сега по-долу.

User Name: Име:

Password: Парола:

Remember Me? Запомни ме?

Already registered and Forgot your password? Вече е регистриран и Забравили сте паролата си? Click below to recover it. Кликнете по-долу, за да го възстанови.

Recover Lost Password Забравена Забравена парола

Join now - it's fast and free! Присъединете се към момента - това е бързо и безплатно!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Молекулярна станция е най-голямата мрежа от изследователи, учени и любители на науката навсякъде!

Recent Forum Posts Нова Форум постове

Bookmark Bookmark Site Bookmark Bookmark сайт

Agar Plates Bacterial Culture Агар табели бактериална култура

Information on the Growth of Bacterial Cultures using Agar Culture Plates Информация за растеж на бактериални култури чрез агар Култура Ламарина

Table of Contents: Таблица Съдържание:

Agar Plate and Agar Media Troubleshooting and Forum Topics Агар агар табела и медиите за отстраняване на проблеми и теми, форум

Related Microbiology Articles Свързани микробиология членове

Join the Microbiology Newsletter ! Присъединете се към микробиология бюлетин!

What is Agar - Definition? Какво е агар - Определяне?

Agar or agar-agar (from a Malay word meaning " vegetable"), the substance which is used in preparing one kind of solid culture medium for bacteriological work, is a pro duct prepared from various seaweeds found near the Indian Ocean and in Chinese and Japanese waters. Агар или агар-агар (от малайски думата означава "зеленчуци"), веществото, което се използва при изготвянето на един вид твърди култура носител за бактериологично работа, е за тръбата, приготвени от различни водорасли намерени близо до Индийския океан и в китайски и Японски води. This type of seaweed has several common names, as Ceylon or Jaffna moss, Bengal isinglass, etc. Various species are used for food and the trade is considerable. Този вид морски водорасли има няколко общи имена, както Ceylon или Jaffna Мос, Бенгалия isinglass и др различните видове се използват за храна, а търговията е значителен.

Background and History on Microbiology using Agar Nutrient Broth and Plates Исторически преглед и история по микробиология използвайки агар хранителен бульон и плочи

Payen, a French chemist -(about 1859), obtained the agar jelly from the seaweed, Gelidium corneum, in the following manner : The seaweed was allowed to stand for some time in a cold dilute solution of hydrochloric acid; the acid was removed by rinsing several times with water, then the seaweed was placed in a cold dilute solution of ammonia; next the ammonia was removed by repeated rinsing with cold water. Payen, френски химик - (около 1859), получил агар желе от морски водорасли, Gelidium corneum, по следния начин: В морски водорасли бе позволено да бъдат за известно време в една студена размиване на разтвор на солна киселина; на киселина бе премахната от изплакване с вода няколко пъти, тогава водорасло бе поставен в студена размиване на разтвор на амоняк; напред на амоняк бе премахната от повтарящи се изплакване със студена вода. During this process, the seaweed lost 53% of its weight in mineral salts, coloring matter, and organic constituents. По време на този процес, морски водорасли загубили 53% от теглото му в минерални соли, Блокчета за оцветяване въпроса, както и органични съставки. The remaining portion was boiled in water, during which process the vegetable jelly was extracted. Останалата част е сварен във вода, през който обработва зеленчуци млечице е извлечена. The solution so obtained was poured off, leaving the useless sediment behind. Разтворът се излива така, получени на разстояние, оставяйки зад безполезен седименти. This jelly is the same in composition as that existing in the vegetable tissues; it has not been changed chemically, as is collagen in the preparation of gelatin. Това млечице е същият като този, в състава на съществуващите в растителни тъкани; тя не е била променена по химичен път, както е колаген в подготовката на желатин. The commercial agar is most probably prepared by evaporating this solution to dryness by different means. Търговският агар е най-вероятно това evaporating, изготвен от решение за сухота по различни начини.

Agar usually comes into the hands of the bacteriologist as long, slender, grayish-white strips, or as blocks, or more especially in recent years, in the form of a gray-white pow der of European manufacture. Агар обикновено идва в ръцете на bacteriologist толкова дълго, тънки, сиво-бели ивици, или като блокира, или повече, особено в последните години, във формата на сиво-бял pow дер на Европейския производство.

Agar, in contrast with gelatin, is a carbohydrate, ie, it consists of a combination of carbon, hydrogen and oxygen only. Агар-агар, в контраст с желатин, е въглехидрати, т.е. тя се състои от комбинация от въглерод, водород и кислород, само. Traces of nitrogen are present as impurities. Следи от азот присъстват като примеси. The above qualitative determinations of its elementary constit uents were made by Payen, by Parumbaru and by Hueppe, who made their determinations on agar from different sources. Горните качествени решения на неговите елементарни constit uents бяха направени от Payen, като Parumbaru и от Hueppe, които направи своите заключения относно агар от различни източници. As far as can be ascertained, its empirical formula has not yet been investigated to any extent. Що се отнася да могат да бъдат установени, неговата емпирична формула, все още не е разследван за всяка степен.

Like gelatin, however, agar is a reversible colloid. Както и желатин, обаче, агар е обратим colloid. It soaks up in cold water, dissolves in hot water after a long boiling to a tasteless and odorless clear solution, and solid ifies upon cooling to a more or less opaque jelly. Той soaks в студена вода, разтваря в топла вода, след дълго варене на tasteless и odorless ясно решение, и твърди ifies при охлаждане с повече или по-малко непрозрачни желе. Its watery solution is neutral or nearly neutral to phenol phthalein; still, a drop or two of twentieth normal sodium hydrate is sufficient to make the pink color perceptible. Неговото решение е watery неутрални или почти неутрални към фенол phthalein; още, спад или две от двадесетия нормален натриев хидрат е достатъчно да се направи розов цвят усеща.

The colloidal properties of agar are not destroyed by a long-continued heating at a high temperature, nor by the action of ordinary microorganisms as are those of gelatin. В колоиден свойства на агар не са унищожени по-дълго продължава отопление на висока температура, нито от действията на обикновени микроорганизми, каквито са тези на желатин. The above properties, however, are influenced and may be wholly impaired by the reaction of the liquid in which the agar is dissolved. Споменатите по-горе свойства, обаче, се влияят и могат да бъдат изцяло нарушени от реакцията на течността, в която се разтваря агар.

The reaction of the liquid, ie, whether it is acid or alkaline, influences the agar as to its solubility, solidity, color, transparency, filterability and amount of condensa tion water. Реакцията на течност, т.е. дали е киселина или алкална, влияе върху агар, че да му разтворимостта, солидност, цвят, прозрачност, filterability и размера на condensa ление вода. If agar is dissolved in a liquid of an acidity equivalent to 0.1% HC1, the agar dissolves very readily, filters quickly, the resultant filtrate being a light yellow, transparent, slippery, watery solution which does not solidify upon cooling. Ако агар е разтворен в течност на киселинност, еквивалентни на 0,1% HC1 на агар разтваря много лесно, филтри бързо, произтичащите от филтърни е светло жълт, прозрачен, хлъзгави, watery решение, което не solidify при охлаждане. If a smaller percentage of hydro chloric acid is used, solidification occurs (below 40 C.) but the jelly will not " stand up " and is therefore useless for agar slant or plate cultures. Ако по-малък процент на хидро chloric киселина се използва, солидификационно се случва (под 40 в.), но желе, няма да "стоят" и следователно е безполезен за агар наклон или табела култури. A large amount of con densation water is present also. А голямо количество вода се уча densation момента също.

If agar is dissolved in a weak alkaline or neutral broth, a thick, reddish-brown, viscous liquid is obtained which filters slowly and solidifies quickly at 40 C., to a very solid, opaque, dry jelly, having but little condensation water; it retains its shape well in slants and in plates. Ако агар се разтваря в слабо алкална или неутрална бульон, гъста, червеникаво-кафяв цвят, Съществително име е получено, филтри, които бавно и solidifies бързо на 40 в., до много твърди, непрозрачни, сухота в желе, като кондензация, но малко вода; тя запазва своята форма и в slants и табели. Thus the value of the agar as a solid culture medium is raised or lowered according to the cjegree of alkalinity or acidity. По този начин стойността на агар-агар, както солидна култура носител е повдигнато или понижена в зависимост от cjegree на киселинност или алкалност.

It must be noted in addition, however, that when once the solidifying property of agar is destroyed by the presence of an excess of acid in its solution, this property can never be regained by neutralization with alkali; the acid per manently destroys the reversibility of the colloid. Той трябва да се отбележи, освен това, обаче, че когато веднъж на solidifying собственост на агар е разрушен от наличието на повече от киселина в своето решение, тази собственост не могат да бъдат отново от неутрализация с алкални; на киселина на manently разрушава на reversibility на на colloid.

The melting-point of agar (of 1.5% in neutral solution) is 97 C. and although its solidifying point is at 40 C., when once it has solidified it will stand up in the thermostat at a temperature of 50 C. For bacteriological purposes, only that form of agar can be used which remains fluid at from 38 to 40 C. Agar which remains fluid only at a temperature above this point would be too hot when in a fluid state for use; the vitality of organisms introduced would be impaired or destroyed by the high temperature. В точката на топене-агар (от 1,5% в неутрален разтвор) е 97 в. и въпреки че му solidifying точка е на 40 в., когато веднъж тя е втвърдено тя ще стане в термостат при температура от 50 В. за бактериологично цели, само че под формата на агар може да се използва течност, която остава в от 38 до 40 агар В. течност, която остава само при температура над тази точка ще бъде много горещо, когато в една течност-членка за употреба; жизнеността на организми, ще бъде въведена увредени или унищожени от високата температура.

Advantages and Disadvantages as Agar as a Nutrient Media Предимствата и недостатъците, както агар като хранителен Media

Difficulties are encountered in the preparation of a solid culture medium from agar, due to its slow solubility, viscosity and consequent slow filterability. Трудности са възникнали при изготвянето на солидна култура на носител от агар, поради бавното ѝ разтворимостта, вискозитет и последващото бавно filterability. Its solution (digestion) is effected, as mentioned above, by a long heating in a water-bath, steam sterilizer, autoclav, or over a free flame. Неговото решение (храносмилане) се извършва, както е споменато по-горе, от дълго отопление в водата баня, парна Стерилизатори, autoclav, или през свободното пламък. The length of time required for complete digestion depends upon three things: The reaction of the liquid in which the agar is dissolved, the per cent content of agar, and the method of dissolving. Продължителността на времето, необходимо за пълно разграждане зависи от три неща: реакцията на течността, в която се разтваря агар, за процента на съдържание агар, както и метода на разтваряне. The influence of the reaction of agar solutions has been treated above. Влиянието на реакцията на агар решения е била обработена-горе. For general culture use, however, ordinary agar is made +15 Fuller's scale (agar solidifies with difficulty above +30 Fuller's scale). За обща култура употреба, обаче, обикновените агар се прави +15 Фулър на скалата (агар solidifies с трудност над +30 Фулър на скалата).

One per cent agar is much more easily soluble under equal conditions than a higher per cent. Един на сто агар е много по-лесно разтворими при равни условия по-висока, отколкото на сто. One and one half per cent is the amount used in ordinary agar media, giving a somewhat stiffer and thus more desirable jelly. Един и едната половина на сто е сумата, която използва в обикновените медии агар, което води до известна степен stiffer и по този начин повече желателно желе.

Agar is digested most rapidly over a free flame. Агар digested е най-бързо през свободното пламък. If not heated sufficiently, after the filtration and sterilization of the agar by the intermittent method, a flocculent precip itate frequently appears in the previously clear medium. Ако не се нагрява достатъчно, след филтрация и стерилизация на агар от интермитентна метод, един flocculent precip itate често се появява в страницата ясни носител. This can be made to disappear in most cases by subjecting to the temperature of the autoclav (120 C. 15 Ibs.). Това може да се направи за да изчезнат в повечето случаи от подложи на температурата на autoclav (120 В. 15 Нас.).

Agar for culture media should be entirely clear when liquid, and homogeneously opaque-translucent when solid; it should have a translucence sufficient to allow deep colonies on plates or stab cultures to be observed readily; it should not contain flocculent material, sediment, or pieces of cotton or filter paper, as these hinder typical colony development of microorganisms and, to the inexperienced, may some times be mistaken for colonies. Агар за култура, медии трябва да бъде напълно ясно, когато течността, и непрозрачни хомогенно-прозрачна, когато твърди, то трябва да има достатъчен, за да позволи translucence дълбоко колонии на плочи или хладно култури, които трябва да се спазват лесно, то не трябва да съдържа flocculent материал, утайка, или на парчета от памук или филтриране на хартия, тъй като те пречат на типични колонии и развитието на микроорганизми, с неопитни, могат да бъдат сбъркани няколко пъти за колонии.

In the first methods ever used for making agar culture media, instead of filtering the hot agar through filter paper, absorbent cotton, or asbestos, it was allowed to cool, during which process the sediment settled to the bottom; when solid the sediment was cut off. В първия методи все по агар-агар, използвани за извършване на културата медиите, вместо на филтриране на гореща агар през филтъра на хартия, памук, гъста, или азбест, бе позволено да се охлади, през който урежда процеса на седименти на долната част; когато твърди в седименти бе рязани отдалечаване. This method was not desirable, as the clearness of the resultant agar would depend upon the rate of cooling; the slower the cooling, the more completely would sedimentation take place. Този метод не е желателно, тъй като clearness на произтичащите от агар ще зависят от степента на охлаждане; на бавен за охлаждане, толкова по-пълно утаяване ще се осъществи.

Agar is not a food for microorganisms in general, ie, it is not affected by the digestive enzymes of most bacteria, as is gelatin. Агар не е храна за микроорганизми като цяло, т.е. тя не е засегната от храносмилателни ензими, на повечето бактерии, тъй като е желатин. However, a few bacteria are known which have the power of liquefying agar, among which are B. gelaticus n. Въпреки това, някои бактерии са познати, които имат правомощието на liquefying агар, сред които са Б. gelaticus n. sp. сп. (gran) and Bad. (голям) и лоши. Nenckii, both of which are found, as would be expected, in sea water. Nenckii, и двата от които са открити, тъй като може да се очаква, в морската вода. This compara tive inertness of agar renders it valuable for the preparation, of solid synthetic media, the value of which may be en hanced by subjecting the commercial agar to natural fermentation during which process any traces of avail able food substances are used up by the microorganisms present. Това compara директива inertness на агар го прави ценен за подготовка, на твърди изкуствени медии, стойността на които могат да бъдат в hanced от подложи на търговските агар до естествена ферментация, през които всеки процес се следи от хранителни вещества, могат се използват от микроорганизми настояще. (Beijerinck.)

Agar is of special use in bacteriological work in which the cultivation of microorganisms must be conducted at a temperature above the melting-point of gelatin. Агар е от особено при използване на бактериологично, които работят в отглеждането на микроорганизми, трябва да се проведе при температура над точката на топене-желатин. This feature has made possible the great strides that have been taken in medical bacteriology, as many pathogenic bacteria can be isolated and grown only with difficulty at tempera tures below that of the body. Тази функция е направила възможно по-големи усилия, които са били взети в медицинската микробиология, тъй като много патогенни бактерии да бъдат изолирани и отглеждат само с трудности при темпера tures под тази на тялото.

EXERCISE 9. Учението 9. PREPARATION OF NUTRIENT AGAR Подготовката на хранителен агар

Apparatus. Машина. 3.5 liter agate-ware pail; 15 gms. 3,5 литра Ахат-фаянс Кофа; 15 гросмайсторите. Agar; 10 gms. Агар; 10 гросмайсторите. Peptone; 5 gms. Peptone; 5 гросмайсторите. Salt; 10 gms. Сол; 10 гросмайсторите. Egg albumen (or one egg); 500 cc sterile meat infusion; 500 cc tap water; titration apparatus; N/20 NaOH; N/l NaOH; phenol phthalein (indicator); distilled water; large funnel; plaited filter paper; filling funnel; sterile test tubes; sterile liter flask; coarse balances; large gas burner; 1 liter measuring cup; apparatus for steam sterilization. Яйце albumen (или едно яйце); 500 вв стерилни месо инфузия; 500 вв чешмата вода; титриране апарати; N/20 NaOH; N / л NaOH; фенол phthalein (показател); дестилирана вода; големи фуниевиден; плетени филтър хартия; попълване фуниевиден ; Стерилни тест тръби; стерилни литра Игла; груби баланси; големи газови записващо устройство; 1 литър измерване на чаша; апарат за парна стерилизация.

Method. Метод. 1. In a 3 liter agate ware pail place 15 gms. В 3 литра Ахат фаянс място Кофа 15 гросмайсторите. Of agar in 500 cc of tap water. От агар в 500 вв на чешмата вода.

2. Wash the agar well, separating the shreds and squeez ing it through the hands. Измийте добре агар, отделяне на парченца и squeez чрез създаването на ръце.

3. Decant the dirty water, measuring the amount poured Decant на мръсни води, за измерване на сумата изливат

42

GENERAL MICROBIOLOGY ОБЩИ микробиология

off; replace with the same amount of clean tap water. разстояние; замени с една и съща сума от чешмата чиста вода.

Repeat. Повторете.

4. Dissolve over a free flame and boil for five minutes, stirring constantly. Разтваря над свободна пламък и варим в продължение на пет минути, бъркаме непрекъснато. The solu tion must be entirely free from lumps of agar. В solu ление трябва да бъдат напълно свободни от натрупване на агар.

5. Add 1% Witte's peptone and 0.5% salt to the boiling agar. Добавяне на 1% Witte на peptone и 0,5% на сол за варене агар.

6. To 500 cc of meat in fusion add 10 gms. До 500 вв на месо в синтез добави 10 гросмайсторите. Of egg al bumen which has been well mixed with 100 cc of tap water. На яйчни Ал bumen, който е добре смесен с 100 вв на чешмата вода. (Put the egg albumen in a tumbler and add enough water to form a paste. Stir until smooth and then add the remain ing water. One egg; well beaten, (Сложете яйцето albumen в tumbler и добавете достатъчно вода за формиране на паста. Разбиваме до гладко и след това добавете остава създаването вода. Яйце; и бити,

FIG. Фиг. 9. Hot Water Funnel for may be substituted.) Mix all Filtering Agar or Gelatin. Топла вода за фуниевиден може да бъде заменен.) Балансиран всички Филтриране агар или Желатин. Thoroughly Подробно

7. Pour the melted agar mixture slowly into the meat infusion, stirring constantly. Наливаме толкова стопената агар смес бавно в месото, вливане, бъркаме непрекъснато. Heat in the autoclav at 120 C. for forty-five minutes or for an hour in flowing steam. Жега в autoclav до 120 В. за четиресет и пет минути или за един час, протичащи в пара.

Note. Забележка. The time for this heating may be lengthened to advantage, but never shortened. Времето за отопление могат да бъдат lengthened да се възползвате, но никога не е съкратен. If agar has not been heated sufficiently before filtration, a flocculent precipitate will form in the tubes upon heating in flowing steam. Ако агар не е загрято достатъчно преди филтрация, един flocculent утайка ще формира в тръби при нагряване, протичащи в пара. In most cases this may be caused to disappear by heating for a short time in the autoclav at 15 Ibs. В повечето случаи това може да се дължи да изчезне от отопление за кратко време в autoclav на 15 Нас.

8. Titrate with N/20 NaOH. Titrate с N/20 NaOH.

9. Adjust the reaction of the medium to +15 with normal NaOH or normal HC1. Регулиране на реакция на средносрочни до +15 с нормална NaOH или нормална HC1. Retitrate and readjust the reaction if necessary. Retitrate и коригира реакция, ако е необходимо.

10. Counterpoise and note the weight. Counterpoise и внимание на теглото.

11. Boil fifteen minutes over a free flame, stirring con stantly, Варим в продължение на петнадесет минути свободно пламък, бъркаме уча stantly,

DUNHAM'S PEPTONE SOLUTION 43 DUNHAM НА PEPTONE РЕШЕНИЕ 43

12. Counterpoise and make up any loss in weight with boiling distilled water. Counterpoise и да започне каквато и загуба на тегло, варене с дестилирана вода.

13. Filter boiling hot through plaited filter paper just previously washed with boiling water. Филтриране на кипене горещо през плетени филтър хартия само преди това се измиват с вряща вода. Pass the filtrate through the same paper until clear. Преминаване на филтърни чрез една и съща книга, докато ясни.

14. Fill 60 to 70 sterile test tubes, using approximately 8 cc of the medium for each tube. Попълнете 60 до 70 стерилни тест тръби, като се използват около 8 вв на носител за всяка тръба.

15. Heat in flowing steam twenty minutes on three suc cessive days. Жега в течаща пара двадесет минути на три suc cessive дни.

16. At the end of the final heating, place the tubes of agar in an inclined position to solidify (do not allow the medium to touch the plug) so that a large surface is pre sented for the cultivation of microorganisms. В края на окончателния отопление, мястото на тръби с агар в наклонена позиция да solidify (не позволяват на средно докосване куплунга), така че голяма повърхност е предварително sented за отглеждане на микроорганизми. These are called agar slants. Те са наречени агар slants.

Note. Забележка. If agar tubes are to be used only for agar slants, less of the medium is needed in the tube than when they are to be used for plating. Ако агар тръби трябва да се използва само за агар slants, по-малко от носителя, е необходимо в тръбата, отколкото, когато те трябва да бъдат използвани за метализация.

17. To sterilize a large flask of agar, heat for thirty minutes on four successive days. До sterilize голяма Игла на агар-агар, топлина за тридесет минути на четири последователни дни.

References for Agar Bacterial Culture Препратки за агар бактериална култура

SMITH, ERWIN F.: Bacteria in Relation to Plant Diseases. Smith, Ервин F.: Бактерии във връзка с болестите по растенията. Vol. I, Аз,

pp. кн. 31-36. Several illustrations. Няколко илюстрации. SCHULTZ, NK: Zur Frage von der Bereitung einiger Nahrsubstrate. Шулц, НК: Zur Frage фон дер Bereitung einiger Nahrsubstrate.

Cent. Цент. F. Bakt. F. Bakt. I. Orig., Bd. I. Orig., Bd. 10, 1891, p. 10, 1891, стр. 57.