Welcome to Molecular Station! Добре дошли в молекулярна станция!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Трябва да се регистрирате преди да можете да публикувате на нашите форуми, или да използвате допълнителни функции. Register Now! Регистрирайте се! Its Free and Fast! Тяхното свободно и бързо!

Already registered? Вече сте регистрирани? Login now below. Вход за сега по-долу.

User Name: Име:

Password: Парола:

Remember Me? Запомни ме?

Already registered and Forgot your password? Вече сте регистрирани и Забравили сте паролата си? Click below to recover it. Кликнете по-долу, за да го възстанови.

Recover Lost Password Забравена Забравена парола

Join now - it's fast and free! Присъединете се към момента - това е бързо и безплатно!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Молекулярна станция е най-голямата мрежа от изследователи, учени и любители на науката навсякъде!

Recent Forum Posts Нова Форум постове

Automated Edman Degradation Автоматизирана Edman деградация

Amino Acid Sequences can be determined by Automated Edman Degradation Аминокиселина последователности може да се определи чрез автоматизирани Edman Понижаване

The amino acid composition of the peptide is determined.  The peptide is hydrolyzed into its constituent amino acid by heating it in 6 N HCl at 110°C for 24 hours.  Stanford Moore and William Stein showed that amino acids in hydrolysates can be separated by ionexchange chromatography on columns of sulfonated polystyrene and quantitated by reacting them with ninhydrin. В аминокиселина състава на пептид е решена. За пептид е hydrolyzed в избирателната аминокиселина с отоплението, че в 6 N HCl при 110 ° С в продължение на 24 часа. Станфорд Мур и Уилям Stein показа, че аминокиселините в хидролизати може да бъде отделена от ionexchange хроматография върху колоните на sulfonated полистирол и quantitated от тях реагира с ninhydrin.

Amino acids treated this way give an intense blue color, except for praline, which gives a yellow color because it contains a secondary amino group.  The concentration of amino acid in a solution is proportional to the optical absorbance of the solution after heating it with ninhydrin.  This technique can detect a microgram (10nmol) of an amino acid, which is about the amount present in a thumbprint. Аминокиселини, третирани по този начин даде интензивно син цвят, с изключение на praline, която дава жълт цвят, защото тя съдържа средно амино група. Концентрацията на аминокиселините в разтвор е пропорционално на оптични absorbance на разтвора, след отопление с ninhydrin . Тази техника може да се открие един микрограма (10nmol) на една аминокиселина, която е за сума до момента в thumbprint.

As little as a nanogram (10 pmol) of an amino acid can be detected by means of fluorescamine, which reacts with the a-amino group of a highly fluorescent product.  The identity of the amino acid is revealed by its elution volume, which in the volume of buffer used to remove the amino acid from the column. Както е малко като nanogram (10 pmol) на аминокиселините могат да бъдат открити чрез fluorescamine, която реагира с една-амино група от силно луминесцентно продукт. Самоличността на аминокиселина се открива от елуиращия обем, който в обема на буфера използван за премахване на аминокиселини от колоната.

The amino-terminal residue of a protein or peptide can be identified by labeling it with a compound that forms a stable covalent link. В амино-терминал на остатъци от протеин или пептид може да бъде идентифициран чрез етикетиране, че с съединение, което представлява ковалентни стабилна връзка.

Fluorodinitrobenzene (FDNB) was first used for this purpose by Frederick Sanger.  Dabsyl chloride is now commonly used because it forms intensely colored derivatives that can be detected with high sensitivity.  It reacts with an uncharged a-NH2 group to form a sulfonamide derivative that is stable under conditions that hydrolyze peptide bonds. Fluorodinitrobenzene (FDNB) за първи път е използван за тази цел от Фредерик Sanger. Dabsyl хлорид сега е често използван, тъй като формулярите intensely цветни производни, които могат да бъдат открити с висока чувствителност. Той реагира с една uncharged а-NH2 група, да състави sulfonamide дериват, който е стабилно при условия, които hydrolyze пептид облигации.

Although the dabsyl method for determining the amino-terminal residue is sensitive and powerful, it cannot be used repeatedly on the same peptide because the peptide is totally degraded in the acid-hydrolysis step.  Pehr Edman devised a method for labeling the amino-terminal residue and cleaving it from the peptide without disrupting the peptide bonds between the other amino acid residues.  The Edman degradation sequentially removes one residue at a time from the amino end of a peptide.  Phenyl isothiocyanate reacts with the uncharged terminal amino group of the peptide to form a phenylthiocarbamoyl derivative.  Then, under mildy acidic conditions, a cyclic derivative of the terminal amino acid is liberated, which leaves an intact peptide shortened by one amino acid. Въпреки че dabsyl метод за определяне на амино-терминал на остатъци е чувствителен и силен, той не може да се използва многократно по същия пептид, защото пептид е напълно деградирали в киселинно-хидролиза стъпка. Pehr Edman разработят метод за етикетиране на амино-терминал на остатъци cleaving и то от пептид, без да наруши пептид облигации между различни аминокиселини остатъци. Edman на деградация последователно премахва остатъци от един в даден момент от аминокиселини края на пептид. фенил isothiocyanate реагира с uncharged терминал амино група на пептид да образуват phenylthiocarbamoyl един дериват. След това, по силата на mildy кисели условия, едно производно цикличната на терминала аминокиселина е освободена, което оставя един непокътнат пептид съкратена с една аминокиселина.

Analyses of protein structures have been markedly accelerated by the development of sequenators, which are automated instruments for the determination of amino acid sequence.  In a liquid-phase sequenator, a thin film of protein in a spinning cylindrical cup is subjected to the Edman degradation.  The reagents and extracting solvents are passed over the immobilized film of protein, and the released PTH-amino acid is identified by high-pressure liquid chromatography (also called high-performance liquid chromatography, HPLC). Анализите на протеин структури са значително ускорен от развитието на sequenators, които са автоматизирани инструменти за определяне на аминокиселини последователност. В течна фаза-sequenator, тънък филм на протеин в предене цилиндрична чаша се подлага на Edman деградация. Реактиви и добив на разтворители, са преминали през имобилизиран филм на протеин, както и освободени PTH-аминокиселини се идентифицират с високо налягане течна хроматография (наричани също високо-производителни течна хроматография, HPLC).

One cycle of the Edman degradation is carried out in less than two hours.  By repeated degradations, the amino acid sequence of some fifty residues in a protein can be determined.  Gas-phase sequenators can analyze picomole quantities of peptides and proteins.  This high sensitivity makes it feasible to analyze the sequence of a protein sample eluted from a single band of an SDS-polyacrylamide gel. Един цикъл на Edman разграждане се извършва в по-малко от два часа. Чрез многократно degradations на аминокиселини поредица от около петдесет остатъци в протеин може да бъде определена. Газ-фаза sequenators да анализираме picomole количества пептиди и протеини. Тази висока чувствителност го прави възможно да се анализира последователността на протеин елуират проба от една единствена лента на SDS-полиакриламидна гел.