home > dna > sap-shrimp-alkaline-phosphatase-protocol > index.php начало> ДНК> знае-скариди-алкална фосфатаза-протокол> index.php
 |
|---|
You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Трябва да се регистрирате преди да можете да публикувате на нашите форуми, или да използвате допълнителни функции. Register Now! Регистрирайте се! Its Free and Fast! Тяхното свободно и бързо!
Already registered? Вече сте регистрирани? Login now below. Вход за сега по-долу.
Already registered and Forgot your password? Вече сте регистрирани и Забравили сте паролата си? Click below to recover it. Кликнете по-долу, за да го възстанови.
Recover Lost Password Забравена Забравена парола
Join now - it's fast and free! Присъединете се към момента - това е бързо и безплатно!
Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Молекулярна станция е най-голямата мрежа от изследователи, учени и любители на науката навсякъде!
If it's green or wriggles, it's biology. Ако е зелен или wriggles, това е биология. If it stinks, it's chemistry. Ако тя stinks, това е химия. If it doesn't work, it's physics. Ако тя не работи, това е физика. ~Handy Guide to Science ~ Хенди Ръководство за наука
Shrimp alkaline phosphatase or SAP, is an enzyme which catalyzes the dephosphorylation of 5’ phosphates from nucleic acid dephosphorylating RNA or DNA ends. Скариди алкална фосфатаза или SAP, е ензим, който catalyzes на dephosphorylation на 5 'фосфати от Нуклеинова киселина dephosphorylating РНК или ДНК приключва.
Note that PCR products and also primers do not have phosphatases on their free ends, and therefore need to be phosphorylated prior to cloning if you are going to use a de-phosphorylated vector! Имайте предвид, че PCR продукти, а също и грундове не разполагат с phosphatases на свободното им свършва, и следователно трябва да бъдат phosphorylated преди клониране Ако възнамерявате да ползвате де-phosphorylated вектор!
SAP is temperature unstable are therefore you can easily deactivate this enzyme (compared to CIP!). SAP температура е нестабилна поради това лесно можете да деактивирате тази ензим (в сравнение с ПКИ!). SAP is deactivated with 65°C water bath incubation for 15 minutes. SAP е деактивирано с 65 ° С водна баня инкубатор за 15 минути.
You get virtually no reaction. Получава се на практика нито реакция. SAP requires at least 10mM MgCl2 (but optimal enzyme activity of shrimp alkaline phosphatase is at 20-25mM MgCl2) and it works well at pH 8.0. SAP изисква най-малко 10 mm MgCl2 (но оптималната активност на ензима алкална фосфатаза скариди е на 20-25mM MgCl2) и той работи добре при рН 8,0.
To dephosphorylate 1 pmol of DNA ends (2.5 ug of 3 Kb plasmid), for 1hr at 37°C you need: За dephosphorylate 1 pmol на ДНК, завършва (2,5 ug от 3 Kb плазмида), за 1 ч и 37 ° C имате нужда от:
0.1 units of SAP for 5' overhangs, 0.2 units for blunt and 0.5 units for 3' over hangs. 0,1 единици на SAP за 5 'overhangs, 0,2 единици за притъпяване и 0,5 единици за 3' над увисва.
Enzyme comes 1 unit per ul, Thus to be safe you can use approx.0.5 units for 2 ug. Ензим идва с 1 единица, ул, като по този начин да бъдат безопасни, които можете да използвате approx.0.5 единици за 2 ug.
TIPS: SAP Enzyme can be added directly to restriction digest! Съвети: SAP Ензим може да се добавя директно към ограничаване дайджест! Thus the whole proceeding including restriction enzyme digestion, dephosphorylation, enzyme inactivation, ligation or 5’ end-labeling can be performed in one single tube by just adding the appropriate reagents. По този начин цялата процедура, включително ограничаване ензим храносмилането, dephosphorylation, ензим инактивиране, ligation или 5 'края на етикетиращи може да се извършва в една и съща тръба чрез просто добавяне на подходящи реагенти. This will allow you to save time and be efficient! Това ще ви позволи да спестите време и да бъде ефективен!
Discuss and post questions about it in the Shrimp Alkaline Phosphatase and DNA Cloning Forum ! Обсъдят и въпроси за него пост в скариди фосфатаза и ДНК Клонираща форум!
DNA Cloning Guide ДНК клониране гид
DNA Gel Electrophoresis ДНК гел-електрофореза
Restriction Enzyme Digestion - all you need to know ! Ограничаване Ензим храносмилането - всичко, което трябва да знаете!
Genomic DNA Isolation Protocol Genomic протокол за изолиране на ДНК
Baceteria DNA Isolation Baceteria ДНК изолиране
DNA Transformation - Contains History of DNA ДНК трансформация - съдържа историята на ДНК
Find other protocols at our DNA Protocols external resource directory or see our DNA protocols . Намерете други протоколи в нашата ДНК протоколи външен ресурс директория или вижте нашата ДНК протоколи.
Related: Свързани:
DNA Microarray Protocols ДНК Microarray протоколи
Visit DNA Bioinformatics . Посещение на ДНК биоинформатиката.
Disclaimer / Terms of Service | Privacy Policy | ©2005-2007 Molecular Station.com, All rights reserved. Отговорности / Условия за ползване | Поверителност | © 2005-2007 молекулярна Station.com, Всички права запазени.
Send this page to a friend Изпратете страницата на приятел
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
