Welcome to Molecular Station! Добре дошли в молекулярна станция!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Трябва да се регистрирате преди да можете да публикувате на нашите форуми, или да използвате допълнителни функции. Register Now! Регистрирайте се! Its Free and Fast! Тяхното свободно и бързо!

Already registered? Вече сте регистрирани? Login now below. Вход за сега по-долу.

User Name: Име:

Password: Парола:

Remember Me? Запомни ме?

Already registered and Forgot your password? Вече сте регистрирани и Забравили сте паролата си? Click below to recover it. Кликнете по-долу, за да го възстанови.

Recover Lost Password Забравена Забравена парола

Join now - it's fast and free! Присъединете се към момента - това е бързо и безплатно!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Молекулярна станция е най-голямата мрежа от изследователи, учени и любители на науката навсякъде!

Recent Forum Posts Нова Форум постове

DNA Protocols ДНК протоколи

DNA Encyclopedia ДНК енциклопедия

DNA Bioinformatics ДНК Биоинформатика

DNA Forum ДНК форум

DNA Blog ДНК Blog

DNA News ДНК Новини

DNA Books ДНК Книги

Genomic DNA Isolation Protocol Genomic протокол за изолиране на ДНК

Selecting a Genomic DNA Purification Method Избирането на Genomic ДНК метод за пречистване

The goal of genomic DNA isolation depends on what the applications of the DNA after isolation. Целта на genomic за изолиране на ДНК, зависи от това, което приложенията на ДНК, след изолация. Purity, source, quantity and quality of DNA are all issues that need to be addressed prior to genomic DNA extraction. Чистота, източник, количеството и качеството на ДНК са всички проблеми, които трябва да се обърне внимание преди да genomic извличане на ДНК. A whole host of different methods, technologies and kits are available now to researchers to isolate genomic DNA from cells. А цялата домакин на различни методи, технологии и комплекти са на разположение за сега учените genomic да изолират ДНК от клетки.

• Quantity of DNA needed Количество на ДНК, необходима
• Molecular weight and size of DNA Молекулно тегло и размер на ДНК
• Purity of DNA required Чистотата на ДНК, изисквани
• Downstream applications of DNA По течението молби на ДНК
• Time available Наличното време
• Ease of DNA extraction technique or method Лесна за извличане на ДНК, техника или метод
• Expense or money available Разход на пари или на разположение

Home-grown or laboratory specific DNA extraction methods often quite well for labs that have developed them and regularly use these protocols. За домашно производство или лаборатория, специфични методи за извличане на ДНК, често пъти доста добре за лаборатории, които са се развили и редовно да ги използват тези протоколи.

Note however these methods lack standardization. Имайте предвид обаче липсата на тези методи за стандартизация. Also the DNA yield and DNA quality are not always reproducible from one person to the next. Също така на ДНК, добивите и качеството на ДНК, не винаги са възпроизводими от един човек към следващата.

Background on Genomic DNA Isolation and Purification Фон на Genomic ДНК изолиране и пречистване

Generally, all methods involve the disruption and lysis of cells. Като цяло, всички методи, е свързана с прекъсване и разпад на клетки. This is followed sometimes by the removal of RNA (by RNAses, salt or other methods). Това понякога е последвано от отстраняване на РНК (от RNAses, сол или други методи). Choosing which method to use will depend on many selection factors including: Изборът на метод, който да се използва, ще зависи от много фактори, включително и подбор:

DNA is isolated from proteins by several methods including digestion of proteins by the enzyme proteinase K. Proteins are removed subsequently by salting-out, organic extraction, or binding of the DNA to a solid-phase support (such as an anion-exchange column or silica technology). ДНК е изолиран от протеини, от няколко метода, включително и разграждане на протеини от ензима proteinase К. протеини са премахнати в последствие от по-осоляване, органични добив, или задължителен на ДНК на солидна подкрепа-фаза (като обмен на аниони една колона, или силициев технология).

DNA is finally recovered by ethanol precipitation or isopropanol precipitation. ДНК е окончателно оползотворени с етанол или валежите изопропанол валежи.

In general, the separation of DNA from cells and cellular components can be divided into four stages: Като цяло, отделяне на ДНК от клетки и клетъчни компоненти могат да бъдат разделени в четири етапа:

1. Cell disruption Мобилен смущение
2. Lysis of Cell Разпад на Килия
3. Removal of Proteins and Contaminants Премахване на протеини и замърсители
4. Recovery of DNA Възстановяване на ДНК

In some genomic DNA isolation protocols, stages 1 and 2 are combined. В някои genomic за изолиране на ДНК, протоколи, етапи 1 и 2 са комбинирани.

Materials Needed for Genomic DNA Extraction Method Материали, необходими за Genomic метод за извличане на ДНК

Lysis Buffer for Genomic DNA Recipe: Разпад буфер за Genomic ДНК рецептата:

50 mM Tris-HCl, pH 8.0 50 мм три-HCl, рН 8,0
50mM EDTA 50mM EDTA
1% SDS 1% SDS
10mM NaCl 10 mm NaCl

Genomic DNA Purification Method from Tissue Samples Genomic метод за пречистване на ДНК проби от тъканта

1. Select tissue sample to use. Изберете тъкан проба за употреба. Make sure the sample is properly prepared and kept on ice. Уверете се, че пробата е добре подготвен и се съхранява в лед. If the sample will not be used immediately for DNA extraction, then the samples must be stored properly in either -20°C freezer for longer term or 4°C for short term (few hours) usage. Ако пробата няма да бъде незабавно използван за извличане на ДНК, а след това пробите, трябва да се съхраняват правилно и в двата -20 ° C фризер за по-дълъг срок или 4 ° C за кратки срокове (няколко часа) за използване.
2. Cut tissue into smaller pieces. Нарежете на малки парчета тъкан. For liver or other soft tissue, don't worry about making fine pieces. За черния дроб и други меки тъкани, не се притеснявайте за правенето на фини парчета.
3. Add tissue to a pre-cooled (dry ice) mortar, immediately add liquid nitrogen N2. Добави тъкан за предварително охлаждане (сух лед) разтвори, веднага добави течен азот N2.
4. Begin to grind tissue into fine powder. Започнете за мелене на фин прах в тъканите. Add more Liq. Добавете още Liq. N2 as needed. N2, когато е необходимо. Transfer cold powder to 30 ml tube, leave uncapped so N2 can evaporate. Трансфер студен прах до 30 мл тръба, оставете таван, така N2 може evaporate.
5. Add 9 ml of per-warmed (5°C ) Lysis buffer and gently resuspend powder. Добави 9 мл на загрял (5 ° C) разпад буфер и внимателно resuspend прах.
6. Add 100 ul of 10mg/ml of Proteinase K, (ie, 100 ug in solution). Добавете 100 на ул 10mg/ml на Proteinase К, (т.е., 100 ug в разтвор). Incubate 55°C 1-18 hours. Incubate 55 ° C 1-18 часа. Mix gently periodically. Разбърква се внимателно периодично. Add 100 ul of Proteinase K after first 2 hours, Optimum: 3 hours adding Proteinase K at 1.5 hours. Добавете 100 на ул Proteinase К след първите 2 часа, Оптимална: 3 часа добавяне Proteinase най-K 1,5 часа.
7. Treat sample very gently. Отнасяйте проба много внимателно. Add 1 ml of 3M Na0Ac (pH 4.0), 10 ml of warm (55°C ) phenol, mix gently but throughly for 5-10 minutes. Добавете 1 мл на 3M Na0Ac (рН 4,0), 10 мл топла (55 ° C) фенол, смес внимателно, но основно за 5-10 минути.
8. Centrifuge samples for 15 minutes. Центрофуги проби за 15 минути.
9. Repeat warm phenol extraction. Повторете топло фенол добив.
10. Extract with equal volume (10ml) phenol: CIA (1 part phenol:1 part CIA: CIA= 23 parts chloroform:1 part isoamyl alcohol) Извадка със същия обем (10ml) фенол: ЦРУ (1 част фенол: 1 част на ЦРУ: ЦРУ = 23 хлороформ части: 1 част isoamyl алкохол)
11. Extract with equal volume (10ml) CIA extraction Извадка със същия обем (10ml) добив на ЦРУ
12. Upper phase should be relatively clear, If it contains large white clouts, or is very milky, (i) incubate at 68°C 15 min., and re-phenol extract, (ii) start again, but incubate longer with PK. Горна фаза, би трябвало да са относително ясни, ако тя съдържа голяма бяла clouts, или е много Млечния, (и) incubate в 68 ° C 15 мин., И ре-фенол екстракт, (ii) на проекта отново, но вече с PK incubate.
13. Transfer upper phase to new tube. Трансфер горна фаза на новата тръба. Add 2 volumes of cold ethanol and mix gently (Salt: Na0Ac is already in solution). Добавете 2 обема на студено етанол и микс внимателно (сол: Na0Ac вече е в разтвор). Using a hook and sealed pasteur pipet spool out DNA. Използването на куката и запечатани Пастьор pipet spool на ДНК. Wipe off excess ethanol on the side of the tubes. Почистване на разстояние над етанол от страна на тръби. Resuspend in 2-5 mls of TE. Resuspend в МЛС 2-5 от ТЕ. Make sure DNA is completely dissolved (leave on gentle shaker.) Уверете се, че ДНК е напълно разтворен (отпуск по нежно shaker.)
14. Add RNase mix (100 ug of RNase A, 10U of RNaseT1). Добави RNase микс (100 ug на RNase А, 10U на RNaseT1). Incubate 30 min 37°C. Incubate 30 мин. 37 ° C. ** You could add the RNase before the proteinase K, incubate at 37°C for 1 hour and then start proteinase digestion. ** Можете да добавите RNase преди proteinase K, incubate при 37 ° С в продължение на 1 час и тогава започвате да proteinase храносмилането. You could then skip step 15-. Може след това биха могли да пропуснете стъпка 15 -.
15. Add 100 ug of Proteinase K, incubae 37°C 30 minutes. Добавете 100 ug на Proteinase K, incubae 37 ° C 30 минути.
16. Add 1/10 vol. Добавете 1 / 10 об. 3M Na0Ac, Phenol extract once, Phenol:CIA extract twice, CIA extract once. 3M Na0Ac, фенол екстракт от веднъж, фенол: ЦРУ екстракт от два пъти, ЦРУ, екстракт от веднъж.
17. Add 2.5 volumes of EtOH, put in -20°C 30 min. Добавяне на 2,5 тома на EtOH, поставени в -20 ° C 30 мин. Centrifuge 20 min. Центрофуги 20 мин.
18. Wash well with 70%, Remove all EtOH. Измийте добре с 70%, премахване на всички EtOH. If you dry, Do Not over DRY. Ако имате суха, не повече от сухи.
19. Resuspend carefully, slowly in1-2mls TE (Tris-EDTA buffer). Resuspend внимателно, бавно in1-2mls ВЕ (три-EDTA буфер). (1x or 0.1x). (1x или 0.1x).

Other DNA Protocols and Methods Други ДНК, протоколи и методи

DNA Cloning Guide ДНК клониране гид

DNA Gel Electrophoresis ДНК гел-електрофореза

Restriction Enzyme Digestion - all you need to know ! Ограничаване Ензим храносмилането - всичко, което трябва да знаете!

Genomic DNA Isolation Protocol Genomic протокол за изолиране на ДНК

Baceteria DNA Isolation Baceteria ДНК изолиране

DNA Transformation - Contains History of DNA ДНК трансформация - съдържа историята на ДНК

Find other protocols at our DNA Protocols external resource directory or see our DNA protocols . Намерете други протоколи в нашата ДНК протоколи външен ресурс директория или вижте нашата ДНК протоколи.

Related: Свързани:

DNA Microarray Protocols ДНК Microarray протоколи

PCR Protocols PCR протоколи

DNA Bioinformatics ДНК Биоинформатика

Visit DNA Bioinformatics . Посещение на ДНК биоинформатиката.

DNA-Related News ДНК-новини, свързани с

DNA News ДНК Новини