Welcome to Molecular Station! Добре дошли в молекулярна станция!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Трябва да се регистрирате преди да можете да публикувате на нашите форуми, или да използвате допълнителни функции. Register Now! Регистрирайте се! Its Free and Fast! Тяхното свободно и бързо!

Already registered? Вече сте регистрирани? Login now below. Вход за сега по-долу.

User Name: Име:

Password: Парола:

Remember Me? Запомни ме?

Already registered and Forgot your password? Вече сте регистрирани и Забравили сте паролата си? Click below to recover it. Кликнете по-долу, за да го възстанови.

Recover Lost Password Забравена Забравена парола

Join now - it's fast and free! Присъединете се към момента - това е бързо и безплатно!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Молекулярна станция е най-голямата мрежа от изследователи, учени и любители на науката навсякъде!

Recent Forum Posts Нова Форум постове

DNA Protocols ДНК протоколи

DNA Encyclopedia ДНК енциклопедия

DNA Bioinformatics ДНК Биоинформатика

DNA Forum ДНК форум

DNA Blog ДНК Blog

DNA News ДНК Новини

DNA Books ДНК Книги

Agarose Purification DNA Fragments Agarose пречистване на ДНК фрагменти

Copyright 2007 Molecular Station Copyright 2007 молекулярна станция

DNA Fragment Purification from Agarose Protocol ДНК фрагмент от пречистване Agarose Протокол

1. Run DNA on "Low melt" agarose gel. Пусни ДНК на тема "Ниски разтапят" agarose гел.
2. For 600bp DNA fragments to 5kb use1%; For 300- 700bp use 2% agarose. За 600bp ДНК фрагменти на 5kb use1%; За 300 - 700bp употреба 2% agarose. If you need to run smaller fragments use 2% "Nusieve" + 1% "Low melt". Ако имате нужда да пускат малки фрагменти употреба 2% "Nusieve" + 1% "Нисък разтапят".
3. After bands have separated, visualize the band on a UV box (minimize exposure of DNA to UV) След ленти са разделени, визуализира групата на УВ поле (сведете до минимум излагането на ДНК на UV)
4. Cut band out (DO NOT scratch the UV filter on the light box!). Нарежете на групата (не отначало на UV филтър на светлината клетка!).
5. Add 100 ul of TE buffer (10mM Tris-HCl pH 7.6, 1mM EDTA) to band, crush, heat to 65oC for approx. Добавете 100 ул ВЕ буфер (10 mm три-HCl рН 7,6, 1mM EDTA) към групата, хлътнал съм, топло до 65oC за около. 5 min, add 200l of phenol, vortex, heat 65°C for 3 min., vortex. 5 мин, добавете 200l на фенол, Възможно е също така, топло 65 ° С в продължение на 3 мин. Възможно е също така.
6. Microfuge 5 mins, remove supernant Microfuge 5 мин., премахнете supernant
7. Add 100 l of TE to phenol, vortex, heat 65°C 3 min. Добавете 100 л на ВЕ да фенол, Възможно е също така, топло 65 ° C 3 мин. vortex Възможно е също така
8. Microfuge, pool supernants. Microfuge, басейн supernants.
9. Chloroform extract (approx. 400 ul), microfuge 3 min. Хлороформ екстракт (около 400 ул), microfuge 3 мин.
10. EtOH precipitate, adding 1/10 vol. EtOH утайка, добавяне на 1 / 10 об. 3M Na0Ac, 2.5 vol. 3M Na0Ac, 2,5 об. EtOH.
11. -20°C 1-2+hrs; spin 30 min., dry down, bring up in suitable vol 0.1X TE -20 ° C + 1/2 ч.; Сервиз за 30 мин. Определяне на сухо, се въвеждат в подходящи об 0.1X ВЕ

Tips for DNA Agarose Gel Purification Съвети за ДНК Agarose гел за пречистване

• Set the trans-illuminator to long UV wavelength (or the low-power). Настройка на транс-осветител за дълго UV дължина на вълната (или с ниска мощност). This is a great way to minimise the amount of time and energy of UV DNA exposure. Това е чудесен начин за намаляване на размера на време и енергия на ДНК UV облъчване. This will minimize the UV mutagenesis of the DNA. Това ще сведе до минимум UV мутагенеза на ДНК.
• Trim off as much of agarose from the band as possible without removing DNA. Подреден на разстояние по-голямата част от agarose от групата, без да е възможно премахването на ДНК. This helps in minimizing agarose contamination which will enhance DNA purification. Това помага при минимизиране agarose замърсяване, които ще подобрят ДНК пречистване.
• If you are getting problems use commercial kits such as spin-columns.There are some excellent kits for extracting DNA if you can afford them. Ако имате проблеми да използват търговски проекти, като например Сервиз-columns.There няколко отлични комплекти за извличане на ДНК, ако можете да си позволите тях. These include kits from Qiagen, Sigma, and other companies. Това включва комплекти от Qiagen, Sigma, както и други компании.

Related Articles for DNA Purification Свързани артикули за пречистване на ДНК