Welcome to Molecular Station! Добре дошли в молекулярна станция!

You have to register before you can post on our forums or use our advanced features. Трябва да се регистрирате преди да можете да публикувате на нашите форуми, или да използвате допълнителни функции. Register Now! Регистрирайте се! Its Free and Fast! Тяхното свободно и бързо!

Already registered? Вече сте регистрирани? Login now below. Вход за сега по-долу.

User Name: Име:

Password: Парола:

Remember Me? Запомни ме?

Already registered and Forgot your password? Вече сте регистрирани и Забравили сте паролата си? Click below to recover it. Кликнете по-долу, за да го възстанови.

Recover Lost Password Забравена Забравена парола

Join now - it's fast and free! Присъединете се към момента - това е бързо и безплатно!

Molecular Station is THE largest network of researchers, scientists and science lovers anywhere! Молекулярна станция е най-голямата мрежа от изследователи, учени и любители на науката навсякъде!

Recent Forum Posts Нова Форум постове

Bookmark Bookmark Site Bookmark Bookmark сайт

Mycoplasma Contamination | Cell Culture Mycoplasma заразяване | клетъчна култура

We include here for cell culture labs, information on mycoplasma contaminations and the latest mycoplasma forum discussions for all your contamination questions and discussions. Ние включват тук за клетъчна култура лаборатории, информация за замърсявания и при най-новите птицепроизводителите форум за дискусии всички ваши въпроси, замърсяване и дискусии.

Mycoplasma Background Mycoplasma Фон

Mycoplasmas are a genus of bacteria that lack a cell wall. Микоплазми са от вида бактерии, които нямат клетъчна стена. Due to a lack of a cell wall, they are resistant to many antibiotics including penicillin or other beta-lactam antibiotics that target cell wall synthesis. Поради липса на клетка стената, те са много устойчиви на антибиотици, включително и пеницилин или други бета-lactam антибиотици, че целевата клетъчна стена синтез.

Mycoplasma are either parasitic or saprophytic. Mycoplasma са паразити или saprophytic. Several Mycoplasma are disease-causing in humans, including M. pneumoniae, which is an important cause of atypical pneumonia and other respiratory disorders, and M. genitalium, which is believed to be involved in pelvic inflammatory diseases. Няколко са Mycoplasma, причиняващи заболявания при хората, включително и М. pneumoniae, която е важна причина за атипична пневмония и други респираторни заболявания, както и М. genitalium, която се смята, че да бъдат включени в тазовата възпалителни заболявания. They may cause or contribute to some cancers. Те могат да предизвикат или допринасят за някои ракови заболявания.

Genus Mycoplasma Описание Mycoplasma

The genus Mycoplasma is one of several genera within the class Mollicutes. Род Mycoplasma е един от няколкото родове в клас Mollicutes. Mollicutes are bacteria which have small genomes, lack a cell wall and have a low GC-content (18-40 %). Mollicutes са бактерии, които са малки геноми, липсата клетка стена и имат ниско съдържание на GC-(18-40%).

There are over 100 recognized species of the genus Mycoplasma. Има над 100 вида, признати от рода Mycoplasma. Their genome size ranges from 0.58 1.38 megabase-pairs. Техният геном размер варира от 0,58 1,38 megabase-двойки. Mollicutes are parasites or commensals of humans, animals (including insects), and plants; the genus Mycoplasma is by definition restricted to vertebrate hosts. Mollicutes са паразити или коменсали на хора, животни (включително и насекоми), и растения; рода Mycoplasma по дефиниция е ограничена до гръбначни домакините. Cholesterol is required for the growth of species of the genus Mycoplasma as well as certain other genera of mollicutes. Холестерол е необходим за растежа на видовете от род Mycoplasma, както и някои други родове на mollicutes. Their optimum growth temperature is often the temperature of their host if warmbodied (eg 37 degrees Celsius in humans) or ambient temperature if the host is unable to regulate its own internal temperature. Тяхното оптимално растеж температурата често е температурата на техните домакин, ако warmbodied (например 37 градуса по Целзий при хората), или стайна температура, ако хост не е в състояние да регулира собствените си вътрешната температура. Analysis of 16S ribosomal RNA sequences as well as gene content strongly suggest that the mollicutes, including the mycoplasmas, are closely related to either the Lactobacillus or the Clostridium branch of the phylogenetic tree (Firmicutes sensu stricto). Анализ на 16S рибозомна РНК последователности, както и ген съдържание категорично сочат, че mollicutes, включително и микоплазми, са тясно свързани с или Lactobacillus или Clostridium клон на дървото phylogenetic (Firmicutes sensu stricto).

Cell Lines and Mycoplasmas Клетъчни линии и микоплазми

In cell cultures, mycoplasmas may induce cellular changes, including chromosome aborations, changes in metabolism and cell growth. В клетъчни култури, микоплазми могат да предизвикат клетъчни промени, включително и хромозомни aborations, промени в метаболизма и клетки растеж. Severe mycoplasma infections may destroy a cell line or render expensive or precious cell lines useless. Тежко при инфекции май унищожи една клетъчна линия, или правят скъпи и ценни клетъчни линии безполезен.

Cell Culture Contamination with Mycoplasma Клетъчна култура замърсяване с Mycoplasma

Mycoplasmas are often found in research laboratories as contaminants in cell culture. Микоплазми често са намерени в изследователски лаборатории, като замърсители в клетъчна култура. Mycoplasmal cell culture contamination occurs due to contamination from individuals or contaminated cell culture medium ingredients. Микоплазмени клетъчна култура замърсяване се случва, поради замърсяване от лица или замърсени клетъчна култура носител съставки.

Mycoplasma Detection Methods Mycoplasma методите за откриване

Mycoplasma cells are usually smaller than 1 µm and therefore quite difficult to detect with conventional microscopy methods. Mycoplasma клетки са обикновено малки от 1 μ м и затова доста трудно да се открие с традиционните методи за микроскопия. Detection techniques include: Откриване техники включват:

• PCR
• Real-time PCR PCR в реално време
• Plating on sensitive Agar Метализация на чувствителни агар
• DNA stains including DAPI or or Hoescht Stain ДНК петна, включително и DAPI или Hoescht Stain

Hoechst Stain Mycoplasma Contamination Detection Protocol Hoechst Stain Mycoplasma заразяване откриване на Протокола

A Hoechst (Sigma, catalog #:H6024) staining method for Mycoplasma: А Hoechst (Sigma, каталог #: H6024) петна метод за Mycoplasma:

1. For Adherent cells, place a sterile cover glass in petri dish. За Adherent клетки, мястото стерилна покриване стъкло в блюдо на Петри. Add 2-3 drops of cell suspension in the middle of coverglass (depending on the growth rate of your cells). Добавете 2-3 капки на клетъчната суспензия в средата на coverglass (в зависимост от темповете на растеж на своите клетки).
2. Then carefully add 2-3 ml of medium without disturbing the cells. След това внимателно добавяте 2-3 мл носител, без да нарушава клетки. Grow the cells until they are 50 -70% confluent. Учете се на клетките, докато те са 50 -70% confluent.

Fixing Cells: Определяне клетки:

1. Prepare cell Fixative which is a mix fo 3:1 Methanol : glacial acetic acid (M:AA). Подгответе клетки фиксатор, който е микс за 3:1 Метанол: съществува оцетна киселина (M: AA). Make sure you prepare this fresh before use. Уверете се, че сте се подготвят този пресни преди употреба.
2. Discard medium from growing cells. Отхвърляне на носител от нарастващата клетки. Add 2 ml of the Methanol : glacial acetic acid M:AA solution dropwise onto the side of the plate (not directly onto the cells). Добавете 2 мл на Метанол: съществува оцетна киселина M: AA решение dropwise в страната на табела (които не са пряко върху клетките). Swirl the plate and discard solution. Разклатете на плоча и изхвърлете разтвора.
3. Add 2 ml of M:AA, swirl and leave on for 2-3 minutes at room temperature. Добавете 2 мл M: AA, разклатете и оставете за по 2-3 минути при стайна температура.
4. Discard M: AA solution and rinse with water Отхвърляне на M: AA решение и изплакнете с вода
5. Leave to air dry (you can keep the plate until you are ready to stain) Hoecht stain (cat# 33258 from Sigma) stock concentration = 0.1 mg/ml in water You can filter sterilize at this stage using a 0.2uM filter Wrap container in aluminium foil Store at 4 oC Working solution Prepare fresh each time as necessary Make 1:1000 dilution (0.1 µg/ml) of stock in water Оставете да въздуха сухо (можете да запазите номера, докато не са готови да багрилно) Hoecht багрилно (котка # 33258 от Sigma) фондова концентрация = 0,1 мг / мл в водата Можете да филтрирате sterilize на този етап, като се използва 0.2uM филтър Заключителна в контейнер алуминиево фолио се съхранява при 4 ° С Работен разтвор Подгответе пресни всеки път, когато е необходимо Направете 1:1000 разреждане (0,1 μ г / мл) на акции във вода

Staining Cells: Петна клетки:

1. Add enough Hoechst stain to cover the entire cover slip (use 1-2ml for a small Petri dish). Добавете достатъчно Hoechst багрилно за покриване на покрива целия фиш (използването 1-2ml за малка антена Петри).
2. Leave the stain on for 45 minutes - 1 hour (in the dark). Оставете багрилно за по 45 минути - 1 час (в тъмното).
3. Rinse well with water. Ябълков добре с вода.
4. Mount on a microscope slide (mountant mix: 22 mM Citric Acid; 55.6 mM disodium phosphate; 50% glycerol, pH mix to 5.5) place a drop or two on cover slip (cells up) and place cover slip (cells down) on slide. Монтиране на микроскоп слайд (mountant микс: 22 мм лимонена киселина; 55,6 мм динатрий фосфат; 50% глицерол, примесен с рН 5,5) място спад или две за покриване на фиш (до клетките) и мястото покриване захват (определени клетки) на слайд .
5. Visualise under fluorescence microscope Флуоресценция видят под микроскоп

Note: store Hoechst stain at 4oC at least, or aliquot into the freezer for long-term storage. Забележка: склад Hoechst багрилно в 4oC най-малко, или аликвот във фризер за дългосрочно съхранение.