كفلت/أعلنت & اقترنت إلى نا & اتّصل بنا & حول نا & ساعدتنا

علم الأحياء جزيئيّة [بلوغ]

أخيرة ساحة موقعات

 

[رنا] عمليّة عزل

[رنا] إستخراج [بكغرووند ينفورمأيشن]

ينال [هيغقوليتي] ، [رنا] مصونة الأولى وغالبا الخطوة حرجة أكثر في ينجز كثير أساسيّة جزيئيّة علم الأحياء تجارب ، بما في ذلك تحليل شماليّة ، [نوكلس] حماية فحوصات ، [رت-بكر] ، [رنا] يخطّط ، ترجمة [إين فيترو] و [كدنا] مكتبة بناء. أن يكون ناجحة ، مهما ، ال [رنا] عمليّة عزل إجراء سوفت تضمّنت بعض [ستبس] مهمّة كلا [بفور ند فتر] الحقيقيّة [رنا] تطهير.

أساسيّة [رنا] عمليّة عزل طرق

[دبندينغ ون] ال [رنا] أن يكون استخرجت ، هناك خاصية ال [رنا] أنّ يسمح هو أن يكون عزلت بعيدا من أخرى [متريلس] خلويّة مثل بروتينات ، [دنا] وحتّى أدهان.

رسول يحتوي [رنا] أو [مرنا] إمتداد [أدنوسن] بقية [إين ث فورم وف] مبلمرة ([ا]) ذيل. استغلّت هذا يتلقّى يكون أن يسمح [مرنا] أن يكون حددت إلى مبلمرة ([ت]) انجذاب أعمدة أو خرز.

أطراف ل [رنا] إستخراج وعمليّة عزل

استمرّت إن أنت حاليّا تتلقّى يفضّل طريقة ل يعزل [رنا] ، أن يستعمل هو.

إن أنت يتلقّى لم تعزل [رنا] من نظامتك قبل أن وليس كائن حيّك على القائمة ميلان إلى جانب تالي ، نحن يستطيع ساعدت أنت عيّنت يؤسّس بروتوكولات أنّ يتلقّى يكون استعملت ل يعزل [رنا] لشماليّة يلطّخ أو [رت-بكر] من نظامتك. سينتج هذا أنواع البروتوكولات أيضا "[ميكروأرّ-غرد]" [رنا].

دائما ركضت [أغروس] هلام من [رنا] ك أن يقدّم النوعية.

بطاقة: إن أنت تستعمل غير عمود يؤسّس تطهير كاشف مثل [تريزول] نحن نوصي أنت يعجّل [رنا] ك [سكند تيم] من إيثانول أو يمرّ أنت هو من خلال [رنسي] عمود أو أداة مماثلة. يرى هذا يؤمّن إزالة من كلّ ملوثات عضويّة (أطياف أدناه).

 

[رنس] صادّ يستعمل في [رنا] إستخراج وعمليّة عزل

 

يفحص [رنا] عمليّة عزل نوعية وكمّيّة

يرى فعّالة نوويّة/تجزئة حشويّة يستطيع كنت سريعا قدّمت ب يشوّه [أغروس] هلام تحليل (رقم 1). نطق [كرّسبوند-ينغ] إلى مبشرة [رّنا] سوفت كنت معادلة في الإجماليّة ونوويّة [رنا] كسر. ال [18س] و [28س] [رّنا] سيكون نطق أقلّ شديدة في النوويّة [رنا] كسر من في إمّا مجموعة [رنا] أو حشويّة كسر [رنا]. في بعض [سلّ لين] ، مثلا 293 و [كس-7] خلايا ، سيكون هذا فرق مثيرة ، غير أنّ في أخرى خلايا خطوط مثل خلايا [هلا] ، ال [رّنا] نطق [أنلي سليغتلي] أقلّ شديدة في [رنا] نوويّة من في إجماليّة أو حشويّة كسر [رنا]. "

[رنا] نقاوة

[أ260] ليس قراءات و260/280 نسب كافي أن يضمن [هي بوريتي] [رنا]. أنت ينبغي أخذت يشبع طيف [أوف]. تحت 3 مثال أطياف أيّ كلّ يتلقّى جيّدة 260/280 نسب ، غير أنّ يتلقّى نقاوات مختلفة جدّا. أنت يستطيع أيضا استعملت ال 260/230 نسبة إلى مساعدة يحدّ المبلغة من تلوث عضويّة في [رنا] ك. هو كثير أكثر رقم متغيّرة من ال 260/280 نسبة ، غير أنّ عموما ، يشير نسب فوق 1 نقاوة جيّدة.

 

يكمّل [رنا] إستخراج وعمليّة عزل

 

[رنا] عمليّة عزل من كسر [سوبسلّولر]

غسلت خلايا كان بعد ذلك في [ببس] وعلى التّوالي استخرج بما أنّ يوصف. أولى ، استخرجت خلايا كان مع [نونيدت] [ب-40] مصد (10 [مّ] [تريس-كل] ، ([ف] 7.5) ، 10 [مّ] [نكل] ، 3 [مّ] [مغكل2] ، 0.5% ([ف/ف]) [نونيدت] [ب-40] ، 40 [أونيتس/مل] [رنسن] ، 1 [مّ] [دتّ]). غسلت الكريّة طينيّة متبقّي (شبكة خشنة جبلويّ داخليّ ([رر]) ونواة) كان في ال نفسه مصد واستخرجت في مصد [ب] (10 [مّ] [تريس-كل] ([ف] 7.5) ، 10 [مّ] [نكل] ، 0.5% ([ف/ف]) [نونيدت] [ب-40] ، 40 [مّ] [إدتا] ، 40 [أونيتس/مل] [رنسن] ، 1 [مّ] [دتّ]). غسلت الكريّة طينيّة متبقّي نوويّة كان في ال نفسه مصد واستخرجت مع عال ملح مصد (10 [مّ] [تريس-كل] ([ف] 7.5) ، 0.5 [م] [نكل] ، 3 [مّ] [مغكل2] ، 0.5% ([ف/ف]) [نونيدت] [ب-40] ، 40 [أونيتس/مل] [رنسن] ، 1 [مّ] [دتّ]). صفّيت [رنا] كان من كلّ كسر ب ال [رنا] [ستت] حل. عزلت [رنا] إجماليّة كان يستعمل ال [رن-ستت60] كاشف ([تل-تست]) وفقا ل التعليمات يزوّد بالصاحب مصنع. (مرجع: [بيونغ-شرل] [جنغ] [إت ل]. ، 2002)

 

[رنا] عمليّة عزل يستعمل [كسكل] بروتوكول

حالة فوضى مصد ل [رنا] عمليّة عزل

ل 100 [ملس] 200 [ملس]

4. [5م] [غنيدينيوم] ثيوسيانات 53.2 [غ] 106.4 2% [ن-لورولسركسن] ([سركسل]) [2.0غ] [4.0غ] [50مّ] [إدتا] [0.5م] 10 [ملس] 20 [ملس] [25مّ] [تريس-هكل] ، [ف] 7.5 [1م] 2.5 [ملس] 5 [ملس]

0. [1م] [ب-مركبتوثنول] [700ول] [1.4ملس]

0. 2% مانع [ا] ([سغما]) 200 [أول] 400 [أول]

5. 7 [م] [كسكل] [كشيون] حجم نهائيّة 100 [مل]

5. 7 خبز [م] "" [كسكل] [95.8غ]

0. [1م] [إدتا] [0.5م] 20 [ملس]

[رنا] إستخراج إجراء يستعمل [كسكل]

* استعملت [دبك] يعامل ماء ويخبز آنية زجاجيّة. هذا حل ، إطلاقا ، إيجابيّا ينبغي كنت [رنس] مجّانا. [رنس] في كلّ مكان! ارتديت قفازات ، إستعمال فقط يخبز آنية زجاجيّة ، أو بلاستيك بتول. [دبك] متعة ماءك ، مصدات (ماعدا [تريس]). جدّا حريصة.

1. وزنت حيوان. أزلت جهاز (كبدة) ، ثاقلت واحدة من الشعارات متفوّقة [كدنا] أنت يقلّد المورثة تعقيد ب يختار جهاز أنّ فقط عبّر عن محلة وحيد من [مولتيلوكس] أنزيم. 2. تجانست نسيج بسرعة في "حالة فوضى" مصد ([9ملس]) 3. فتلت [هوموجننت] في 12 [كغ] أن يزيل مادة غيرقابل للحلّ 4. بينما [هوموجننت] يكون يفتل [4ا]. [ويغت ووت] 1.8 [غ] من [كسكل] ([0.2غ/مل]) لكلّ عينة. [4ب]. أضفت في ال [أولتر-سنتريفوج] أنابيب ("[قويك-سل]") [3.5ملس] من [5.7م] [كسكل] "وسادة" هذا طبقة ينبغي كنت [رنس] مجّانا. أنت ستطرد [رنا] ك من خلال هذا طبقة وسيسبّب أيّ تلوث خسائر هامّة. 5. أزلت [سوبرننت] ، يضع داخل أنابيب طازجة ، أضفت 1.8 [غ] [كسكل] 6. أضفت بعناية ، [هوموجننت] [أن توب وف] [كسكل] وسادة. هذا أكثر باستعداد بارعة ب يستعمل [10كّ] محقنة وإبرة طويلة. وضعت إبرة/محقنة داخل [قويك-سل] أنابيب ، وأضفت نسيج [هوموجننت] إلى المحقنة. سينضّ [هوموجننت] ببطء داخل [ق-س] أنابيب ، يعوم [أن توب وف] الوسادة.

7. بعناية ، تلاءم ميزان أزواج ال [سنتريفوج تثب] (+/-0.005[غ]).

8. تلاءم [سل تثب] ، مكان أنابيب ضد من بعضهم بعضا وغطاء مع حمراء ألومنيوم أعالي.

9. نابذة ، 50.000 [ربمس] 5.5 [هر] ، [20وك]

بعد طرد مركزيّ: علمت أنابيب حيث كريّة طينيّة سوفت كنت: على الجانب سفليّة خارجيّة ([رلتيف تو] مركز الدوار)

10. أزلت أنابيب ، وضعت في منصب جريدة مسنّنة ملائمة.

11. شرّحت من الأعلى الأنابيب. سفطت من العلويّة 2/3- 3/4 من حل. عملت من الأعلى إلى أسفل. هو مهمّة أنّ يسفط أنت من الفرعة حذاء كثير حل أولى ويزيل كلّ غير أنّ الوسادة واضحة. لا يسفط الكريّة طينيّة خفيّة في القعر.

12. توقّفت العلويّة 2/3 من أنابيب. [بيبت] يستعمل "يسحب" [بستيور] ، بعناية أزلت حل متبقّي. سيكون الكريّة طينيّة على ال [بوتّوم-سد] من الأنابيب.

13. شطفت كريّة طينيّة مع 70% [إتوه] ، أزلت ([بيبتس] إستعمال [بستيور]) ، كرّرت مرّتين (مجموعة 3 يغسل)

14. أضفت 200 [أول] من [0.1إكس] [ت] ([رنس] حرّة) ، يستعمل ال [بيبت] طرف أن يسحق كريّة طينيّة و" يعاير" [ت.] محاولة أن يضع كريّة طينيّة داخل حل. على الأقلّ شكّلت حل متغاير عنصر ووضعت داخل طازجة [ميكروفوج] أنابيب.

15. كرّرت مع 200 [أول] من [ت.] يشارك كلا حلول

16. لا يحبّ دوامة ، [رنا] جيّدة أن يذهب داخل حل. صبر فضيلة.

17. حددت تركيز ، 10 [أول] داخل 490 [أول] (500 [أول] [فول] نهائيّة)

18. أضفت أزلت 1 [تو] 2 [أوغ] من [رنا] لهلام تحليل ([رنا] تحميل مصدات)

19. أضفت 1/10 حجم [رنس] مجّانا [3م] [نوأك] (40 [أول]) ، 2.5 حجوم [إتوه] ([1.0مل]). مزيج بشدّة.

20. أنت يستطيع حسبت التركيز ال [رنا] في ال [إتوه.ثوس] ، هناك ما من حاجة أن يعجّل كلّ من [رنا] ك فورا. فقط أزلت حوالي 1.5 [تو] 2 أوقات المبلغة أنت تحتاج ب [فورتإكسينغ] [إتوه/رنا] حل وأزلت الحجم مناسب. هذا [إتوه/رنا] يخفّض حل يخزّن في [20وك] أو ، ثابتة لسنون.

رأيت:

[رنا] بروتوكولات

[رنا] [بيوينفورمتيكس]