[سبسل فتثر]

جزيئيّ علم الأحياء صور

علم صور
خليّة علم الأحياء صور
[دنا] صور

[بيوينفورمتيك] أدوات

[بيوينفورمتيكس] أدوات

مختبرة بروتوكولات

بروتوكولات
بروتوكولات

مستعملة لوح

لوحي

لوحي

[بووكمرك] علم مواد

أخبار أخيرة
[بووكمرك]/سهم هذا علم موقعة
 

جزيئيّ محلة قائمة الطعام

تركيب إلى محلة جزيئيّ!

أنت يضطرّ سجّلت قبل أن أنت يستطيع عيّنت على ساحاتنا أو استعملت سماتنا متقدّم. سجل الآن! ه حرّة وسريعة!

سابقا يسجّل? [لوجن] الآن أدناه.

مستعملة اسم:

كلمة سرّ:

نسي سابقا يسجّل وكلمت سرّك? طقطقة أدناه أن يستردّ هو.

استردّت كلمة سرّ ضائعة

بيتيّة
سمات
 
[رنا] بروتوكولات

[رنا] بروتوكولات

[رنا] موسوعة

[رنا] موسوعة

[رنا] [بيوينفورمتيكس]

[رنا] [بيوينفورمتيكس]

[رنا] ساحة

[رنا] ساحة

[رنا] [بلوغ]

[رنا] [بلوغ]

[رنا] أخبار

[رنا] أخبار

 

لطخة شماليّ

حقّ نشر 2007 - محلة جزيئيّ

وسائل سمعيّةجزيئيّ علم الأحياء وسائل سمعيّةيستمع إلى مفصّلة شماليّ لطخة شرط!

تاريخ من شماليّ يلطّف

شماليّ يلطّف [رنا] يلطّف تقنية أيّ كان طوّرت في 1977 ب [ألوين] [إت ل]. في [ستنفورد ونيفرستي] (مرجع: 1). هو كان عيّنت بعد الجنوبيّة لطخة تقنية أيّ يلطّف ل [دنا], يخترع بأدوين [م.] جنوبيّة في 1975. لطخة غربيّة, طريقة ل يلطّف لبروتينات أيضا لعبة على اللطخة جنوبيّة يعيّن وكان عيّنت في 1981 (مرجع: 2).

[بكغرووند ينفورمأيشن] - شماليّ لطخة تقنية

تحليل شماليّ على الرغم من عمره في العالم ذو تكنولوجيا عالية من [بكر] [رل-تيم], [نوكلس] حماية فحوصات ([ربس]) و [ميكروأرّس], بعد ال [غلد-ستندرد] للكشف وإكمام من [مرنا] مستويات. هذا لأنّ شماليّ لطخة تحليل يسمح مقارنة مباشر من الرسول [رنا] وفرة بين عيّنة على غشاء وحيدة.

في لطخة شماليّ الفرق رئيسيّة بين الأخرى يلطّف تقنيات أنّ [رنا] العاملة يكون يكشف. أيضا, واجبة إلى الحقيقة أنّ [سنغل-سترندد] [رنا] عادة, هو يخلق بنى معقّدة ثانويّة أيّ يأثر هجرته وبالتّالي يشوّش شروط يكون استعملت أن يركض الهلامات (بخلاف جنوبيّة).

[رنا] فصلت خارجا ب [رنا] هلام إستشراد (عادة [أغروس] هلام إستشراد), إنتقال لاحقة إلى غشاء, تهجين مع تحقيق, وأخيرا كشف.

لطخة شماليّ

 

 

بالمثل إلى جنوبيّة يلطّف, التهجين تحقيقات يمكن كنت [دنا] أو [رنا] في شماليّ يلطّف.

استعملت [فرينت] من الإجراء يعرف كاللطخة عكسيّة شماليّ كان أحيانا (رغم أنّ, بندرة). في هذا إجراء, الطبقة سفليّة [نوكليك سد] (أنّ يكون لزّقت إلى الغشاء) يكون تجميع من يعزل [دنا] [فرغمنتس], والتحقيق [رنا] يستخرج من نسيج و [رديوأكتيفلي] يعلّب.

الإستعمال من [دنا] [ميكروأرّس] أنّ قد [كم ينتو] إستعمال واسع انتشار [إين ث لت] تسعينات و [2000س] مبكّر أكثر مجانس إلى الإجراء عكسيّة, داخل أنّ يتضمّن هم الإستعمال من يعزل [دنا] [فرغمنتس] يلزّق إلى طبقة سفليّة, وتهجين مع تحقيق يجعل من [رنا] خلويّ. لذلك الإجراء عكسيّة [, ثوو] أصلا غيرمألوف, يمكّن ال [أن-ت--تيم] دراسة من مورث تعبير يستعمل تحليل شماليّ أن يتطوّر داخل مورث تعبير يرسم, في أيّ كثير (من المحتمل كلّ) من المورث في كائن حيّ يمكن يتلقّى تعبيرهم [مونيتور]

تطبيقات من اللطخة شماليّ

أبطلت لطخات شماليّ يتلقّى يكون في كثير أمنان ب [بكر] [رل-تيم] ومقاربة [ميكروأرّي]. هو ليس [أفتن وسد] لسريريّة أو غرض تشخيصيّ.

الشماليّ لطخة استعملت بروتوكول وتنوّعه مهما في جزيئيّ علم الأحياء بحث أن:

  • [غلد-ستندرد] للدراسة مباشر من مورث تعبير في المستوى ال [مرنا] (رسول [رنا] نسخ).
  • كشف من [مرنا] نسخة حجم
  • دراسة [رنا] تدهور
  • دراسة [رنا] يحبك - يستطيع كشفت بالتّعاقب يحبك نسخ
  • درست [رنا] [هلف-ليف]
  • دراسة غيظ (داخليّة [ريبوسمل] مدخل موقعة) - أن يزيل إمكانية من [رنا] هضم [فس] [2ند] [سسترون] ترجمة.
  • [أفتن وسد] أن يؤكّد وفحصت [ترنسجنيك]/ضربة قاضية فيران (أحياء)

سيئات من شماليّ يلطّف

يتضمّن السيئات من يستعمل شماليّ يلطّف:

  • غالبا استعملت نشاط إشعاعيّ. هذا يمنع سهولة من ينجز هو, إستعمال وتصرّف. ولدت طرق جديدة من كشف [نون-رديوأكتيف] يتلقّى يكون يسمح كشف [نون-رديوأكتيف]. رأيت اخترقت.
  • يأخذ العملية كاملة من شماليّ يلطّف [لونغ تيم] عادة, من عيّنة تحضير كلّيّا إلى كشف.
  • إن [رنا] عيّنة يكونون يتساوى قليلا يحقّر ب [رنسس], النوعية من المعطيات وإكمام التعبير الى حدّ بعيد سلبيّا يتأثّر.
  • المعياريّة شماليّ لطخة طريقة نسبيّا أقلّ حسّاسة من [نوكلس] حماية فحوصات و [رت-بكر]. الحساسية من لطخات شماليّ يمكن كنت زدت مع الإستعمال من من نايلون [بوستيفل-شرجد] أغشية, إستعمال من خاصّة [أنتيسنس] تحقيق جدّا.
  • كشف مع يتعدّد تحقيقات مشكلة. غالبا, الأغشية ينبغي كنت جربت قبل تهجين وكشف مع ثاني تحقيق. هذا مشكلة بما أنّ شروط قاس يكون تطلّبت أن يجرب باتّجاه آخر تحقيقات من اللطخة ويكون أيضا مستغرق وقتا طويلا. أيضا, هناك حد إلى المبلغة الأوقات لطخة يمكن كنت جربت.

ميزة من شماليّ يلطّف

يتضمّن الميزة من لطخات شماليّ:

  • هو على نحو واسع يقبل وجيّدا يعتبر طريقة
  • شماليّ يلطّف طريقة [ستريغت-فورورد]
  • غالبا استعملت هو كتأكيد أو تدقيق
  • غالبا [غلد-ستندرد]
  • هو بروتوكول متعدّد استعمال بما أنّ هو يستطيع سمحت الإستعمال من كثير أنواع من تحقيقات ([فس] [بكر] [رل-تيم]) يتضمّن: [رديولبلد] و [نون-رديولبلد], [إين فيترو] يدوّن [رنا] وحتّى [أليغنوكليوتيد] مثل كبسولة تفجير.
  • تسلسل مع حتّى تناظر متحيّز, بخلاف [بكر] [رل-تيم] أو أخرى طرق يستطيع كنت استعملت كتهجين تحقيقات ([إي.] تسلسل من نوع مختلفة لتناظر تحليل, [أر فن] [فرغمنتس] [جنوميك] يستطيع كنت استعملت).

شماليّ لطخة بروتوكول

بما أنّ يذكر يتضمّن ال [ستبس] في شماليّ يلطّف:

  1. [رنا] عمليّة عزل
  2. هلام إستشراد ال [رنا] لفصل
  3. إنتقال إلى غشاء (عادة إيجابيّا - يحمّل نيلون ك [رنا] سلبيّا - يحمّل)
  4. [كروسّ-لينكينغ] ال [رنا] إلى غشاء (عادة ب [أوف-كروسّلينكينغ] أو مادّة كيميائيّة [منس])
  5. تهجين
  6. كشف

[متريلس] احتاجوا لشماليّ لطخة بروتوكول

مصدّ وصفات

[20إكسسّب] (500 [مل])
  • [3.6م] [نكل]: 105.2 [غ]
  • 0. [2م] فسفات مصدّ [ف] 7.0:100 [مل] من [1م]
  • [20مّ] [إدتا]: [20مل] من [0.5م]
فسفات مصدّ [ف7.0] ([500مل])
  • [نه2بو4] (أحاديّ قاعدة) 140 [مل] من [1م]
  • [ن2ه2بو4] (ثنائيّ قاعدة) 360 [مل] من [1م]
  • أضفت [ف] إلى 7.0 بعد كلا
تهجين مصدّ [هب] ([100ملس])
  • [5إكس] [سّب]: [25ملس] [20إكس]
  • 2% [سدس]: 20 [ملس] 10%

 

* يضيف [ريغت] قبل يستعمل [1000وغ] يشوّش [رنس] مجّانا [كت] [دنا] (حرارة إلى [95و] ل 3 [مين] أن يشوّش) [5000وغ] خميرة [رنا]

 

غسل: [2إكس] [سّب]+0.1% [سدس] (500 [ملس]) 50 [ملس] [20إكس] 5 [ملس] 10% [سدس] 0.1% [سدس]

مصدّ جارية ل [رنا] هلام ([1ل])
  • 100 [ملس] [10إكس] ممسحة
  • 52. 6 [ملس] الفورمالديهيد
  • 847. 4 [ملس] [ه20]
[رنا] هلام ([70مل])
  • 0.84 [غ] [أغروس]
  • 7 [ملس] [10إكس] ممسحة
  • 58.38 [ملس] [ه2و]
  • وضعت هلام في حلّ بتدفئة. تركت هلام باردة إلى [60ك], بعد ذلك أضفت فورمالديهيد أن يساوي [0.66م] --3.78 [ملس]
  • صببت هلام في دخان غطاء إن يمكن

[رنا] عيّنة للطخة شماليّ

يرى [رنا] عمليّة عزل وتطهير

[رنا] هلام

بعد يعزل [رنا], ال [رنا] ينبغي كنت فصلت خارجا على هلام (عادة [أغروس]).

يرى [رنا] هلامات

شماليّ لطخة إنتقال إلى من نايلون غشاء بروتوكول

غسلت بعد يركض ال [رنا] هلام, الهلام مع [ديستيلّد وتر] يوضع على [بوسبلوتّر].

طبقة من أعلى إلى قعر:

  • إسفنجة
  • 3-4 [وهتمن] أوراق قطعة إلى حجم ([بوث وف ثيس] مرتفعة آنفة سوفت كنت نقعت في [10إكس] [سّب] غير أنّ لا يتقطّر)
  • هلام قناع.
  • بطاقة: يتأكّدون الهلام طلاءات القناع [س ثت] هو يستطيع ختمت غشاء مع خطّ من الأعلى الهلام وال يصحّ ركب علويّة علّب 3 قطعات قليلا كبيرة [3م] ورقيّة يستعصي بلاستيك مع فتحة بئر

يتأكّد مشبك فوق وهناك ختم صوف جيّدة. استعملت 75-80 [مّ] [هغ] من ضغطة ل 1 [هر] أو أكثر.

لطّفت غشاء جارية

[كروسّ-لينكينغ] أغشية من نايلون - شماليّ لطخة بروتوكول

  • قطعت علويّة يصحّ ركب لفاف في [سرن] لفاف.
  • [أوف] أشرقت مع [رنا] جانب إلى أسفل ل 2.5 [مين.].
  • غسلت لزوج الدقائق في حارّ [2إكس] [سّب/0.1] [سدس] حلّ (موجة دقيقة حلّ ل 30-45 ثانية في 50% قوة.
  • [أير دري]

[بر] تهجين للطخة شماليّ

  1. [بر] هجّنت ل 6 [هوورس-وفرنيغت]
  2. ثبتت فرن إلى [65ك] حرارة [هب] مصدّ أن يضع [سدس] في حلّ
  3. لففت فوق غشاء في قطعة الشبكة ووضعت داخل [هبريديزتون] أنابيب ([2إكس] [سّب/0.1سدس])
  4. فحصت ل [أير بوبّل]
  5. وضعت أنابيب في فرن يوازن مع آخر أنابيب على جانب مضادّة

يعلّب تحقيق لشماليّ يلطّف

  1. وضعت [25نغ] من تحقيق في حجم إجماليّة [11ول] مع [دّه2و]
  2. شوّشت @ [95ك] 3 [مين.]. هذا أن يحصل التحقيق وحيدة يجنح وأزلت بنية ثانويّة أيّ منع تهجين فعّالة.
  3. بسرعة برّدت على جليد مبلّل. هذا أن يحافظ التحقيق وحيدة يجنح, حرّة من بنية ثانويّة ولا سمحت [رنّلينغ] (أو يصلح من بنى ثانويّة).
  4. أضفت [4ول] عاليا أوّليّة ([بوهرينجر] [منّهيم]) [5ول] ألفا [رديولبلد] [ب-32] [دكتب] [3000وس/مّول] [20ول] مجموع
  5. حضنت 10-15 [37ك] [مين]
  6. أضفت [28ول] من [1إكس] [ت], [2ول] [0.5م] [إدتا], إلى [20ول] ردّ فعل.
  7. [بر-سبين] [غ-25] [سفدإكس] عمود ل 1 دقيقة.
  8. أضفت [50ول] عيّنة إلى عمود وفتلت ل 2.5 [مين] في نابذة سريريّة. هذا أن ييصفّي تحقيق بعيدا من علامة مميّزة.
  9. رمز بعيدا عمود.
  10. مزجت في جديدة أنابيب [100وغ] [كت-دنا] [50وغ] خميرة [رنا] في [0.5مل] أنابيب.
  11. شوّشت 95° 3 [مين]
  12. أضفت إلى هجينية أنابيب مزيج, هجّنت في [65ك] ل 20-36 [هر]

عيّنت تهجين بروتوكول لشماليّ يلطّف

هجّنت ل 36-48 ساعات بعد ذلك [وش.].

  1. سخّنت فوق [2إكس] [سّب/0.1] [سدس] (غسل) حرارة حتّى 65° [ك] (إستعمال موجة دقيقة أو [وتر-بث] أن يسخّن حلّ)
  2. أخذت خارجا أنابيب وصببت ساحل داخل حارّ إشعاعيّة نفاية وعاء صندوق.
  3. يتمّ عمليّة شطف مع [10مل] غسل هذا مرّتين ويصبّ نفاية خارجا.
  4. يضع في 40 [تو] 50 [ملس] من غسل وهزّة [فيغورسلي].
  5. يضع في تهجين فرن ل 20 [مين] يدور.
  6. صببت نزولا إلى بالوعة
  7. آخر [40-50ملس] وهزّة في فرن.
  8. صببت خارجا إلى [وست كنتينر] (بالوعة [إيف نوت] حارّ أو مسمّة) وتأكّدت هو [نو لونجر] حارّ وبعد ذلك يأخذ خارجا غشاء.
  9. غسلت على رجّاجة مع [0.2إكسسّب] مع 0.1% [سدس] في [رت] ل 15 [مين.].
  10. [أير دري]
  11. مادّة استهلاكيّة

 

طرف للطخة شماليّ

استمرّت إن أنت حاليّا تتلقّى يفضّل طريقة ل يعزل [رنا], أن يستعمل هو.

دائما ركضت [أغروس] هلام من [رنا] ك أن يقدّم النوعية. ليس فحسب اعتمدت على قياس طيف نتيجات.

* استعملت [دبك] يعامل ماء ويخبز آنية زجاجيّة. هذا حلّ, إطلاقا, إيجابيّا ينبغي كنت [رنس] مجّانا. [رنس] في كلّ مكان! ارتديت قفازات, إستعمال فقط يخبز آنية زجاجيّة, أو بلاستيك بتول. [دبك] متع ماءك, مصدّ (ماعدا [تريس]). جدّا حريص.

 

يتحرّى لطخات شماليّ

استمرّت إن أنت حاليّا تتلقّى يفضّل طريقة ل يعزل [رنا], أن يستعمل هو.

 

تناقشت وعيّنت أسئلة حول هذا في الشماليّ لطخة ساحة.

شماليّ لطخة مرجع

  1. [ألوين] [جك], [كمب] [دج], [غر] شديد (1977). "يهلّم طريقة لكشف من [رنس] خاصّة في [أغروس] بإنتقال إلى [ديزوبنزلوإكسمثل-ببر] وتهجين مع [دنا] يسبر". [بروك]. [نتل]. [أكد]. [سكي]. [أو.س.] 74 (12): 5350-4.
  2. [و.] نيل [بورنتّ] (أبريل - نيسان 1981). ""غربيّة يلطّف": إنتقال استشراديّ بروتينات من [دودسل سولفت] - [بولكرلميد جل] إلى [نيتروسلّولوس] [أونموديفيد] وكشف تصويريّ إشعاعيّ مع جسم و [رديويودينتد] بروتين [ا]". [بيوشم] شرجيّ 112 (2): 195-203.