كفلت/أعلنت & اقترنت إلى نا & اتّصل بنا & حول نا & ساعدتنا

علم الأحياء جزيئيّة [بلوغ]

أخيرة ساحة موقعات

 

لطخة شماليّة

حقّ نشر 2007 - محطة جزيئيّة

وسائل سمعيّةيستمع إلى مفصّلة شماليّة لطخة شرح!

تاريخ من شماليّة يلطّخ

شماليّة يلطّخ [رنا] يلطّخ تقنية أيّ كان طوّرت في 1977 ب [ألوين] [إت ل]. في [ستنفورد ونيفرستي] (مرجع: 1). هو كان عيّنت بعد الجنوبيّة لطخة تقنية أيّ يلطّخ ل [دنا] ، يخترع بأدوين [م.] جنوبيّة في 1975. لطخة غربيّة ، طريقة ل يلطّخ لبروتينات أيضا لعبة على اللطخة جنوبيّة يعيّن وكان عيّنت في 1981 (مرجع: 2).

[بكغرووند ينفورمأيشن] - شماليّة لطخة تقنية

تحليل شماليّة على الرغم من عمره في العالم ذو تكنولوجيا عالية من [بكر] [رل-تيم] ، [نوكلس] حماية فحوصات ([ربس]) و [ميكروأرّس] ، بعد ال [غلد-ستندرد] للكشف وإكمام من [مرنا] مستويات. هذا لأنّ شماليّة لطخة تحليل يسمح مقارنة مباشرة من الرسول [رنا] وفرة بين عينات على غشاء وحيدة.

في لطخة شماليّة الفرق رئيسيّة بين الأخرى يلطّخ تقنيات أنّ [رنا] العاملة يكون يكشف. أيضا ، واجبة إلى الحقيقة أنّ [سنغل-سترندد] [رنا] عادة ، هو يخلق بنى معقّدة ثانويّة أيّ يأثر هجرته وبالتّالي يشوّه شروط يكون استعملت أن يركض الهلامات (بخلاف جنوبيّة).

[رنا] فصلت خارجا ب [رنا] هلام إستشراد (عادة [أغروس] هلام إستشراد) ، إنتقال لاحقة إلى غشاء ، تهجين مع تحقيق ، وأخيرا كشف.

 

 

بالمثل إلى جنوبيّة يلطّخ ، التهجين تحقيقات يمكن كنت [دنا] أو [رنا] في شماليّة يلطّخ.

استعملت [فرينت] من الإجراء يعرف كاللطخة عكسيّة شماليّة كان أحيانا (رغم أنّ ، بندرة). في هذا إجراء ، الطبقة سفليّة [نوكليك سد] (أنّ يكون لزّقت إلى الغشاء) يكون تجميع من يعزل [دنا] [فرغمنتس] ، والتحقيق [رنا] يستخرج من نسيج و [رديوأكتيفلي] يعلم.

الإستعمال من [دنا] [ميكروأرّس] أنّ قد [كم ينتو] إستعمال واسع انتشار [إين ث لت] تسعينات و [2000س] مبكّرة أكثر مجانسة إلى الإجراء عكسيّة ، داخل أنّ يتضمّن هم الإستعمال من يعزل [دنا] [فرغمنتس] يلزّق إلى طبقة سفليّة ، وتهجين مع تحقيق يجعل من [رنا] خلويّة. لذلك الإجراء عكسيّة [, ثوو] أصلا غيرمألوف ، يمكّن ال [أن-ت--تيم] دراسة من مورثة تعبير يستعمل تحليل شماليّة أن يتطوّر داخل مورثة تعبير يرسم ، في أيّ كثير (من المحتمل كلّ) من المورثات في كائن حيّ يمكن يتلقّى تعبيرهم [مونيتور]

تطبيقات من اللطخة شماليّة

أبطلت لطخات شماليّة يتلقّى يكون في كثير مناطق ب [بكر] [رل-تيم] ومقاربة [ميكروأرّي]. هو ليس [أفتن وسد] لسريريّة أو أغراض تشخيصيّة.

الشماليّة لطخة استعملت بروتوكول وتنوعاته مهما في جزيئيّة علم الأحياء بحث أن:

• [غلد-ستندرد] للدراسة مباشرة من مورثة تعبير في المستوى ال [مرنا] (رسول [رنا] نسخ).
• كشف من [مرنا] نسخة حجم
• دراسة [رنا] تدهور
• دراسة [رنا] يحبك - يستطيع كشفت بالتّعاقب يحبك نسخ
• درست [رنا] [هلف-ليف]
• دراسة غيظ (داخليّة [ريبوسمل] مدخل موقعة) - أن يزيل إمكانية من [رنا] هضم [فس] [2ند] [سسترون] ترجمة.
• [أفتن وسد] أن يؤكّد وفحصت [ترنسجنيك]/ضربة قاضية فيران (حيوانات)

سيئات من شماليّة يلطّخ

يتضمّن السيئات من يستعمل شماليّة يلطّخ:

• غالبا استعملت نشاط إشعاعيّ. هذا يمنع سهولة من ينجز هو ، إستعمال وتصرف. ولدت طرق جديدة من كشف [نون-رديوأكتيف] يتلقّى يكون يسمح كشف [نون-رديوأكتيف]. رأيت اخترقت.
• يأخذ العملية كاملة من شماليّة يلطّخ [لونغ تيم] عادة ، من عينة تحضير كلّيّا إلى كشف.
• إن [رنا] عينات يكونون يتساوى قليلا يحقّر ب [رنسس] ، النوعية من المعطيات وإكمام التعبير الى حدّ بعيد سلبيّا يتأثّر.
• المعياريّة شماليّة لطخة طريقة نسبيّا أقلّ حسّاسة من [نوكلس] حماية فحوصات و [رت-بكر]. الحساسية من لطخات شماليّة يمكن كنت زدت مع الإستعمال من من نايلون [بوستيفل-شرجد] أغشية ، إستعمال من خاصّة [أنتيسنس] تحقيق جدّا.
• كشف مع يتعدّد تحقيقات مشكلة. غالبا ، الأغشية ينبغي كنت جربت قبل تهجين وكشف مع ثاني تحقيق. هذا مشكلة بما أنّ شروط قاسية يكون تطلّبت أن يجرب باتّجاه آخر تحقيقات من اللطخة ويكون أيضا مستغرق وقتا طويلا. أيضا ، هناك حد إلى المبلغة الأوقات لطخة يمكن كنت جربت.

ميزات من شماليّة يلطّخ

يتضمّن الميزات من لطخات شماليّة:

• هو على نحو واسع يقبل وجيّدا يعتبر طريقة
• شماليّة يلطّخ طريقة [ستريغت-فورورد]
• غالبا استعملت هو كتأكيد أو تدقيق
• غالبا [غلد-ستندرد]
• هو بروتوكول متعدّد استعمال بما أنّ هو يستطيع سمحت الإستعمال من كثير أنواع من تحقيقات ([فس] [بكر] [رل-تيم]) يتضمّن: [رديولبلد] و [نون-رديولبلد] ، [إين فيترو] يدوّن [رنا] وحتّى [أليغنوكليوتيد] مثل كبسولة تفجير.
• تسلسل مع حتّى تناظر متحيّزة ، بخلاف [بكر] [رل-تيم] أو أخرى طرق يستطيع كنت استعملت كتهجين تحقيقات ([إي.] تسلسل من نوع مختلفة لتناظر تحليل ، [أر فن] [فرغمنتس] [جنوميك] يستطيع كنت استعملت).

شماليّة لطخة بروتوكول

بما أنّ يذكر يتضمّن ال [ستبس] في شماليّة يلطّخ:

1. [رنا] عمليّة عزل
2. هلام إستشراد ال [رنا] لفصل
3. إنتقال إلى غشاء (عادة إيجابيّا حمّلت يحمّل نيلون ك [رنا] سلبيّا)
4. [كروسّ-لينكينغ] ال [رنا] إلى غشاء (عادة ب [أوف-كروسّلينكينغ] أو مادّة كيميائيّة [منس])
5. تهجين
6. كشف

[متريلس] احتاجوا لشماليّة لطخة بروتوكول

مصد وصفات

[20إكسسّب] (500 [مل])

• [3.6م] [نكل]: 105.2 [غ]
• 0. [2م] فسفات مصد [ف] 7.0:100 [مل] من [1م]
• [20مّ] [إدتا]: [20مل] من [0.5م]

فسفات مصد [ف7.0] ([500مل])

• [نه2بو4] (أحاديّ قاعدة) 140 [مل] من [1م]
• [ن2ه2بو4] (ثنائيّ قاعدة) 360 [مل] من [1م]
• أضفت [ف] إلى 7.0 بعد كلا

تهجين مصد [هب] ([100ملس])

• [5إكس] [سّب]: [25ملس] [20إكس]
• 2% [سدس]: 20 [ملس] 10%

 

* يضيف [ريغت] قبل يستعمل [1000وغ] يشوّه [رنس] مجّانا [كت] [دنا] (حرارة إلى [95و] ل 3 [مين] أن يشوّه) [5000وغ] خميرة [رنا]

 

غسل: [2إكس] [سّب]+0.1% [سدس] (500 [ملس]) 50 [ملس] [20إكس] 5 [ملس] 10% [سدس] 0.1% [سدس]

مصد جارية ل [رنا] هلام ([1ل])

• 100 [ملس] [10إكس] ممسحة
• 52. 6 [ملس] الفورمالديهيد
• 847. 4 [ملس] [ه20]

[رنا] هلام ([70مل])

• 0.84 [غ] [أغروس]
• 7 [ملس] [10إكس] ممسحة
• 58.38 [ملس] [ه2و]
• وضعت هلام في حل بتدفئة. تركت هلام باردة إلى [60ك] ، بعد ذلك أضفت فورمالديهيد إلى كفؤ [0.66م] --3.78 [ملس]
• صببت هلام في دخان غطاء إن يمكن

[رنا] عينات للطخة شماليّة

يرى [رنا] عمليّة عزل وتطهير

[رنا] هلام

بعد يعزل [رنا] ، ال [رنا] ينبغي كنت فصلت خارجا على هلام (عادة [أغروس]).

يرى [رنا] هلامات

شماليّة لطخة إنتقال إلى من نايلون غشاء بروتوكول

غسلت بعد يركض ال [رنا] هلام ، الهلام مع [ديستيلّد وتر] يوضع على [بوسبلوتّر].

طبقات من أعلى إلى قعر:

• إسفنجة
• 3-4 [وهتمن] أوراق قطعة إلى حجم ([بوث وف ثيس] مرتفعة آنفة سوفت كنت نقعت في [10إكس] [سّب] غير أنّ لا يتقطّر)
• هلام قناع.
• بطاقة: يتأكّدون الهلام طلاءات القناع [س ثت] هو يستطيع ختمت غشاء مع خطّ من الأعلى الهلام وال يصحّ ركن علويّة علم 3 قطعات قليلا كبيرة [3م] ورقيّة يستعصي بلاستيك مع فتحة بئر

يتأكّد مشبك فوق وهناك ختم صوف جيّدة. استعملت 75-80 [مّ] [هغ] من ضغطة ل 1 [هر] أو أكثر.

لطّخت غشاء جافّة

[كروسّ-لينكينغ] أغشية من نايلون - شماليّة لطخة بروتوكول

• قطعت علويّة يصحّ ركن لفاف في [سرن] لفاف.
• [أوف] أشرقت مع [رنا] جانب إلى أسفل ل 2.5 [مين.].
• غسلت لزوج الدقائق في حارّة [2إكس] [سّب/0.1] [سدس] حل (موجة دقيقة حل ل 30-45 ثانية في 50% قوة.
• [أير دري]

[بر] تهجين للطخة شماليّة

1. [بر] هجّنت ل 6 [هوورس-وفرنيغت]
2. ثبتت فرن إلى [65ك] حرارة [هب] مصد أن يضع [سدس] في حل
3. لففت فوق غشاء في قطعة الشبكة ووضعت داخل [هبريديزتون] أنابيب ([2إكس] [سّب/0.1سدس])
4. فحصت ل [أير بوبّل]
5. وضعت أنابيب في فرن يوازن مع آخر أنابيب على جانب مضادّة

يعلم تحقيق لشماليّة يلطّخ

1. وضعت [25نغ] من تحقيق في حجم إجماليّة [11ول] مع [دّه2و]
2. شوّهت @ [95ك] 3 [مين.]. هذا أن يحصل التحقيق وحيدة يجنح وأزلت بنية ثانويّة أيّ منع تهجين فعّالة.
3. بسرعة بررت على جليد مبلّلة. هذا أن يحافظ التحقيق وحيدة يجنح ، حرّة من بنية ثانويّة ولا سمحت [رنّلينغ] (أو يصلح من بنى ثانويّة).
4. أضفت [4ول] عاليا أوّليّة ([بوهرينجر] [منّهيم]) [5ول] ألفا [رديولبلد] [ب-32] [دكتب] [3000وس/مّول] [20ول] مجموعة
5. حضنت 10-15 [37ك] [مين]
6. أضفت [28ول] من [1إكس] [ت] ، [2ول] [0.5م] [إدتا] ، إلى [20ول] ردّ فعل.
7. [بر-سبين] [غ-25] [سفدإكس] عمود ل 1 دقيقة.
8. أضفت [50ول] عينة إلى عمود وفتلت ل 2.5 [مين] في نابذة سريريّة. هذا أن ييصفّي تحقيق بعيدا من علامة مميّزة.
9. رمي بعيدا عمود.
10. مزجت في جديدة أنابيب [100وغ] [كت-دنا] [50وغ] خميرة [رنا] في [0.5مل] أنابيب.
11. شوّهت 95° 3 [مين]
12. أضفت إلى هجينية أنابيب مزيج ، هجّنت في [65ك] ل 20-36 [هر]

عيّنت تهجين بروتوكول لشماليّة يلطّخ

هجّنت ل 36-48 ساعات بعد ذلك [وش.].

1. سخّنت فوق [2إكس] [سّب/0.1] [سدس] (غسل) حرارة حتّى 65° [ك] (إستعمال موجة دقيقة أو [وتر-بث] أن يسخّن حل)
2. أخذت خارجا أنابيب وصببت سائل داخل حارّة إشعاعيّة نفاية وعاء صندوق.
3. يتمّ عمليّة شطف مع [10مل] غسل هذا مرّتين ويصبّ نفاية خارجا.
4. يضع في 40 [تو] 50 [ملس] من غسل وهزّة [فيغورسلي].
5. يضع في تهجين فرن ل 20 [مين] يدور.
6. صببت نزولا إلى بالوعة
7. آخر [40-50ملس] وهزّة في فرن.
8. صببت خارجا إلى [وست كنتينر] (بالوعة [إيف نوت] حارّة أو مسمّة) وتأكّدت هو [نو لونجر] حارّة وبعد ذلك يأخذ خارجا غشاء.
9. غسلت على رجّاجة مع [0.2إكسسّب] مع 0.1% [سدس] في [رت] ل 15 [مين.].
10. [أير دري]
11. مادّة استهلاكيّة

 

أطراف للطخة شماليّة

استمرّت إن أنت حاليّا تتلقّى يفضّل طريقة ل يعزل [رنا] ، أن يستعمل هو.

دائما ركضت [أغروس] هلام من [رنا] ك أن يقدّم النوعية. ليس فحسب اعتمدت على قياس طيف نتيجات.

* استعملت [دبك] يعامل ماء ويخبز آنية زجاجيّة. هذا حل ، إطلاقا ، إيجابيّا ينبغي كنت [رنس] مجّانا. [رنس] في كلّ مكان! ارتديت قفازات ، إستعمال فقط يخبز آنية زجاجيّة ، أو بلاستيك بتول. [دبك] متعة ماءك ، مصدات (ماعدا [تريس]). جدّا حريصة.

 

يتحرّى لطخات شماليّة

استمرّت إن أنت حاليّا تتلقّى يفضّل طريقة ل يعزل [رنا] ، أن يستعمل هو.

 

تناقشت وعيّنت أسئلة حول هذا في الشماليّة لطخة ساحة.

شماليّة لطخة مراجع

1. [ألوين] [جك] ، [كمب] [دج] ، [غر] شديدة (1977). "يهلّم طريقة لكشف من [رنس] خاصّة في [أغروس] بإنتقال إلى [ديزوبنزلوإكسمثل-ببر] وتهجين مع [دنا] يسبر". [بروك]. [نتل]. [أكد]. [سكي]. [أو.س.] 74 (12): 5350-4.
2. [و.] نيل [بورنتّ] (أبريل - نيسان 1981). ""غربيّة يلطّخ": [رديويودينتد] إنتقال استشراديّ بروتينات من [دودسل سولفت] - [بولكرلميد جل] إلى [نيتروسلّولوس] [أونموديفيد] وكشف تصويريّ إشعاعيّ مع جسم وبروتين [ا]". [بيوشم] شرجيّة 112 (2): 195-203.