بروتوكول يصف ثلاثة طرق معياريّة أن يبني ملتهم جراثيم [م13] [ركمبيننتس]: (1) يربط ملحقة [دنا] إلى يخطّ متّجه, يعدّ بتفلّج ال [م13] [رف] مع وحيدة حصاد أنزيم; (2) يستعمل [ألكلين فوسفتس] أن يوقف [سلف-ليغأيشن] من ال يخطّ متّجه, و(3) يستعمل [م13] [رف] [كلفد] مع اثنان حصر أنزيم لاستنساخ اتّجاهيّة. - [[فكتورس] يقرأ استنساخ داخل ملتهم جراثيم [م13] بروتوكول]
بروتوكول يصف كيف أن يبني مكتبة من [35-45-كب] [فرغمنتس] من [دنا] [جنوميك] في المزدوجة [كس] موقع [كسميد] متّجه, [سوبركس-1]. يتضمّن ال [ستبس]: إخطاط و [دفوسفورلأيشن] من [سوبركس-1] [دنا]; هضم متحيّز من [دنا] [هيغ-مولكلر-ويغت] مع [مبوي]; [دفوسفورلأيشن] من [دنا] [هيغ-مولكلر-ويغت] [جنوميك]; عمليّة ربط من [كسميد] [أرمس] إلى [دنا] [جنوميك]: يعبّئ ويصفح [ركمبيننتس]; عمليّة عزل وتحويل من [كسميد] [ركمبيننت]: تصديق من المكتبة. - [[فكتورس] يقرأ بناء من [جنوميك] [دنا] مكتبة في [كسميد] بروتوكول]
بروتوكول يصف طريقة ل [إلكتروبورتينغ] [دنا] داخل [إس] خلايا, [أس ولّ س] إنتقاء طرق. دراسات دليليّة سوفت كنت أنجزت أن يجعل الشروط ل كلّ [دنا] بني. الإنتقاء طريقة يوصف هنا واحدة من ال أكثر معقّدة. هو يتضمّن يستهدف بني في أيّ الجرثوميّ [نيومسن-رسستنس] مورث يعطّل ال [كدينغ سقونس] من الفأرة مورث. - [يقرأ [إلكتروبورتينغ] [دنا] داخل جنيني جذر ([إس]) خلايا وإنتقاء طرق بروتوكول]
ال نفسه [غفب-تغّد] [أكتين] استعملت بني يستعمل في خلية [ترنسفكأيشن] تجربة يتلقّى يكون أن ينتج فيران [ترنسجنيك]. [ترنسجنيك] يسمح أحياء التمثيل من دماغ نسيج في الحي مصونة, بما أنّ بشكل حادّ يقطع شريحة أو ك [أرغنوتبيك] شريحة ثقافات. هم أيضا يخدمون كمصدر الخلايا لتمثيل خلية عصبيّة في [هي رسلوأيشن] في يفرج [لوو-دنستي] خلية ثقافة. خلافا خلايا [ترنسفكتد] في ثقافة, حيث المستوى من [أكتين-غفب] تعبير في خلية عصبيّة يتغيّر إلى حدّ كبير, فيران [ترنسجنيك]… - [يقرأ تمثيل [أكتين] في نسيج شريحة من [ترنسجنيك] فأرة دماغ بروتوكول]
بروتوكول استعمل خصوصا أن يلد مخزونات كبيرة من [دنا] [دووبل-سترندد] من إجهادات ال [م13] أنّ يكون برتابة استعملت كاستنساخ متّجه. مبلغ كبيرة من [سنغل-سترندد] [دنا] من فرديّة [ركمبيننت] يمكن أحيانا كنت لازمة لأغراض خاصّة, [إ.غ.], أن يلد كثير تحضير من تحقيق خاصّة [رديولبلد] أو أن يبني [لرج نومبرس وف] [ست-ديركتد] متحوّل. - [يقرأ تحضير ضخم من [سنغل-سترندد] و [دووبل-سترندد] ملتهم جراثيم [م13] [دنا] بروتوكول]
بروتوكول ل [برسسون نجنيرينغ] من معمل مورث محلّ بمتشاكل إعادة اتّحاد استنساخ في [إسكهريشا كلي]. يتضمّن: [ستبس] أساسيّة في ال [إل250] [رد-هر] محلّ إنقاذ وهندسة إجراء; مبتدأ تصميم و [بلسميد] بني; [أتستم] [غب-ربير] بني; يستهدف بني عمود فقريّ; تحضير من [إلكتروكمبتنت] [إل250] خلايا; تحويل ال [بك] [ف24و1] واستقراء من عمل [ركمبينوجنيك] في [إل250]; [أتستم] محلّ إنقاذ من [بك] [ف24و1] ب [غب-ربير] [هر.] - [يقرأ [برسسون نجنيرينغ] من معمل مورث محلّ بمتشاكل إعادة اتّحاد استنساخ في [إسكهريشا كلي]]
بروتوكول يصف كيف أن يلد [بلسميد] بني ([ببيت]) أنّ عبّر عن هدف بروتين يصهر إلى الجرثوميّ [لإكسا] بروتين. [ببيت] [كترنسفورمد] داخل خميرة مع [لإكسوب-لكز] مراسل [بلسميد] يحمل الجرثوميّ [لكز] مورث تحت التحكّم من ال [لإكسا] مشغّل. المتلقّي خميرة يحتوي إجهاد صبغويّا ضمّن [ليو2] مراسل مورث, أيضا تحت التحكّم من ال [لإكسا] مشغّل. - [يقرأ [توو-هبريد] نظامات مرحلة 1: تميّز من [بيت-لإكسا] انصهار بروتين بروتوكول]
[إين فيترو] يترجم [إكسنوبوس] [موس] مؤنزم فحص بروتوكول. [إين رسبونس تو] [بروجسترون], مكتمل التّشكّل [إكسنوبوس] ينضج [أوست] إلى بيضات أنّ يستطيع كنت خصّبت. ال [موس] [بروتين كينس] أساسيّ ل [أوست] نضج, [موست ليكلي] واجبة إلى قدرته أن ينشّط الخريطة مؤنزم شلال. هذا خريطة مؤنزم يقود شلال أخيرا إلى التنشيط ال [كدك2/سكلين] [ب] ومدخل داخل [م] طور. في هذا بروتوكول, يحدّد [موس] ترجمت مؤنزم [إين فيترو], [إيمّونوبوريفيد], واستعملت في مؤنزم فحص.
يعطي البروتوكول إعتبارات عامّ للتصميم من يستهدف متّجه لفيران [ترنسجنيك]. يشارك البروتوكول طرف في التصميم من [نوك-ووت] و [نوك-ين] متّجه وبعض من إستراتيجياتهم ل ينتج [هومولوغوسلي] يعاد [ستم سلّ] جنيني.