ترحيب إلى محطة جزيئيّة!

أنت يضطرّ سجّلت قبل أن أنت يستطيع عيّنت على ساحاتنا أو استعملت سماتنا متقدّمة. سجل الآن! ه حرّة وسريعة!

سابقا يسجّل ؟ [لوجن] الآن أدناه.

مستعملة اسم:

كلمة سرّ:

تذكّرتني ؟

نسي سابقا يسجّل وكلمت سرّك ؟ طقطقة أدناه أن يستردّ هو.

استردّت كلمة سرّ ضائعة

تلاقيت الآن - هو سريعة وحرّة!

محطة جزيئيّة ال [لرج نتوورك] من باحثات ، علماء وعلم عاشقات في أيّ مكان!

أخيرة ساحة موقعات

[بكر] بروتوكولات	[بكر] [بيوينفورمتيكس] وقاعدة معطيات	علمت حول [بكر]	[بكر] عدد ومنتوجات	[بكر] ساحة	[بكر] كتب

ناجحة [بكر] شروط

معلمات ل [بكر] ناجحة

يكون أنت تلقّيت مشاكل من يحقّق [بكر] ناجحة ؟  كثير عاملات يستطيع أثرت نتيجتك من [بكر] ك مثل: معدن أيون عامل مشترك ، طبقة سفليّة وطبقة سفليّة [أنلوغس] ، مصدات وملاح و [كسلفنتس].  أيضا حراريّة ينهي إعتبارات:  [بكر] مراجل ، درجة حرارة ووقت تحسين ، [بكر] تضخيم دورات ، أنزيم/هدف وبداية حارّة. 

معدنة أيون عامل مشترك و [بكر]

عامل مشترك أساسيّة ل ال [دنا] [بولمرس] في [بكر] مادّة مغنسيوم كلوريد.  تركيزه ينبغي كنت جعلت ل كلّ كبسولة تفجير: طبعة نظامة. كثير عناصر من الردّ فعل رباط مادّة مغنسيوم أيون ، بما في ذلك كبسولة تفجير ، طبعة ، [بكر] منتوجات و [دنتبس]. الرئيسيّة 1:1 [بيندينغ جنت] لمادّة مغنسيوم أيون التركيز عال [دنتبس] في الردّ فعل. لأنّ هو يكون ضروريّة لحرّة مادّة مغنسيوم أيون أن يخدم كأنزيم عامل مشترك في [بكر] ، الإجماليّة مادّة مغنسيوم أيون تركيز ينبغي تجاوزت الإجماليّة [دنتب] تركيز. بشكل خاصّ ، أن يبدأ التحسين عملية ، 1.5 أضفت [مّ] مادّة مغنسيوم كلوريد إلى [بكر] بحضور 0.8 [مّ] [دنتبس] إجماليّة. هذا يترك حوالي 0.7 [مّ] مادّة مغنسيوم حرّة ل ال [دنا] [بولمرس]. [إين جنرل,] مادّة مغنسيوم أيون سوفت كنت تغيّرت في تركيز [سري] من 1.5-4.0 [مّ] في 0.5 [مّ] [ستبس].

طبقة سفليّة وطبقة سفليّة [أنلوغس] ل [بكر]

ال [دنا] يدمج [بولمرس] جدّا بفعّاليّة [دنتبس].  هم أيضا يستطيع أدمجت يعدّ طبقة سفليّة ، عندما استعملت هم كعناصر إضافيّة في [بكر]. مثل الطبقة سفليّة يستعمل ل [دنا] [بولمرس]: [ديغإكسيجنين-دوتب] ، [بيوتين-11-دوتب] ، [دوتب] ، [ك7دز-دغتب] ، و [فلوورسنتلي] يعلم [دنتبس]. ل [بكر] تقليديّة ، التركيز من [دنتبس] أثر يوازن في نسب متساوي تركيز جزيئيّ غراميّ ، [إ.غ.] ، 200 [م] كلّ [دنتب]. أيضا لاحظت أنّ ، إنحرافات من هذا توصيات معياريّة يمكن كنت مفيدة في [أمبليكأيشنس] مؤكّدة. مثلا ، عندما ب رغب [موتجنسس] عشوائيّة من هدف خاصّة ، [أونبلنسد] [دنتب] تركيزات يروّجون درجة [هيغر] [ميسنكربورأيشنس] ب ال [دنا] [بولمرس].

مصدات وملاح ل [بكر]

[دبندينغ ون] ال [دنا] استعمل [بولمرس] الأفضل [بكر] مصد تركيز ، ملح تركيز ، و [ف] سوفت كنت التقطت وفقا لذلك إلى ال [دنا] [بولمرس]. ال [بكر] يتألّف مصد ل [تق] [دنا] [بولمرس] 50 [مّ] [ككل] و10 [مّ] [تريس-هكل] ، [ف] 8.3 ، في [رووم تمبرتثر]. يزوّد هذا مصد ال [إيونيك سترنغث] و [بوفّرينغ كبستي] يحتاج أثناء الردّ فعل. هو مهمّة أن يلاحظ أنّ الملح يأثر تركيز [تم] من الكبسولة تفجير: طبعة مزدوج ، وبالتّالي ال [أنّلينغ] درجة حرارة.

[كسلفنتس]

استعملت [بكر] مختلفة [كسلفنتس] أن يزيد العائد ماليّ ، فاعليّة ، ونوعية من [بكر] تضخيمات. هذا [كسلفنتس] يستطيع كنت [أدفنتجووس] في بعض تضخيمات ، ومضرّة في أخرى تضخيمات. هو مستحيلة أن يتنبّأ الذي مادة سيكون مفيدة ل كلّ كبسولة تفجير: طبعة مزدوج ولذلك ال [كسلفنت] ينبغي كنت تجريبيّا اختبرت ل كلّ إدماج.

حراريّة ينهي إعتبارات

[بكر] مراجل

[بكر] ينبغي كنت أنجزت في مراجل أنّ يكون متوافقة مع مبلغات منخفضة من أنزيم و [نوكليك سد] وأنّ يتلقّى جيّدة حراريّة إنتقال صفة. عادة ، استعملت بوليبروبيلين ل [بكر] مراجل وتقليديّة ، [ثيك-ولّد] [ميكروسنتريفوج] أنابيب اخترت ل كثير حراريّة [سكلر] نظامات. أنجزت [بكر] أكثر غالبا في 10-100 [ل] ردّ فعل مقياس ويتطلّب الوقاية من التبخر/تكثف عمليات في ال ينفضّ ردّ فعل أنابيب أثناء حراريّة ينهي. [مينرل ويل] طلاء أو شمع يخدم طبقة هذا غرض. أكثر مؤخّرا ، [0.2-مل] جعلت مراجل [ثين-ولّد] يتلقّى يكون ل ال [بكر] عملية و [سكلرس] [أيل-فر] حراريّة يتلقّى يكون صمّمت أنّ يستعمل يسخّن تغطية على الأنابيب يمسك ضمن العينة قالب.

درجة حرارة و [سكل تيم] تحسين

هو أساسيّة أنّ يبلغ ال [ركأيشن ميإكستثر] المسخ ، [أنّلينغ] ، وإمتداد درجة حرارة في كلّ دورة حراريّة. إن [هولد تيم] غير كاف يكون عيّنت في أيّ درجة حرارة ، سيتوازن الدرجة حرارة من العينة لن يكون مع أنّ من العينة قالب. يصمّم بعض [سكلر] حراريّة وقت السيطرة فاصلة أسّس على القالب درجة حرارة ، حيث أنّ أخرى يؤسّس ال [هولد تيم] على يتنبّأ عينة درجة حرارة. إن أنابيب تقليديّة [ثيك-ولّد] يستعمل في [سكلر] يضبط بقالب درجة حرارة ، 60 [س] [هولد تيم] يكون كاف لموازنة. وقت إضافيّة يمكن كنت أوصيت في ال ([72ك]) إمتداد خطوة لطويلة [بكر] منتوجات. يستعمل [ثين-ولّد] [0.2-مل] أنابيب في [سكلر] يضبط ب يتنبّأ عينة درجة حرارة ، تطلّبت فقط 15 [س]. أن يستعمل بروتوكولات موجودة أو إلى تطوير بروتوكولات لإستعمال في يتعدّد مختبرات ، هو جدّا مهمّة أن يختار [هولد تيم] وفقا ل ال [سكلر] تصميم وأنابيب [ولّ ثيكنسّ].

[بكر] تضخيم دورة رقم

الرقم من [بكر] تضخيم دورات سوفت كنت جعلت [ويث رسبكت تو] ال يبدأ تركيز من الهدف [دنا]. هو أوصيت أنّ ، من 40 - 45 ينهي دورات أن يضخّ 50 هدف جزيئات ، و25-30 أن يضخّ 3 × 105 جزيئات إلى ال نفسه تركيز. سبّبت هذا [نون-بروبورأيشنليتي] بما يسمّى نجد تأثير ، في أيّ تناقص في المعدل أسّيّة من منتوج تراكم يقع في مراحل متأخّرة من [بكر]. هذا يمكن كنت سبّبت بتدهور المفاعلات ([دنتبس] ، أنزيم) ؛ مفاعلة استنزاف (كبسولة تفجير ، [دنتبس]) ؛ [إند-برودوكت] تصديد (بيروفسفات تشكيل) ؛ منافسة لمفاعلات بمنتوجات [نون-سبسفيك] ؛ أو منافسة لكبسولة تفجير يقيّد ب [رنّلينغ] من يركّز (10 [نم]) منتوج. هو عادة مستحسنة أن يركض الرقم أدنى دورات يحتاج أن يرى ال ب رغب منتوج خاصّة ، لأنّ منتوجات غيرمطلوب [نونسبسفيك] سيتدخّلون إن الرقم الدورات يكون مفرّطة.

 أنزيم/هدف

في قاسمة معياريّة من [تق] [دنا] [بولمرس] يستعمل ل 100 [ل] ردّ فعل ، هناك حوالي 1010 جزيئات. كلّ [بكر] عينة سوفت كنت قيّمت للرقم من هدف نسخ هو يحتوي أو يمكن احتويت. مثلا ، 1 يحتوي [نغ] من [لمبدا] [دنا] 1.8 × 107 نسخ. ل [لوو-ينبوت] نسخة رقم [بكر] ، يصبح الأنزيم يحدّد وهو يمكن كنت ضروريّة أن يعطي الإمتداد عملية [إينكرمنتلّي] كثير وقت. [سكلرس] حراريّة يستطيع بثقة أنجزت هذا آليّة قطعة إمتداد إجراء [إين وردر تو] زدت [بكر] عائد ماليّ.

بداية حارّة شروط

يطبّق [ألّ وف ث] تحسينات آنفة أيضا إلى [بكر] أنّ يكون صمّمت ، من البداية ، مع حارّة بداية طريقة. غالبا ، بداية حارّة يستطيع كنت أدمجت بنجاح داخل سابقا يجعل [بكر] دون يغيّر الردّ فعل شروط. مهما ، يدفع هو عادة أن [ريوبتيميز] بعد يضيف بداية حارّة. تحسين غالبا ميزان بين ينتج مثل كثير منتوج بما أنّ يمكن و [أفربرودوس] [نونسبسفيك] ، خلفيّة تضخيمات. لأنّ بداية حارّة للغاية يقلّل خلفيّة تضخيمات ، رفعت القيود علويّة على شروط مثل أنزيم تركيز ، ينهي رقم ، ومعدنة أيون عامل مشترك تركيز. [بكرس] حسّاسة أنّ يتلقّى يكون جدّا وفّقت دون بداية حارّة يمكن فشلت عندما أضفت بداية حارّة. هذا يستطيع كنت سبّبت بخفيفة يؤخّر في دورات مبكّرة يسبّب ب يمزج أو أنزيم تنشيط. ال [بكر] عادة يستطيع كنت أحيات ، غالبا مع زيادة جوهريّة في منتوج خاصّة ، ب ببساطة يزيد يحدّد معلمات أو كاشف. [إين دّيأيشن] ، هناك تحسينات خاصّة إلى كلّ حارّة بداية طريقة. يمزج أو أنزيم تنشيط يستطيع كنت أثرت ب [بكر] حجم ، مصد تركيب و [ف] ، [كسلفنتس] ، ينهي شروط ، وهكذا فوق. الخاصّة منتوج أدب ، غالبا منتوج ملحقة ، سوفت كنت استشرت لمعلومة على هذا إعتبارات.