تاريخ وتطوير من ال [بولمرس] [شين ركأيشن] ([بكر])

            أكثر من 30 سنون [أغو] ، التقديم ال [دنا تشنولوج] بما أنّ أداة للأعلام أحيائيّة ثوّر الدراسة الحياة.  سمح استنساخ جزيئيّة الدراسة من مورثات فرديّة من كائن حيّ حيّ ؛ مهما كان هذا تقنية متدلّية على ينال كمية كبيرة نسبيّا من [دنا] صافية.  هذا اعتمد على الجوابة من ال [دنا] من [بلسميد] أو أخرى متجهات أثناء خلية تقسيم الكائن حيّ مجهريّ (1).  باحثات أسّسوا هو جدّا شاقّة ويصعب أن ينال [دنا] خاصّة في كمية من الكتلة المورثات حاضرة في عينة أحيائيّة (2).   [دنا تشنولوج] جعل يمكن الأولى جزيئيّة تحليل وتشخيص قبل الولادة من عدّة أمراض إنسانيّة.  [دنا] جنينيّة ينال ب [أمنيوسنتسس] أخذ عيّنة استطاع كنت حللت بحصر أنزيم هضم ، إستشراد ، إنتقال جنوبيّة وتهجين إلى يستنسخ مورثة أو [أليغنوكليوتيد] تحقيقات (3).  مهما ، جنوبيّة سمح يلطّخ فقط بدائيّة يخطّط من مورثات في فردات لا صلة له ب (4). 

سمح [بكر] ، لفظة ل [بولمرس] [شين ركأيشن] (5.6) ، الإنتاج من كميات كبيرة من [دنا] خاصّة من معقّدة [دنا] طبعة في ردّ فعل بسيطة أنزيميّة.  [بكر] إجراء [رسنتلي دفلوبد] للتضخيم [إين فيترو] [دنا].  قد غيّر [بكر] الطريق أنّ تقريبا كلّ يدرس يتطلّب المعالجة من [دنا] [فرغمنتس] يمكن كنت أنجزت كنتيجات من ه بساطة وفائدة (7). 
في الثمانينات ، [كري] [مولّيس] (رقم 1) وفريق الباحثات في قيطس [كربورأيشن] في قيطس [كربورأيشن] يتصوّر من طريق أن يبدأ وتوقّفت [بولمرس] عمل في نقطات خاصّة على طول طاق وحيد [دنا].  حقّق [مولّيس] أيضا أنّ ب يستخدم هذا عنصر من جزيئيّة نسخة تكنولوجيا ، الهدف [دنا] استطاع كنت أسّيّا ضخخت.  هذا [دنا] تضخيم أسّست إجراء كان على [إين فيترو] [رثر ثن] عملية [إين-فيفو] (5.6.8).  [سلّ-فر] [دنا] كان تضخيم ب [بكر] يمكن أن يسهّل كثير من الإجراءات معياريّة لاستنساخ ، يحلّ ، ويعدّل [نوكليك سد] (1).  اعتمد تقنيات سابقة ل يعزل قطعة خاصّة [دنا] على مورثة استنساخ - مضجرة وإجراء بطيئة.  يترك [بكر] ، [أن ث ون هند] [كرّي] [مولّيس] يفاد "أنت التقطت القطعة ال [دنا] أنت تكون راغبة داخل ويتلقّى مثل كثير من هو بما أنّ أنت تريد" (2.8).   عندما أخرى قيطس ينجز عالمات أخيرا ينجح في يجعل ال [بولمرس] [شين ركأيشن] بما أنّ ب رغب في نمط موثوقة ، هم تلقّوا تقنية قوّيّة جدّا ل يزوّد أساسا كميات مطلقة من العالم الأحياء دقيقة وراثيّة مادّيّ جزيئيّة وأخرى يتطلّب لعملهم (8).  منذ التقرير أولى [إين1985] ، أكثر من 5000 نشرت أوراق علميّة كان ب 1992 (1).  علاوة على ذلك ، يجعل [ث لرج نومبر وف] نشر [أف كورس] هو مستحيلة أن يراجع [ألّ ث] مساهمة مهمّة إلى التطوير وتطبيق من [بكر] تكنولوجيا ؛ مهما سيحاول نحن أن يراجع هنا التطويرات مهمّة أكثر في الممارسة من [بكر] أساسيّة. 

فكّرت [بكر] كان أن يكون تصوّرت ب [در.] [كرّي] [مولّيس] في 1983 بينما يعمل في قيطس [كربورأيشن] في [إمرفيلّ] ، [ك.].  مهما ، أتمّت بعض يمهّد عمل كان أيضا ب [غبيند] [كهورنا] في 1971 الذي وصف [بسك برينسبل] من يكرّر قطعة ال [دنا] يستعمل اثنان كبسولة تفجير.  حدّدت تقدم بعد ذلك كان بمبتدأ تأليف و [بولمرس] تطهير إصدارات (9).   في [مولّيس] رأس ، نما الإختراع من خطة نظريّة أن ينجز محدودة [ديديوإكسنوكليوتيد] يسلسل من مورثات فريدة إنسانيّة يستعمل [أليغنوكليوتيد] اصطناعيّة لغرض يشخّص عاديّة إنسانيّة مرض تحولات.  كان عائقة واضحة إلى هذا مباشرة يسلسل إستراتيجية التعقيد عال من الإنسانيّة جينات (3.3[إكس]109 أزواج حقيرة).  لذلك ، ثاني أضفت [أليغنوكليوتيد] أو كبسولة تفجير كان أن يسدّ التقدم من التأليف من الكبسولة تفجير أولى.   فيما بعد مهما ، تضمّنت هذا ثاني كبسولة تفجير كان أن يقيّد إلى الأخرى [دنا] طاق ، [س ثت] كلّ طاق من المتحولة مورثة أسهم إلى الإشارة نهائيّة.  إن الخطة يتضمّن تهجين متزامنة كبسولة تفجير إلى كلّ طاق كان عدّلت ب يسخّن الخليط وبعد ذلك يكرّر ال [أنّلينغ] وإمتداد [ستبس] ، بعد ذلك كان الإشارة أوّليّة يزاد حتّى بعيد.  مكّن يكرّر ال [ستبس] المنتوجات من الدورة أولى أن يكون ضاعفت في الثاني دورة ، أن ينتج اثنان نسخ.  نتج يكرّر الدورة ثانية في أربعة نسخ ، [إت] [سترا].  مرّ عدّة أسابيع قبل أن هذا فكرة عظيمة كان حاولت (8).  اصطنعت اثنان كبسولة تفجير كان أن يكون تماما متمّمة إلى كلّ نهاية من ال 110 حقيرة زوج منطقة من يستنسخ قطعة من الإنسانيّة [ب-غلوبين] مورثة ، التضخيم كان أنجزت ، والمنتوجات كان عيّنت ب [أكرلميد] هلام إستشراد.  كان ال [إند رسولت] ال يتوقّع 110 حقيرة زوج [دنا] جزء والبداية ال [بكر] كتقنية أساسيّة في علم الأحياء جزيئيّة (5.6).
في [مولّيس] أصليّة [بكر] عملية (5.6.8) ، استعملت الأنزيم كان [إين فيترو] (في بيئة مراقبة خارج كائن حيّ).  فصلت ال [دنا] [دووبل-سترندد] كان داخل اثنان طيقان وحيد ب يسخّن هو إلى [96ك.].  في هذا درجة حرارة ، مهما ، ال [إ.كلي] [دنا] دمّرت [بولمرس] كان [س ثت] الأنزيم اضطرّ كنت استكملت بعد التدفئة مرحلة من كلّ دورة.  [مولّيس] أصليّة [بكر] كان عملية جدّا غيرفعّال بما أنّ هو تطلّب وقت كثيرة ، مبلغات ضخمة [دن-بولمرس] ، وإنتباه متواصلة طوال ال [بكر] عملية.

            يكشف فحص من ال [بكر] تضخيم آلية بساطته غير أنّ أيضا أناقته (رقم 2).  [أليغنوكليوتيد] صمّمت كبسولة تفجير أولى أن يكون متمّمة إلى النهايات من التسلسل أن يكون ضخخت ، وبعد ذلك يمزج في تجاوز جزيئيّ غراميّ مع ال [دنا] طبعة و [ديوإكسريبونوكليوتيدس] في مصد مناسبة.  يتبع تدفئة أن يشوّه الأصل طيقان ويبرّ أن يروّج [أنّلينغ] مبتدأ ، ال [أليغنوكليوتيد] كلّ رباط إلى طاق مختلفة من الهدف جزء.  عيّنت الكبسولة تفجير [س ثت] عندما كلّ مدّدت بالعمل من [دنا] [بولمرس] ، ال حديثا يصطنع طيقان سيتراكبون ال [بيندينغ ست] من ال [أليغنوكليوتيد] مضادّة.  بما أنّ العملية من مسخ ، [أنّلينغ] ، و [بولمرس] إمتداد يكون استمرّت يقيّد الكبسولة تفجير بشكل متكرّر إلى على حدّ سواء الأصليّة [دنا] طبعة وموقعات متمّمة في ال حديثا يصطنع طيقان ومدّدت أن ينتج نسخ جديدة [دنا] (رقم 3).  ال [إند رسولت] زيادة أسّيّة في الرقم إجماليّة من [دنا] [فرغمنتس] أنّ يتضمّن التسلسل بين ال [بكر] كبسولة تفجير ، أيّ يكون أخيرا مثّلت في وفرة نظريّة [2ن] ، حيث ن يكون الرقم الدورات (1.7.13).

[دنا] [بولمرس] أنزيم [نتثرلّ-وكّورّينغ] ، جزيئة ضخمة أحيائيّة أنّ يحفز التشكيل وإصلاح ال [دنا]. هو يعمل ب يقيّد إلى وحيد [دنا] طاق ويخلق طاق متمّمة.  يعتمد الجوابة دقيقة من كلّ أمر حيّة على هذا نشاط ، حيث هو يعمل أن يضاعف [دنا] عندما خلايا يقسمون (10.11).  تلقّيت فقط مؤخّرا عالمات يعلم أن يعالج هذا نشاط وطبّقت هو إلى بحث علميّة.  المبكّرة [بكر] [أوتليليزد] تجارب [كلنوو] جزء من [إسكهريشا كلي] [دنا] [بولمرس] [إي] في درجة حرارة ال [37ك] أن يضخّ أهداف خاصّة من [دنا] إنسانيّة [جنوميك] (5.6).  غالبا هذا [بكر] أنتج ردّ فعل صافية هدف منتوج بنقص بما أنّ يقضى بهلام إستشراد (1).  هذا أوّليّة [بكر] [ب] تضخيمات مع [كلنوو] جزء لم جدّا خاصّة (5.6).  رغم أنّ فريدة [دنا] جزء استطاع كنت يضخّ ~200.000 ثني من [دنا] [جنوميك] ، إلاّ أنّ كان حوالي 1% من ال [بكر] منتوج ال يستهدف تسلسل (13).  خاصّة تهجين تطلّبت تحقيق كان أن يحلّ ال يضخّ [دنا] (5.6).  
بعض [بكر] حدّدت شروط كان أن يزيد القسوة من تهجين مبتدأ مثل [لوور] [مغكل2] تركيزات و [هيغر] [أنّلينغ] درجة حرارة.
علاوة على ذلك ، ينهي التركيز من أنزيم وكبسولة تفجير ، ال [أنّلينغ تيم] ، إمتداد وقت ، ورقم ال [بكر] كلّ كان أسّست أن ينجز النوعية من ال [بكر].
أيضا ، التركيز من تسلسل خاصّة في عينة يستطيع أيضا أثرت التجانسية نسبيّة من ال [بكر] منتوجات (1.7.13.14.15).   [ديوإكسريبونوكليوتيد] فوسفات ثلاثيّ ومادّة مغنسيوم في مصد مناسبة أيضا عناصر مهمّة ل [بكر].  الفعالية ونوعية [بكرس] يستطيع كنت أثرت بتنوعات في التركيز ونسبة من حرّة مادّة مغنسيوم ، [ديوإكسريبونوكليوتيد] فوسفات ثلاثيّ ، وكبسولة تفجير.  هذا كاشف ينبغي كنت جعلت [إين وردر تو] حقّقت عال نوعية وعائد ماليّ (14).  اكتشفت هو كان أيضا أنّ التأثير من درجة حرارة و [أليغنوكليوتيد] كبسولة تفجير طول على النوعية وفعالية التضخيم ب ال [بولمرس] [شين ركأيشن] (15).
تطلّب الإهماد من [كلنوو] جزء من [إسكهريشا كلي] [دنا] [بولمرس] [إي] في ال [هيغ-تمبرتثر] يتطلّب لطاق فصل الإضافة الأنزيم بعد المسخ خطوة من كلّ دورة (5.6).  قبل 1988 ، أجبرت أيّ شخص يوصل [بكر] ردّ فعل إجراء كان أن يجلس [بتينتلي] ب [سري] من ماء حمامات أو يسخّن قوالب وأضفت قاسمة طازجة من [إ.كلي] [دنا] [بولمرس] بعد كلّ مسخ خطوة ، أيّ كان بشكل خاصّ وفيت ب يغمس الردّ فعل مرجل في [بويل وتر] ل ½ [ا] دقيقة إلى 3 دقائق (7).   أزلت هذا خطوة مضجرة بالأحرى كان بالتقديم من ثابت بالحرارة [دنا] [بولمرس] ، [تق] [دنا] [بولمرس] (12) مرّة ، في البداية من ال [بكر] ردّ فعل.  عزلت الخاصية ثابت بالحرارة من ال [دنا] [بولمرس] نشاط كان من [ثرموس] [أقوتيكس] ([تق]) (رقم 4) أنّ ينمو في فوّار من على [110ك] ، وقد أسهم للغاية إلى العائد ماليّ ، نوعية ، أتمتة ، ومنفعة من ال [بولمرس] [شين ركأيشن] (1.7.12).   [تق] أنزيم يستطيع قاومت يكرّر تدفئة إلى [94ك] وهكذا [إش تيم] بررت الخليط أن يسمح ال [أليغنوكليوتيد] كبسولة تفجير أن يقيّد المادّة حفّازة للإمتداد سابقا حاضرة (1.7).  مهما ، [هيغر] [أنّلينغ] لم يؤسّس درجة حرارة كان حتّى الوحيد "كثير تطوير مهمّة من [بكر] تطوير" (8) ، التطهير وتوزيع تجاريّة من [هت-رسستنت] [دنا] [بولمرس] من المحبّ للحرارة جرثوم [ثرموس] [أقوتيكس] ([تق]) (12). 
أساء العمليّة عزل من [هت-رسستنت] [دنا] [بولمرس] أيضا يسمح مبتدأ [أنّلينغ] وإمتداد أن يكون وفيت في يعزّز درجة حرارة (1.7.12.13) ، بذلك يقلّد [أنّلينغ] إلى [نونترجت] تسلسل (تضخيم [نون-سبسفيك]) أو يزيد نوعية.   في هذا طريق ، لأنّ كثير تضخيمات ال [بكر] منتوج استطاع كنت كشفت كوحيد [إثيديوم] [بروميد-ستيند] نطاق على هلام استشراديّ (12).  زاد هذا يزاد نوعية أيضا [دنا] عائد ماليّ من الهدف تسلسل.  فضلا عن ذلك ، طويلة [بكر] منتوجات استطاع كنت ضخخت من [دنا] [جنوميك] ، على الأرجح واجبة إلى تخفيض في البنية ثانويّة من الطبعة طيقان في ال يعزّز درجة حرارة يستعمل لإمتداد مبتدأ.  العلويّة حجم كان حد ل [كلنوو] جزء [بولمرس] تضخيم فقط حول [400بب].  [تق] قد اصطنع [بولمرس] وأخرى [بولمرس] ثابت بالحرارة [فرغمنتس] [أوب تو] 10 [كب] (1.7.12.13).  يسهّل التوفر من [تق] [بولمرس] يتلقّى أيضا للغاية الأتمتة من الردّ فعل بما أنّ هو يكون كثير يتيح مهمة أن يبني جهاز أنّ سينهي ردّ فعل أنابيب من خلال درجة حرارة مختلفة من أن يصنع أداة أنّ أنجز على حدّ سواء ال [ثرموسكلينغ] والإضافة من أنزيم [أليقووتس].  حاليّا هناك تشكيل عظيمة [ثرموسكلرس] يتوفّر تجاريّا.  قد كان هذا تطوير عامل هامّة في التطبيق سريعة من هذا تكنولوجيا بالجماعة علميّة (7). 

            [إين دّيأيشن تو] الإنتاج من [دووبل-سترندد] ، [بلونت-ندد] [دنا] [فرغمنتس] أيّ يمكن كنت شكّلت ب [بكر] ، اثنان أخرى يدبّر سمات من ال [بكر] يسهم للغاية إلى المنفعة ال [بكر].  أولى ، يعيّن الموقعة الالتصاق من الكبسولة تفجير الحدود من ال يضخّ جزء ولذلك السابقة جزيئيّة استنساخ متطلب من حصر [إندونوكلس] تمييز موقعات لا يتطلّب ل [بكر].  بما أنّ فقط رقم محدودة من [دنا] تسلسل يكون حصر موقعات ، يزيد [بكر] للغاية المرونة الإختبار من جزء حجم وتركيب.  ثانيّا ، ليس هو ضروريّة ل [بكر] [أليغنوكليوتيد] أن يكون تماما متمّمة إلى الطبعة [دنا].  "ذيول" يمكن كنت أضفت إلى ال 5' نهاية من الكبسولة تفجير أن يقدّم تسلسل ضمن الفتيل موقعات أيّ لذلك يمكن كنت استغلّت أن يقدّم حصر [إندونوكلس] تمييز موقعات أو أخرى تسلسل مفيدة مثل تحولات داخل ال يضخّ [دنا].  هذا سمح [فنومنوم] الظهور ال [بكر] كطريقة لسريعة [دنا] استنساخ (1.7.13).

قد استفاد استنساخ جزيئيّة من الظهور ال [بكر] كتقنية.  أوصلت استنساخ مباشرة كان أولى يستعمل 110 [بب] [دنا] جزء يضخّ ب [بكر] و [أليغنوكليوتيد] كبسولة تفجير أيّ احتوى حصر [إندونوكلس] تمييز موقعات أضافوا إلى هم 5' نهايات.  استعملت هذا موقعات كان أن يسهّل استنساخ من ال يضخّ [دنا] داخل [م13] [بلسميد] (17).  ال 110 [بب] سلسلت جزء كان أيضا أن يؤكّد أنّ هذا مقاربة كان سريعة مع ذلك مقاربة موثوقة إلى استنساخ.  (رقم 5)

[سلّ-بسد] [دنا] يتضمّن استنساخ [دنا] جوابة [إين-فيفو] ، أيّ يكون صحبت مع حالة إخلاص عال جدّا من ينسخ بسبب ينقّح آلية.  مهما ، عندما كرّرت [دنا] [إين فيترو] بما أنّ مع [بكر] ، ال ينسخ [إرّور رت] إلى حدّ كبير عظيمة.  يتلقّى ال [بولمرس] [ويدلي وسد] أكثر ، [تق] [دنا] [بولمرس] مهما ، ما من موحّدة 3' إلى 5' [إإكسونوكلس] أن يقلّد ينقّح عمل.  لذلك ال [إرّور رت] واجبة إلى [ميسنكربورأيشن] حقيرة أثناء [دنا] جوابة بالأحرى عال ل [تق]: سلسلت ل 1 [كب] أنّ قد تحمّل 20 دورات فعّالة نسخ ، تقريبا 40% من الجديدة [دنا] طيقان يصطنع ب [بكر] يستعمل هذا أنزيم سيحتوي [نوكليوتيد] غيرصحيح ينتج من ينسخ خطأ (16).  لذلك ، [إفن يف] ال [بكر] ردّ فعل يتضمّن تضخيم من وحيد [دنا] تسلسل ، سيكون المنتوج نهائيّة خليط من تقريبا تلاءم ، غير أنّ لا متماثلة [دنا] تسلسل.  على الرغم من الأخطاء واجبة إلى جوابة [إين فيترو] ، [دنا] يسلسل من الإجماليّة [بكر] منتوج يمكن أعطيت ال يصحّ تسلسل واجبة إلى الحقيقة أنّ الإندماج من أسس غيرصحيح أساسا عشوائيّة وقهرت المساهمة من واحدة قاعدة غيرصحيح على [أن ور موش] طيقان بالمساهمة من الأغلبية ضخمة طيقان أيّ سيتلقّى ال يصحّ تسلسل.  مهما ، إن ال [بكر] منتوج يكون أن يكون استنسخت في خلايا ، عدّة يستنسخ فردة يمكن احتجت أن يكون سلسلت [إين وردر تو] حدّدت ال يصحّ (توافق الآراء) تسلسل ، قبل يوصل تجارب بعيد.
أكثر مؤخّرا ، قلّدت المشكلة الخيانة من [دنا] جوابة أثناء ال [بكر] ردّ فعل يتلقّى يكون إلى حدّ كبير ب يستعمل بديلة [هت-ستبل] [دنا] [بولمرس] أيّ قد صحب 3' إلى 5' [إإكسونوكلس] نشاط.  [بروككّوس] [فوريوسوس] ([بفو]) [دنا] يصبح [بولمرس] و [ثرموككّوس] [ليتورليس] (منفس) أكثر [ويدلي وسد] بسبب ال ينقّح يقلّد ب هم موحّدة 3' إلى 5' [إإكسونوكلس] نشاط (18).  ال ينتج [بكر] يتلقّى منتوج [بفو] مثلا ، كثير [لوور لفل] التحولات يقدّم ب ينسخ أخطاء: ل 1 [كب] قطعة ال [دنا] أنّ قد تحمّل 20 دورات فعّالة نسخ ، يجنح حوالي 3.5% من ال [دنا] في المنتوج يحمل يغيّر قاعدة (16).

طوّرت مقاربة جديدة أن يحسن نوعية يتلقّى يكون أسّس على التمييز أنّ [تق] [دنا] [بولمرس] يحتبس نشاط هامّة أنزيميّة في درجة حرارة جيّدا تحت الدرجة قصوى ل [دنا] تأليف.  لذلك ، كبسولة تفجير يلدّن [نون-سبسفيكلّي] إلى جزئيّا وحيد يجنح طبعة منطقة يستطيع كنت موسّعة قبل أن [رشس] الردّ فعل [72ك] لإمتداد من خصوصا يلدّن كبسولة تفجير.  إن ال [دنا] [بولمرس] يكون نشّطت [أنلي فتر] قد بلغ الردّ فعل عال ([70ك]) درجة حرارة ، [نون-ترجت] تضخيم يستطيع كنت قلّدت (19.20).  هذا "حارّة بداية" مقاربة يستطيع كنت أنجزت بإضافة يدويّة من كاشف أساسيّة إلى الإنتقاء أنابيب في يعزّز درجة حرارة.  أفدت الإضافة من [سّدنا] بروتين ملزمة يتلقّى أيضا يكون أن يزيد تضخيم خاصّة.  أكثر مقاربة [أوسر-فريندلي] أن يستعمل إمّا تصديد أو إهماد من ال [دنا] [بولمرس] بنفسي.  اثنان حاولت أنواع التصديد من [تق] [دنا] [بولمرس] يتلقّى يكون بما في ذلك [أليغنوكليوتيد] تصديد (21) وجسم (22) تصديد. خاصّة [أليغنوكليوتيد] جدّا أنتجت صادّ من كلا [تق] [دنا] [بولمرس] يتلقّى يكون.  يمنع هذا [سلكتيفلي] [دنا] [بولمرس] نشاط في درجة حرارة تحت [40ك] ويتلقّى يكون أبديت إلى عمل في بداية حارّة تطبيقات.  بالتّعاقب ، واحدة يستطيع استعملت جسم ضدّ [تق] [دنا] [بولمرس]. يمنع الجسم ال [دنا] [بولمرس] إلى أن الدرجة حرارة من ال [بكر] مثل هذا أنّ الجسم شوّهت في درجة حرارة [55ك] [غرت ثن] ، بذلك يطلق الأنزيم.  مهما هناك سيئات إلى هذا نوع من بداية حارّة شروط.  [إين ثيس كس] ، يحتاج واحدة جسم ل كلّ أنزيم مختلفة يستعمل في [بكر] ول [ا لرج نومبر وف] [بكرس] هذا يستطيع ارتفعت تكاليف بشكل ملحوظ.  الشكل ملائمة أكثر من بداية حارّة أن يعدّل ال [دنا] [بولمرس] بحيث هو يكون غير فعّال في [رووم تمبرتثر] (متحولة [تمبرتثر-سنستيف]) ، وفقط [ر-كتيفتد] بعد حضانة في [95ك] ل 6-15 دقائق (23).  

بسبب بساطته ، [بكر] تقنية شعبيّة مع يوسع [رنج وف بّليكأيشن]
بما في ذلك مباشرة يسلسل ، استنساخ [جنوميك] ، [دنا] يطبع ، كشف من كائن حيّ مجهريّ معدّة ، [ست-ديركتد] [موتجنسس] ، قبل الولادة وراثيّة مرض بحث ، وتحليل من [ألّليك] تسلسل تنوعات (1.7.13.16) أيّ يعتمد على أساسا ثلاثة ميزات كبريات من الطريقة:

سرعة و [إس-وف-وس]:   [دنا] استنساخ ب [بكر] يستطيع كنت أنجزت في مبلغة قصيرة وقت نسبيّا ، ضمن [ا فو] ساعات.  عادة ، [بكر] يتألّف ردّ فعل حوالي 30 دورات كلّ دورة يحتوي مسخ ، تأليف و [رنّلينغ] خطوة ، مع دورة فرديّة بشكل خاصّ يأخذ 35 [مين] في يشغل [سكلر] حراريّة.  هذا بوضوح سريعة من الوقت يتطلّب ل [سلّ-بسد] [دنا] استنساخ ، أيّ استطاع أخذت أسابيع الوقت.  علاوة على ذلك ، هو الى حدّ بعيد يتيح أن [ستثب] [بكر] ردّ فعل والإستعمال من [ثرموسكلر] آلة أيضا يتيح.  تطلّبت بعض وقت للتصميم وتأليف من [أليغنوكليوتيد] كبسولة تفجير ، غير أنّ هذا يتلقّى يكون سهّلت بالتوفر ال [كمبوتر سفتور] لتصميم مبتدأ وسريعة تجاريّة أو تأليف أكاديميّة من [أليغنوكليوتيد] حسب الطّلب.   تحسين من [بكر] شروط يمكن كنت تطلّبت مثل مبتدأ [أنّلينغ] درجة حرارة ، مادّة مغنسيوم تركيز ، وتركيز مبتدأ.  مهما ، ينخفض الخلق من تدرج [بكر] آلات أيّ يسمح تشكيل من مبتدأ [أنّلينغ] درجة حرارة أن يكون اختبرت [أت ث سم تيم] يتلقّى للغاية الوقت يتطلّب ل هذا خطوة.  مرّة نلت الشروط أفضل لردّ فعل يتلقّى يكون ، الردّ فعل يستطيع بعد ذلك كنت ببساطة كرّرت (1.7.13.16). 

حساسية:  [بكر] قادرة من يضخّ تسلسل من مبلغات دقيقة من هدف [دنا] ، حتّى ال [دنا] من [سنغل سلّ] (24).  قد أمكن هذا حساسية بديعة طرق جديدة من يدرس تولّد مرض جزيئيّة ويؤسّس يتعدّد تطبيقات في علم شرعيّة ، في تشخيص ، في وراثيّة إرتباط تحليل يستعمل [سنغل-سبرم] يطبع وفي جزيئيّة [بليونتولوج] دراسات ، حيث عينات يمكن احتويت رقم دقيقة خلايا. مهما ، يعني الحساسية متطرّفة من الطريقة أنّ عناية عظيمة يضطرّ كنت أخذت أن يتفادى تلوث من العينة تحت تحقيق ب [دنا] خارجيّة ، مثل من مبلغات دقيقة خلايا من المشغلة (1.7.13.16).

قوة:  مدى واسعة من [نوكليك سد] مصادر طبعات مناسبة ل [بكر] تضخيم.  ضخخت يصفّى [دنس] من نوع مختلفة ومصادر يتلقّى يكون.  [بكر] يستطيع سمحت تضخيم من تسلسل خاصّة من مادة في أيّ ال [دنا] يكون على نحو رديء حقّرت أو طمرت في وسط من أيّ تقليديّة [دنا] عمليّة عزل يكون معضّلة. [أس ا رسولت] ، هو ثانية جدّا مناسبة لعلم جزيئيّة ويدرس [بليونتولوج] ، مثلا التحليل ال [دنا] يستردّ من أثر [أرشيولوجكل]. استعملت هو يتلقّى أيضا يكون بنجاح أن يضخّ [دنا] من [فورملين-فيإكسد] أو [برفّين-مبدّد] نسيج عينات ، أيّ يتلقّى تطبيقات مهمّة في علم أمراض جزيئيّة و, أحيانا ، إرتباط وراثيّة يدرسون.  عموما ، النجاح من [بكر] تضخيم عظيمة عندما هدف [فرغمنتس] نسبيّا وافرة (1.7.13.16). 

على الرغم من شعبيّته ضخمة ، يتلقّى [بكر] تحديد مؤكّدة كطريقة ل [سلكتيفلي] يستنسخ خاصّة [دنا] تسلسل. 
[إين وردر تو] بنيت خاصّة [أليغنوكليوتيد] كبسولة تفجير أنّ يسمح تضخيم انتقائيّة من خاصّة [دنا] تسلسل ، بعض سابقة تسلسل معلومة عادة ضروريّة.  يعني هذا عادة أنّ ال [دنا] منطقة الفائدة يتلقّى يكون جزئيّا ميّزت سابقا ، تالي سابقة [سلّ-بسد] [دنا] استنساخ غالبا.  مهما ، طوّرت تشكيل المقاربة يتلقّى يكون أنّ يقلّد [أر فن] يستثني الحاجة لسابقة [دنا] تسلسل معلومة في ما يتعلّق ب الهدف [دنا].  [أونشركتريزد] [دنا] تسلسل سابقا يستطيع أحيانا كنت استنسخت يستعمل [بكر] مع [أليغنوكليوتيد] منحطّة إن هم يكونون أعضاء من مورثة أو تكراريّة [دنا] أسرة على الأقلّ واحدة من الذي أعضاء يتلقّى سابقا يكون ميّزت.   أحيانا ، [بكر] يستطيع كنت استعملت بشكل فعّال دون أيّ سابقة تسلسل معلومة في ما يتعلّق ب الهدف [دنا] أن يسمح [إينديسكريمينتمبليفيكأيشن] من [دنا] تسلسل من مصدر ال [دنا] أنّ يكون حاضرة في كميات محدودة [إإكستملي].  لذلك ، رغم أنّ [بكر] يستطيع كنت طبّقت أن يضمن كاملة جينات تضخيم ، لا يتلقّى هو الميزة من [سلّ-بسد] [دنا] استنساخ في يقدّم طريق من يفصل ال [دنا] فرديّة يستنسخ [كمبريز] [جنوميك] [دنا] مكتبة.
المبلغة من [بكر] منتوج ينال في ردّ فعل وحيد أيضا كثير أكثر يحدّد من المبلغة أنّ يستطيع كنت نلت يستعمل استنساخ [سلّ-بسد] حيث [سكل-وب] من الحجوم من خلية ثقافات يمكن. سيتغيّر الفعالية من [بكر] ردّ فعل من طبعة إلى طبعة ووفقا ل عاملات مختلفة أنّ يكون تطلّبت أن يجعل الردّ فعل غير أنّ بشكل خاصّ فقط [سملّ موونت] منتوج نسبيّا يكون حقّقت.
رغم أنّ العائد ماليّ نظريّة [بكر] يكون أسّيّة ، يشير العائد ماليّ حقيقيّة من [بكر] كثير أقلّ أنّ الخطة يشغل [ويث ليتّل ثن] إحتماله قصوى.  مثلا ، يمهّد المبلغة المنتوج في كلّ دورة أخيرا باتّجاه آخر.  هذا نجد يمكن كنت فسّرت ب ال [فنومنوم] تالي.  أولى ، بعض من الطبعة يمكن أبدا كنت يتوفّر واجبة إلى طاق كسور أو إخفاق من ال [دنا] إلى يتفكّك من أخرى جزيئة ضخمة أثناء تطهير وال [ثرموسكلس] أوّليّة.  ثانيّا ، المبلغة الأنزيم محدودة وأخيرا نشاط يمكن انخفضت.  ثالثا ، بما أنّ التركيز من المنتوج [دووبل-سترندد] [رشس] مستويات عال ، يزيد منافسة بين [أنّلينغ] من طبعة ([بكر] منتوج) إلى كبسولة تفجير و [رنّلينغ] من المتمّمة طبعة طيقان (1.7.13).
واضحة وكثير أوقات قد كان سيئة عظيمة [بكر] ك [دنا] استنساخ طريقة الحجم مدى من ال [دنا] تسلسل أنّ يستطيع كنت استنسخت.  يكون بخلاف [سلّ-بسد] [دنا] استنساخ حيث الحجم من يستنسخ [دنا] تسلسل يستطيع قاربت 2 [مب] ، يفاد [دنا] تسلسل يستنسخ ب [بكر] يتلقّى بشكل خاصّ في ال 0.15 [كب] حجم مدى ، غالبا في ال [لوور ند] من هذا مقياس.  [فرغمنتس] صغيرة [دنا] يستطيع عادة كنت ضخخت بسهولة ب [بكر] ، ولكن يصبح هو بدرجة متزايدة أكثر يصعب أن ينال تضخيم فعّالة بما أنّ ال ب رغب منتوج طول يزيد.  ميّز [برنس] (25) هدف طول تحديد إلى [بكر] تضخيم ال [دنا].  هو استعمل إدماج من رفيع المستوى من [إإكسونوكلس-فر] ، [ن-ترمينل] حذف متحولة من [تق] [دنا] [بولمرس] ، [كلنتق1] ، مع مستوى منخفض جدّا من ثابت بالحرارة [دنا] [بولمرس] يعرض 3 ' - [إإكسونوكلس] نشاط ([بفو] ، منفس ، أو عميقة منفس) أن يوصل حالة إخلاص عال طويلا [بكر]. على الأقلّ 35 [كب] من ملتهم جراثيم [لمبدا] يستطيع كنت ضخخت إلى عائد ماليّ عال من 1 [نغ] من [لمبدا] [دنا] طبعة.  أنتج إستعمال من هذا طريقة يزاد [بس-بير] حالة إخلاص ، القدرة أن يستعمل [بكر] منتوجات ككبسولة تفجير ، والعائد ماليّ قصوى من هدف جزء.  أخرى عيّنت شروط يتلقّى يكون لتضخيم فعّالة من أهداف طويلة ، بما في ذلك تضخيم من [أوب تو] 22 [كب] من ال [بت-غلوبين] مورثة عنقود من [دنا] إنسانيّة [جنوميك] و [أوب تو] 42 [كب] من [فغ] [لمبدا] [دنا] (26).  انخفض الشروط ل هذا طويلة [بكرس] يتضمّن يزاد [ف] ، إضافة السكرولات و [سولفوإكسيد] ثنائيّ مثيل ، مسخ أوقات ، يزاد إمتداد أوقات ، والإستعمال من ثانويّة ثابت بالحرارة [دنا] [بولمرس] أنّ يملك 3 ' - إلى 5 ' - [إإكسونوكلس] ، أو "ينقّح ،" نشاط.  ال "طويلة [بكر]" أبقى بروتوكول النوعية يتطلّب لأهداف في [دنا] [جنوميك] ب يستعمل [لوور لفل] ال [بولمرس] ودرجة حرارة وملح شروط لخاصّة كبسولة تفجير [أنّلينغ].  سيحضر القدرة أن يضخّ [دنا] تسلسل من 10-40 [كب] السرعة وبساطة ال [بكر] إلى [جنوميك] يخطّط ويسلسل وسيسهّل دراسات في علم وراثة جزيئيّة (26).  عموما ، يتضمّن الشروط ل [لونغ رنج] [بكر] إدماج التعديلات إلى شروط معياريّة مع [توو-بولمرس] نظامة.  هذا يزوّد مستويات أفضل من [دنا] [بولمرس] و3' إلى 5' [إإكسونوكلس] نشاط أيّ يخدم ك ينقّح آلية (16).

قدّمت [ثرموسكلرس] أيّ تلقائيّا ينظّم درجة حرارة ل [بكر] ينهي كان في 1986 (رقم 6).  [إين دّيأيشن تو] التقدمات في [بكر] كاشف ، طوّرت أجهزة جديدة ل يشغل [ثرمل] ينهي ول يحلّ [بكر] منتوجات يتلقّى يكون.  قد زاد [سكلرس] جديدة حراريّة معدلات من تدفئة ، يبرّ ، وإنتقال [هت] إلى يعّدّل ردّ فعل مراجل.  الردّ فعل كان مراجل يلاءم ب ال [فيرست جنرأيشن] [سكلرس] حراريّة ([أر فن] ماء حمامات وتدفئة قوالب) معياريّة بلاستيكيّة [ميكروفوج] أنابيب.  [بكر] سمح تضخيم في أنابيب رقيقة شعريّة سريعة حراريّة ينهي ، و [دنا] تأليف إلى عشرينات.  قد سمح السرعة من الدرجة حرارة تغيرات يحقّق في هذا نظامات التعريف دقيقة من درجة حرارة درجة قصوى ل كلّ خطوة فرديّة في ال [بكر] دورة.   الجديدة جيل يلائم [سكلرس] حراريّة أيضا كثير عينات ، يتلقّى أكثر قطاع جانبيّ دقيقة حراريّة ، وقابل للبرمجة (13). 

قد كان واحدة من ال الأقلّ يقدّم مساهمة إلى التطبيق واسع انتشار [بكر] التطوير من موثوقة يشغل كيمياء ل [أليغنوكليوتيد] تأليف.  [أونتيل رسنتلي] ، كان البناء من [أليغنوكليوتيد] وحيد مهمة جوهريّة أنّ استطاع فقط كنت أنجزت ب يمهر صيدلية عضويّة.  الآن هو يمكن أن يشتري إمّا [أليغنوكليوتيد] مخلقة أنّ يستطيع كنت شغلت بفنّيّ أو ال [أليغنوكليوتيد] بنفسي من تجاريّة أو مصدر أكاديميّة.  متعدّدة [أليغنوكليوتيد] تأليف بنيت آلات يتلقّى يكون مع الهدف من يقلّد التكلفة إجماليّة تأليف (27.28).  بما أنّ ال [أليغنوكليوتيد] يعيّنون النهائيّة [بكر] منتوجات ، [ثر يس ليتّل دووبت ثت] في [ث بسنس] من هم يتأهّب إمداد تموين ، لم كان [بكر] قد استمتع ال يوسع قبول أنّ هو قد كسب اليوم (13). 

باحثات وافقوا [إرلي ون] أنّ كان التصميم من [بكر] كبسولة تفجير يصعب وغير جدير بالثّقة.  [دفيز] [كمبوتر بروغرم] كان أن يأخذ [ألّ وف ث] تصميم معايير [إينتو كّوونت].   كان واحدة من البرامج أولى يكتب لتصميم مبتدأ [ألغ] أيّ استخدم التزويد من [ديجتل] بحث جوهرة (رسم بيانيّ بيئة مديرة) على [أتري] [ست] (29).  تناسبت [ألغ] كان خصوصا إلى ال [بولمرس] [شين ركأيشن] ([بكر]) يسمح تحليل متزامنة من اثنان تسلسل مبتدأ.  كان الميزة [ألغ] أنّ هو زوّد في واحدة برنامج تحاليل لتكرارات مباشرة ، بنى ثانويّة و [ديمريزأيشن] مبتدأ [أس ولّ س] عدّة مفيدة "إنهاء" أدوات لعاملات يشبك في [بكر] تحسين و [أليغنوكليوتيد] تأليفات.   ال [بريمر3] فكّرت برنامج في [وهيتهد] معهد الآن أن يكون ال أكثر موثوقة وأداة متعدّد استعمال متوفّرة (30).

[بكرس] يستطيع الآن كنت أنجزت يمكّن التضخيم من [دنا] [فرغمنتس] حتّى عدّة [كيلوبس] في طول بأكثر من [أن ميلّيون] أوقات وفرتهم أوّليّة.  الإجراء جدّا قابل للأتمتة ويتطلّب فقط [ا فو] ساعات من يبدأ ال [ثرموسلينغ] إلى [برودوكت نلسس].  هذا [ب] لم الحالة سابقا ، وسهّلت المتطلبات عمليّة ل ينجز [بكر] يتلقّى يكون للغاية منذ المخطوطات أولى من الطريقة (13).  اليوم ، تطوّرت أكثر من العقدة تصدّع خفيفة أوّليّة أو لافاعليّة من ال [بكر] يتلقّى يكون (8).   علاوة على ذلك ، قد مدّد [بكر] أن يتضمّن أكثر من 270.000 مواد (31).

  [بولمرس] [شين ركأيشن] الطريقة [ويدلي وسد] أكثر ل [إين فيترو] [دنا] تضخيم مهما هو يتطلّب مسخ حراريّة أو [ثرموسكلينغ] أن يفصل الاثنان [دنا] طيقان.  [إين-فيفو] ، كرّرت [دنا] ب [دنا] [بولمرس] مع بروتينات مختلفة ثانويّة.   [دنا] يتصرّف [هليكس] ، [دنا] [بولمرس] بروتينات ثانويّة أن يفصل [دنا] مزدوجة في خلايا.  فانسنت [إت ل]. قد [دفيز] (32) جديدة [إين فيترو] متساوي حرارة [دنا] تضخيم طريقة ب [ميميك] ال [إين-فيفو] جوابة آلية.  تلقّى تضخيم [هليكس-دبندنت] () يستعمل [دنا] [هليكس] أن يلد [سنغل-سترندد] طبعات لتهجين مبتدأ.  لاحقة كبسولة تفجير حفزت إمتداد بعد ذلك ب [دنا] [بولمرس].  تلقّى لا يتطلّب [ثرموسكلر] غالية ولذلك [بكر] يمكن كنت أنجزت عمليّا في أيّ مكان.  [إين دّيأيشن] ، يقدّم هو عدّة ميزات على أخرى متساوي حرارة [دنا] تضخيم طرق ب يتلقّى بسيطة ردّ فعل خطة ويكون يصحّ ردّ فعل متساوي حرارة أنّ يستطيع كنت أنجزت في واحدة درجة حرارة للعملية كاملة. تلقّى أعراض وعد عظيمة في التطوير من بسيطة قابل للنقل [دنا] [دينوستيك دفيس] أن يكون استعملت في المجال وفي ال [بوينت-وف-كر] (32).

هو قلت البسيطة وطريق ملائمة أكثر أن يعيّن [بكر] كتقنية.  مهما ، يزيل هذا تصنيف التاريخ من [بكر] تطوير [أس مني] فردات على السنون يسهم إلى الأفكار خلف النظرية ال [بكر] وال [فين-تثنينغ] من التقنية.  الجوابة تالية بسيطة أن يعيّن فردة كالمخترعة من ال [بولمرس] [شين ركأيشن].  منحت [كرّي] [مولّيس] كان ال [نوبل بريز] لكيمياء في 1993 لإكتشافه ال [بكر].  مهما ، اعترضت هذا إكتشاف [أمونغست] كثير عالمات ، أيّ يمكن يتلقّى أسهمت إلى يفتح هذا لغز.
قلت هو يتلقّى أيضا يكون أنّ [بكر] لم يتواجد إلى أن هو كان جعلت أن يعمل في نظامة تجريبيّة.  مع هذا في عقل ، فقط ليس الفكرة من مفهوم كاف ؛ مفهوم ينبغي يتلقّى يكون بنجاح يكون وضعت داخل ممارسة (33).      
رغم أنّ هناك يكون شك [أس تو] المبتدعة نهائيّة [بكر] ، وشك [أس تو] الإمكانية أنّ [بكر] يمكن بطريقة ما أو يوما ما كنت استبدلت ، هناك بعض شك التأثير صدمة أنّ [بكر] قد خلق على فسحة بين دعامتين [شورت تيم] على الدراسة من جزيئيّة علم الأحياء وحياة.

مراجع

1.         [أرنهيم] ، ن ؛ [إرليش] ، [ه] ؛  [بولمرس] [شين ركأيشن] إستراتيجية. [أنّول رفيو] الكيمياء حيويّة ، [فول.] 61. [إكسيف1359ب]. ، 1992. [ب.] 131-156.
2.         [أبّنزلّر] [ت.] يعمّر ال [دنا] تسلسل. ، [سكينس] ، 1990 مارس - آذار 2 ، 247 (4946).
3.         [سيكي] [ر] ، [ك.] ؛ [سكهرف] [س] ؛ [فلوونا] [ف] ؛ [مولّيس] [ك.] [ب] ؛ قرن بوري [غ.] [ت] ؛ [إرليش] [ه.] [أ.] ؛ يعيّن [أرنهيم] [ن.] ، تضخيم أنزيميّة من تسلسل [بت-غلوبين] [جنوميك] وحصر تحليل لتشخيص من منجل خلية فقر ، [سكينس] ، 1985 ديسمبر - كانون الأوّل 20 ، 230 (4732): 1350-4.
4.         جنوبيّة ، [إ.م.] (1975) فصل كشف من تسلسل خاصّة بين [دنا] [فرغمنتس] بهلام إستشراد. [ج.] جزيئة غراميّة. [بيول.] 98:503 - 518.
5.         [مولّيس] [ك.] [ب] ؛ [فلوونا] [ف.]. [ا] ؛ [سكهرف] [س] ؛ [سيكي] [ر.] [ك] ؛ قرن بوري [غ] ؛ [إرليش] [ه.] [أ.] ، تضخيم خاصّة أنزيميّة [دنا] [إين فيترو]: ال [بولمرس] [شين ركأيشن]. [كلدسبرينغربور] ندوات على [بيولوج] كمّيّة ، 1986
6.         [مولّيس] [ك.] [ب] ؛ [فلوونا] [ف.] [أ.] تأليف خاصّة [دنا] [إين فيترو] عن طريق [بولمرس-كتلزد] [شين ركأيشن]. طرق في [إنزمولوج] ، 1987 ، 155:335 - 50.                
7.         [جبّس] ، [ر.ا] ؛ [دنا] تضخيم ب ال [بولمرس] [شين ركأيشن].  [أنلتيك شميستري] ، 1990 ، 62:1202 - 1214.
8.         [مولّيس] ، [ك.ب] ؛ الأصل نادرة من ال [بولمرس] [شين ركأيشن] ، أمريكية علميّة ، أبريل - نيسان 1990.
9.         [كلبّ] ، [ك] ؛ [كهورنا] ، [هغ] ؛ (1971) [ج.] جزيئة غراميّة. [بيول.] 56 ، 341-346.
10.       [كير] ، [ه] ؛ [دنا] [بولمرس] من [ممّلين سلّ]. [بروغ] [نوكليك سد] [رس] جزيئة غراميّة [بيول.] 1965 ؛4: 81-128.
11.       [فنسلر] ، [بس] ؛ [إيوكروتيك] [دنا] [بولمرس]: جمعيتهم مع النواة وعلاقة إلى [دنا] جوابة. عكس دوليّة [ستول]. 1974 ؛[سوبّل] 4:363 - 415.
12.       [سيكي] [ر.] [ك] ؛ [جلفند] [د.ه] ؛ [ستوفّل] [س] ؛ [سكهرف] [س.] [ج] ؛ [هيغش] [ر] ؛ قرن بوري [غ.] [ت] ؛ [مولّيس] [ك.] [ب] ؛ [إرليش] [ها]. [بريمر-ديركتد] تضخيم أنزيميّة [دنا] مع ثابت بالحرارة [دنا] [بولمرس]. [سكينس] ، 1988 يناير - كانون الثّاني 29 ، 239 (4839): 487-91.
13.       [إرليش] ، [ه.]. [ا] ؛ [جلفند] ، [د] ؛ [سنينسكي] ، [ج.] [ج.] تقدمات أخيرة في ال [بولمرس] [شين ركأيشن]. ، [سكينس] ، 1991 ، [ف.252] ، [ن.5013] ، 1643-1651.
14.       ويليامس ، [جف] ؛ [أبتيميزأيشن سترتج] ل ال [بولمرس] [شين ركأيشن]. [بيوتشنيقوس]. 1989 [جول-وغ] ؛7 (7): 762-9.
15.       [وو] [دي] ، [أوغزّولي] [ل] ، صديقة [بك] ، [قين] [ج] ، [ولّس] [رب].  التأثير من درجة حرارة و [أليغنوكليوتيد] كبسولة تفجير طول على النوعية وفعالية التضخيم ب ال [بولمرس] [شين ركأيشن].  [دنا] خلية [بيول.] 1991 أبريل - نيسان ؛10 (3): 233-8.
16.       [سترشن] ، [ت] ؛ قرأت [أ.ب] ؛ علم وراثة إنسانيّة جزيئيّة 2. 1999. جون [ويلي] & [سنس] [إينك.] فصل 6 قسم 1.
17.       [سكهرف] [س.] [ج] ؛ قرن بوري [غ.] [ت] ؛ [إرليش] [ه.] [أ.] مباشرة استنساخ وتسلسل تحليل من أنزيميّا يضخّ تسلسل [جنوميك]. [سكينس] ، 1986 سبتمبر - أيلول 5 ، 233 (4768): 1076-8.
18.       [كلين] [ج] ، [برمن] [جك] ، [هوغرف] [هّ] ؛ [بكر] حالة إخلاص من [بفو] [دنا] [بولمرس] وأخرى ثابت بالحرارة [دنا] [بولمرس].  [نوكليك سد] [رس]. 1996 سبتمبر - أيلول 15 ؛24 (18): 3546-51.
19.       [فلووا] ، [ف.] ، [ويسّ] ، [س.] ، [فرّ] ، [ف.] ، [مولّيس] ، [ك.] 1990 [6ث] [إينت.كنف]. [أيدس]. [أبستر].
20.       [د]' عقاب ، [ر.ت.] ، [بشتل] ، [ل.ج.] ، [فيدلر] ، [ج.ا] ، [إرون] ، [ج.ج.] ، [غكزك] ، [ب.] ، [كبلن] ، [ج.ك.] 1991.  [نوكليك سد] [رس]. 19:3749.
21.       [دنغ] [ك] ، [جسنا] [سد]. [أليغنوكليوتيد] يسهّل صادّ من [تق] [دنا] [بولمرس] كشف من منخفضة نسخة رقم أهداف ب [بكر]. [ج] جزيئة غراميّة [بيول.] 1996 نوفمبر - تشرين الثّاني 29 ؛264 (2): 268-78.
22.       [كلّوغّ] [د] ، [ربلكين] [إي] ، [شن] [س] ، [موكهمدوفا] ن ، [فلسك] [ت] ، [سبرت] [بد] ، [شنشك] [أ.] [تقسترت] جسم: "وجّه بداية حارّة" [بكر] يسهّل ب يحايد جسم [مونوكلونل] ضدّ [تق] [دنا] [بولمرس]. [بيوتشنيقوس]. 1994 يونيو - حزيران ؛16 (6): 1134-7.
23.       [كرمكشف] [مب] ، [تزكوف] [ا] ، [برنس] [وم]. يزوّد متحولات [كلد-سنستيف] من [تق] [دنا] [بولمرس] بداية حارّة ل [بكر]. [نوكليك سد] [رس]. 2003 نوفمبر - تشرين الثّاني 1 ؛31 (21): 6139-47.
24.       [ه.] اللّي ، [أو.ب.] [جلّنستين] ، [إكس.] [كي] ، [ر.ك.] [سيكي] ، [ه.] [إهرليش] ، و [ن.] [أرنهيم]. (1988). تضخيم وتحليل من [دنا] تسلسل في عنبر وحيد إنسانيّة ومضاعفة خلايا طبيعة 335:414 - 417.
25.       [برنس] [وم]. ؛ [بكر] تضخيم من [أوب تو] 35 [كب] [دنا] مع حالة إخلاص عال وعائد ماليّ عال من [لمبدا] ملتهم جراثيم طبعات. [بروك] [نتل] [أكد] [سكي] [أو.س.]. 1994 مارس - آذار 15 ؛91 (6): 2216-20.
26.       [شنغ] [س] ، [فوكلر] [ك] ، [برنس] [وم] ، [هيغش] [ر.] تضخيم فعّالة من أهداف طويلة من يستنسخ ملحقة و [دنا] إنسانيّة [جنوميك]. [بروك] [نتل] [أكد] [سكي] [أو.س.]. 1994 يونيو - حزيران 7 ؛91 (12): 5695-9.
27.       [كروثرس] [مه] ، [برون] إعلان ، [بوكج] [سل] ، [دودّس] دكتورة ، صيّاد سمك [إف] ، [مكبريد] [لج] ، [متّيوكّي] [م] ، [ستبينسكي] [ز] ، سيلان [جي].  تأليف كيميائيّة [ديوإكسوليغنوكليوتيدس] ب ال [فوسفورميديت] طريقة.  طرق [إنزمول]. 1987 ؛154: 287-313.
28.       [بتّي] [كل] ، [لوغسدون] [نج] ، أندرسن [رس] ، [إسبينوس-لرا] [جم] ، [ملدوندو-رودريغز] [ر] ، تجمد [جد] [3رد]. مورثة تأليف تكنولوجيا: [رسنت دفلوبمنت] وتوقعات مقبلة. [بيوتشنول] [أبّل] [بيوشم]. 1988 ديسمبر - كانون الأوّل ؛10 (6): 510-21.
29.       جسور [كغ]. [ألغ]--[أليغنوكليوتيد] كبسولة تفجير تصميم برنامج ل [أتري] [ست.] [كمبوت] [أبّل] [بيوسكي]. 1990 أبريل - نيسان ؛6 (2): 124-5.
30.       [روزن] [س] ، [سكلتسكي] [ه.] [بريمر3] على [وّو] لمستعملات عامّة ولعالم الأحياء مبرمجات. طرق جزيئة غراميّة [بيول.] 2000 ؛132: 365-86.
31.       موقعة [وورلد ويد وب]: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed بحث: "[بكر]"
32.       فانسنت [م] ، [إكسو] [ي] ، [كونغ] [ه.] [هليكس-دبندنت] متساوي حرارة [دنا] تضخيم. [إمبو] [رب]. 2004 أغسطس - آب ؛5 (8): 795-800. [إبوب] 2004 يوليو-تمّوز 09.           
33.       بول [ربينوو]. يجعل [بكر] ، قصة التقنية حيويّة ، جامعة من شيكاغو صحافة ، 1996