علم الأحياء جزيئيّة بيتيّة علم أخبار علم [فيديوس] [دنا] [رنا] بروتين [بروتيوميكس] بحث [بتا]! [بيوينفورمتيكس] مختبرة تجهيز جزيئيّة علم الأحياء تقنيات جزيئيّة علم الأحياء منتوجات وخدمات متّصلة علم الأحياء خطوات

ترحيب إلى محطة جزيئيّة!

أنت يضطرّ سجّلت قبل أن أنت يستطيع عيّنت على ساحاتنا أو استعملت سماتنا متقدّمة. سجل الآن! ه حرّة وسريعة!

سابقا يسجّل ؟ [لوجن] الآن أدناه.

نسي سابقا يسجّل وكلمت سرّك ؟ طقطقة أدناه أن يستردّ هو.

استردّت كلمة سرّ ضائعة

تلاقيت الآن - هو سريعة وحرّة!

محطة جزيئيّة ال [لرج نتوورك] من باحثات ، عالمات وعلم عاشقات في أيّ مكان!

علم الأحياء جزيئيّة - علم إقتباسات

لا [فكت-فيندينغ] ، غير أنّ حالة بلوغ إلى فلسفة الهدف العلم. [مرتين] [ه.] [فيسكهر]

جزيئيّة علم الأحياء الرسالة الإخباريّة!

أخيرة ساحة موقعات

[ركمبيننت] بروتين تعبير

حقّ نشر © محطة جزيئيّة 2006

عندما يريد أنت أن يميّز مورثة أو بروتين الفائدة ، أنت ينبغي أولى درست عمله. في هذا عصر جزيئيّة ، ليس ينال [كدنا] من مورثتك الفائدة يصعب.

أن عبّر عن ال [كدنا] كبروتين ، [إي]. بروتين [ركمبيننت] ، واحدة يستطيع بعد ذلك بسهولة أنجزت دراسات وظيفيّة يستعمل ال [ركمبيننت] يصفح بروتين.

ما إن أنت تتلقّى يصفح بروتين أنت يستطيع أوصلت:

[بروتين-بروتين] تفاعل تجارب
أنزيم علم حركة
دراسات وظيفيّة من البروتين
دراسات إنشائيّة - بما في ذلك بروتين تبلور ، بروتين بنية و [نمر].
أنت يستطيع أيضا استعملت البروتين أن يجعل أجسام لتجارب بعيد.

هناك اثنان [مين سستم] للتعبير من بروتين [ركمبيننت]. ما إن أنت تحصل [كدنا] ك يستنسخ ، أنت ينبغي قرّرت حيث أنت تريد أن يضخّ بروتينك. هذا سيكون إمّا [بروكروتيك] (جرثوميّة) أو [إيوكروتيك] (عادة خميرة أو ثدّييّة خلية) نظامة. سيقرّر الإختبار من نظامتك الذي متجهة أنت ستحتاج أن يستنسخ [كدنا] ك داخل بما أنّ هناك يكون مادّة حفّازة مختلفة أيّ يعمل في [إ.كلي] وأخرى أنّ يعمل على أحسن وجه مع خميرة أو نظامات ثدّييّة.

هكذا أيّ بروتين تعبير نظامة يريد أنت استعملت ؟

نظامات لبروتين تعبير

[بروكروتيك] بروتين تعبير نظامات

[بروكروتيك] [ركمبيننت] بروتين تعبير يتلقّى نظامات عدّة ميزات. هذا يتضمّنون سهولة الثقافة ، وسريعة خلية حالة نموّ معنى جدّا أنت لن تضطرّ انتظرت طويلا أن يحصل بروتين من نظامات جرثوميّة ما إن أنت تستنسخ [كدنا] ك. تعبير يستطيع كنت حثثت بسهولة في جرثوميّة بروتين تعبير نظامات يستعمل [إيبتغ]. أيضا ، تطهير الى حدّ بعيد بسيطة في [بروكروتيك] تعبير نظامات وهناك وفرة من عدد تجاريّة يتوفّر ل [ركمبيننت] بروتين تعبير.

[أن ث ون هند] ، إن أنت تحتاج أن يستعمل بروتيناتك لوظيفيّة أو دراسات أنزيميّة نظامات [بروكروتيك] مشكلة بما أنّ كثير بروتينات يصبحون غيرقابل للحلّ في تضمن أجسام وجدّا يصعب أن يستردّ كبروتينات وظيفيّة. علاوة على ذلك ، لا يضاف أكثر [إيف نوت] كلّ تعديلات [بوست-ترنسلأيشنل] بجراثيم ولذلك بروتينك الفائدة يمكن لا يكون وظيفيّة. دراسات أنزيميّة لذلك يمكن كنت [أونفرويتفول].

[إيوكروتيك] تعبير نظامات

[إيوكروتيك] ليس مورثات حقّا "[أت هوم]" في خلايا [بروكروتيك] ، [إفن وهن] هم عبّر عن تحت التحكم من المتجهات [بروكروتيك]. واحدة سبب أنّ [إ.] [كلي] يميّز خلايا غالبا البروتين منتوجات من يستنسخ مورثات [إيوكروتيك] كدخيلات ويدمّرهم. آخر أنّ لا يوفي [بروكروت] ال نفسه أنواع من [بوستّرنسلأيشنل] تعديل مثلما [إيوكروت] يتمّون. مثلا ، عبّر عن بروتين أنّ عادة كنت زوّجت إلى [سوغرس] في خلية [إيوكروتيك] كنت كبروتين عارية عندما يستنسخ في جراثيم. هذا يستطيع أنجزت بروتين نشاط أو استقرار ، أو على الأقلّ إستجابته إلى أجسام. أكثر مشكلة جدّيّة أنّ ليس الداخلية من خلية جرثوميّة بما أنّ مسبّبة إلى طي مناسبة من بروتينات [إيوكروتيك] كالداخلية من خلية [إيوكروتيك]. غالبا ، طويت النتيجة مناسبا ، منتوجات غير فعّال من يستنسخ مورثات.

[إيوكروتيك] يتضمّن نظامات للتعبير البروتين:

خميرة
[ممّلين سلّ]
[بكلوفيروس] خلايا (حشرة)

كلّ هذا نظامات نظامات عظيمة [إيوكروتيك] للتعبير من بروتينات [ركمبيننت].
يتضمّن ميزات من [إيوكروتيك] بروتين تعبير نظامات الحقيقة أنّ أنت يستطيع حصلت مستويات عال تعبير جدّا. البروتينات يتيح أن يصفح يستعمل بطاقات خاصّة أيّ يكون مدرجة داخل المتجهات بما في ذلك خاصّتي ، [مك] وأخرى بطاقات.

أنت يستطيع حتّى اشتريت [بلسميد] أيّ يفرز بروتينك داخل الأوساط. لذلك أنت يستطيع حافظت ينمو نظامتك ويجمع الأوساط دون [لز] خلاياك. هناك ما من تضمن أجسام أن يقلق حوالي ويتلقّى بروتيناتك تعديلات مصونة [بوست-ترنسلأيشنل]. هذا حيويّة إن أنت يكون تدرس العمل من بروتين [أند/ور] [بروتين-بروتين] تفاعلات.

يتضمّن السيئات من [إيوكروتيك] بروتين تعبير نظامات الحقيقة أنّ خلايا [إيوكروتيك] ينموون بطيئة من خلايا [بروكروتيك].

تعبير متجهات مع مادّة حفّازة قوّيّة

العمل رئيسيّة من تعبير متجهة أن ينتج المنتوج من [جن-] عادة ، ال كثير منتوج الجيّدة. لذلك ، تعبير جهّزت متجهات عادة مع مادّة حفّازة قوّيّة جدّا ؛ التفسير سبب أنّ ال كثير [مرنا] أنّ يكون أنتجت ، سيجعل ال كثير بروتين منتوج كنت.
واحدة هذا مادّة حفّازة قوّيّة ال [ترب] ([تربتوفن] [أبرون]) مادّة حفّازة. هو يشكّل الأساس ل عدّة تعبير متجهات ، بما في ذلك [بتربل1]. هو يتلقّى [ترب] مادّة حفّازة/مشغلة منطقة ، يتبع ب [ريبوسم] [بيندينغ ست] ، ويستطيع كنت استعملت مباشرة كتعبير متجهة ب يدخل مورثة أجنبيّة داخل [كلي] موقعة. بالتّعاقب ، ال [ترب] تحكم منطقة يستطيع كنت جعلت "قابل للنقل" ب يقطع هو خارجا مع [كلي] و [هيندييي] ويدخل هو أمام مورثة أن يكون عبّر عن في آخر متجهة

قابل للحثّ تعبير متجهات

هو عادة [أدفنتجووس] أن يحافظ يستنسخ مورثة [ربرسد] إلى أن نحن يتأهّب أن عبّر عن هو. واحدة سبب أنّ بروتينات [إيوكروتيك] ينتج في كمّيّة كبيرة في جراثيم يستطيع كنت مسمّة. [إفن يف] هذا بروتينات ليسوا واقعيّا مسمّة ، يستطيع هم [بويلد وب تو] أوخ مستويات عظيمة أنّ هم يتدخّلون مع حالة نموّ جرثوميّة. في إمّا حالة ، إن ال يستنسخ مورثة كان سمحت أن يبقى يلتفت فوق باستمرار ، [غروو تو] الجراثيم يحمل المورثة أبدا عظيمة بكفاية تركيز أن ينتج كمّيّة ذو معنى من بروتين منتوج. الحل أن يحافظ ال يستنسخ مورثة يلتفت باتّجاه آخر ب يضع هو [دوونسترم وف] مادّة حفّازة قابل للحثّ أنّ يستطيع كنت التفتت باتّجاه آخر.
الصمغ لكّ مادّة حفّازة قابل للحثّ [تو ا سرتين إكستنت] ، فرضا متبقّي باتّجاه آخر حتّى يحثّ بالاصطناعيّة محث [إيسبروبلثيوغلكتوسد] ([إيبتغ]). مهما ، القمع يسبّب بالصمغ لكّ [ربرسّور] ناقصة ، وسيلاحظ بعض تعبير من ال يستنسخ مورثة كنت حتّى في [ث بسنس] المحث. [أن-وي] حول هذا مشكلة أن عبّر عن مورثتنا في [بلسميد] أو [فجميد] أنّ يحمل ه خاصّة [لس] مورثة ، بما أنّ [ببس] يتمّ. أنتج ال [ربرسّور] زائدة ب هذا متجهة كتيف دعمنا يستنسخ مورثة يلتفت باتّجاه آخر إلى أن نحن يتأهّب أن يحثّ هو مع [إيبتغ].
آخر إستراتيجية أن يستعمل مادّة حفّازة [تيغتلي كنترولّد] ك ال λ مادّة حفّازة [فج] [بل]. تعبير استنسخت متجهات مع هذا مادّة حفّازة/مشغلة نظامة داخل [هوست سلّ] يحمل [تمبرتثر-سنستيف] λ [ربرسّور] مورثة ([ك1857]). [أس لونغ س] يحافظ نحن الدرجة حرارة من هذا خلايا نسبيّا منخفضة ([32ك]) ، ال [ربرسّور] يعمل ، وما من تعبير يتمّ. مهما ، عندما يرفع نحن الدرجة حرارة إلى المستوى [نونبرميسّيف] ([42ك]) ، ال [ربرسّور] [تمبرتثر-سنستيف] يستطيع [نو لونجر] عملت وال يستنسخ مورثة حثثت.

تعبير متجهات أنّ ينتج انصهار بروتينات

عندما كثير تعبير يشغل متجهات ، هم ينتجون انصهار بروتينات. هذا أمكن أوّلا بدات سيئة لأنّ ال [نتثرل برودوكت] من ال يدخل مورثة يكون لا يجعل. مهما ، ال [أمينو سد] إضافيّة على الانصهار بروتين يستطيع كنت مساعدة عظيمة في يصفح البروتين منتوج.

يتلقّى اعتبرت ال [أليغ-هيستيدين] تعبير متجهات ، واحدة [أف وهيش] ال [ترد نم] [بترشس]. هذا يتلقّون تسلسل قصيرة فقط [أوبسترم وف] ال يتعدّد استنساخ موقعة أنّ يرمّز إمتداد من ستّة هستدينات. لذلك ، سيكون بروتين عبّر عن في هذا متجهة انصهار بروتين مع ستّة هستدينات في نهايته أمينيّة. لماذا نحن أردنا أن يربط ستّة هستدينات إلى بروتيننا ؟ [أليغ-هيستيدين] يتلقّى مناطق مثل هذا انجذاب عال لمعدنات مثل نيكل ، لذلك نحن يستطيع صفحت بروتينات أنّ يتلقّى هذا مناطق يستعمل نيكل انجذاب عمليّة فصل لونيّ. الجمال من هذا طريقته بساطة وسرعة. عقب قد جعل الجراثيم الانصهار بروتين ، نحن ببساطة [لز] هم ، يضيف ال [سرود] مقتطف جرثوميّة إلى نيكل انجذاب عمود ، يغسل خارجا كلّ بروتينات [أونبووند] ، بعد ذلك يطلق الانصهار بروتين مع هستدين أو هستدين متناظرة يدعى [إيميدزول]. يسمحنا هذا إجراء أن يحصد أساسا انصهار صافية في فقط واحدة خطوة. هذا يمكن لأنّ جدّا قليل إن أيّ بروتينات طبيعيّة يتلقّون [أليغ-هيستيدين] مناطق ، لذلك نا انصهار بروتين يكون أساسا الوحيدة واحدة أنّ يقيّد إلى العمود.

ماذا إن نحن نريد نا [بروتين-فر] من ال [أليغ-هيستيدين] بطاقة ؟

يزوّد المصممات من هذا متجهات يتلقّى [ثووغتفولّي] طريق أن يزيل هو. [جوست بفور] ال يتعدّد استنساخ موقعة ، هناك [كدينغ] منطقة لإمتداد ال [أمينو سد] يميّز ب ال [بروتيولتيك] أنزيم [إنتروكينس]. هكذا نحن يستطيع استعملت [إنتروكينس] أن يفرج الانصهار بروتين داخل اثنان أجزاء: ال [أليغ-هيستيدين] بطاقة والبروتين نحن نريد. الموقعة يميّز ب [إنتروكينس] جدّا نادرة ، والفرصة أنّ يتواجد هو في بروتيننا هيّنة. لذلك ، بروتيننا سوفت لا يكون شطرت فوق بما أنّ نحن يكون نزيل ه [أليغ-هيستيدين] بطاقة. إن نحن نريد ، نحن يستطيع ركضت ال [إنتروكينس-كلفد] بروتين من خلال النيكل عمود مكرّر أن يفصل ال [أليغ-هيستيدين] [فرغمنتس] من البروتين الفائدة.

λ يخدم [فج] يتلقّى أيضا كالأساس لتعبير متجهات ؛ واحدة يصمّم خصوصا [ثيس بوربوس] [غت11]. يحتوي هذا [فج] صمغ لكّ تحكم منطقة يتبع ب ال [لكز] مورثة. الاستنساخ حددت موقعات ضمن ال [لكز] مورثة ، لذلك منتوجات من مورثة يدخل داخل هذا متجهة سيكونون انصهار بروتينات مع زعيمة ال [ب-غلكتوسدس].
التعبير قد أصبح متجهة [غت11] عربة شعبيّة ل يجعل ويحجب [كدنا] مكتبات. [غت11] يسمحنا أن يحجب مجموعة من يستنسخ مباشرة للتعبير من ال يصحّ بروتين. العناصر رئيسيّة يتطلّب ل هذا إجراء [كدنا] مكتبة في [غت11] ومصل مضادّ يوجّه ضدّ البروتين الفائدة.
نحن نصفح نا λ [فج] مع مختلفة [كدنا] ملحقة ويلطّخ البروتينات يطلق ب كلّ أنسوخ على دعم مثل [نيتروسلّولوس]. ما إن نحن قد [ترنسفرّد] البروتينات من كلّ لوح معدنيّ إلى [نيتروسلّولوس] ، يسبر نحن مع مصل مضادّنا. بعد ذلك ، يفتّش نحن جسم يحدّ إلى بروتين من لوح معدنيّ خاصّة ، يستعمل يعلم بروتين [ا] من [ستفلوككّوس وريوس]. يقيّد هذا بروتين بإحكام إلى جسم ويعلم ال يماثل بقعة على ال [نيتروسلّولوس]. نحن نكشف هذا علامة مميّزة بتصوير إشعاعيّ ذاتيّ أو ب [فوسفوريمجنغ] ، بعد ذلك يذهب إلى لوحتنا رئيسيّة ويلتقط ال يماثل لوح معدنيّ. لاحظت أنّ نحن يكشف انصهار بروتين ، لا البروتين من فائدة بنفسي. علاوة على ذلك ، لا يهمّ هو إن نحن قد استنسخنا [كدنا] كاملة أو لا. مصل مضادّنا خليط الأجسام أنّ سيتجاوب مع عدّة أجزاء مختلفة من بروتيننا ، هكذا حتّى مورثة متحيّزة سيتمّ ، [أس لونغ س] ه [كدينغ] استنسخت منطقة في ال نفسه توجيه وقراءة إطار بما أنّ ال [ب-غلكتوسدس] [كدينغ] منطقة.

رأيت لسريعة [ركمبيننت] بروتين تعبير مراجعات:

[ركمبيننت] بروتين نظامات

أرسلت إلى صديقة أرسلت هذا صفحة إلى صديقة

[بيوينفورمتيكس] ، بروتوكولات ، [دنا] [رنا] بروتين [بروتيوميكس]

محطات بين الخلايا