كفلت/أعلنت & اقترنت إلى نا & اتّصل بنا & حول نا & ساعدتنا

علم الأحياء جزيئيّة [بلوغ]

أخيرة ساحة موقعات

 

لطخة جنوبيّة

حقّ نشر 2007 محطة جزيئيّة

خلفيّة على جنوبيّة يلطّخ

تاريخ من الجنوبيّة لطخة تقنية

جنوبيّة يلطّخ تقنية يعيّن بعد ه مخترعة ومطورة ، العالم الأحياء بريطانيّة أدوين [م.] جنوبيّة في 1975. جنوبيّة يلطّخ تقنية أيّ يسمح الكشف من خاصّة [دنا] تسلسل (مورثة أو أخرى) في كبيرة ، عينة معقّدة [دنا] ([إ.غ.] [دنا] خلويّة).

"قبل [بكر] وبثمن زهيد يصوم يسلسل غيّر منظرتنا من الكون أنّ يكون علم وراثة ، اللطخة جنوبيّة كان حصان شغل عالميّة. هناك [ب] لم تجربة في علم وراثة جزيئيّة أيّ لم [أت سم ستج] استخدم لطخة جنوبيّة. هو بعد أداة مفيدة ويحتاج أنت أن يعرف حول هو [س ثت] أنت يستطيع فسّرت معطيات تاريخيّة."

جنوبيّة يلطّخ إجراء

رسم بيانيّ من الجنوبيّة لطخة تقنية. رقم حقّ نشر. اتّصل بنا إن أنت أحبّت أن يستعمل هو لمحاضرة أو علم مشروع ، رجاء لإذن.

في خطوة 1 ، هضمت [دنا] مع حصر [إندونوكلس]. هضمت [دنا] [هيغ-مولكلر-ويغت] داخل [فرغمنتس] صغيرة.

في خطوة 2 ، فصلت ال [دنا] بعد ذلك خارجا بحجم بإستشراد على [أغروس] هلام.

في خطوة 3 ، وضعت صفح من نيلون أو [نيتروسلّولوس] غشاء (أرجوانيّة) [أن توب وف] ال [أغروس] هلام في [بوفّر سلوأيشن]. هذا اعتبرت ال يلطّخ أو [ترنسفرّينغ] مرحلة. ضغطة طبّقت بالتّساوي إلى الهلام يستعمل إمّا مص أو ب يضع كومة ال [ببر توول] ووزن [أن توب وف] الغشاء وهلام أن يضمن حتّى اتّصال بين هلام وغشاء. مصد استعملت إنتقال بعمل شعريّة من منطقة من [هي وتر] إحتمال إلى منطقة من منخفضة ماء إحتمال (عادة [فيلتر ببر] وورقة نساج) بعد ذلك أن يتحرّك ال [دنا] من الهلام فوق إلى الغشاء. إيجابيّا استعملت يحمّل غشاء (أرجوانيّة) عادة أيّ يسمح ال [دنا] أن يقيّد مع انجذاب عال إلى الغشاء من خلال أيون تفاعلات بين ال سلبيّا يحمّل [دنا] وإيجابيّا يحمّل غشاء.

في خطوة 4 ، [نيتروسلّولوس] خبزت أغشية بانكشاف إلى [هي تمبرتثر] ([فروم] 60 [تو] 100 [ك]). عرضت أغشية من نايلون إلى إشعاع [أوف]. استعملت هذا [ستبس] أن يضمن الدائمة ورابط تشابكيّ إسهاميّ ترابط من ال [دنا] حاضرة في النطق إلى الأغشية.

في خطوة 5 ، عرضت الغشاء إلى تحقيق [رديولبلد]. هذا تحقيق [سنغل-سترندد] [دنا] جزء أيّ يتلقّى تسلسلك الفائدة أنّ أنت تريد أن يكشف. حضنت هذا تحقيق مع الغشاء وسمحت أن يهجّن مع [دنا] على الغشاء. تحقيقات عادة [رديولبلد] [س ثت] هم يمكن كنت كشفت على فيلم ، ولكن استعملت تحقيقات جديدة أيضا أيّ يكون [نون-رديوأكتيف] مثل لاصفة أو اصباغ خاصّ بتوليد الصّبغ. بعد تهجين ، غسلت تحقيق زائدة [أونبووند] بعيدا من الغشاء ، يترك خصوصا يحدّ تحقيق.

في خطوة 6 ، كشفت الأسلوب التهجين بتصور على [إكس-ري فيلم] بتصوير إشعاعيّ ذاتيّ [إين ث كس وف] إشعاعيّة أو تحقيقات لاصفة ، أو بتطوير اللون على الغشاء إن [دتكأيشن مثود] خاصّ بتوليد الصّبغ يكون استعملت.

 

(بطاقات لخطوة 3: إن كبيرة [دنا] [فرغمنتس] يكونون حاضرة [غرت ثن] 15 [كب] في حجم يمكن كنت [دبورينتد] [بي ثن] محلولة [هكل] حامض قبل يلطّخ أيّ سيكسر ال [دنا] داخل قطعات صغيرة ، لذلك يسمح أكثر إنتقال فعّالة من الهلام إلى غشاء. إن قلويّة إنتقال طرق يكون استعملت ، ال [دنا] وضعت هلام داخل حل قلويّة (بشكل خاصّ يحتوي صوديوم هيدروكسيد) أن يشوّه ال [دنا] [دووبل-سترندد]. يزوّد المسخ في بيئة قلويّة ل يحسن التصاق من ال سلبيّا يحمّل [دنا] إلى إيجابيّا يحمّل غشاء ، يفصل هو داخل وحيدة [دنا] طيقان لتهجين متأخّرة إلى التحقيق (يرى أدناه) ، ويدمّر أيّ [رنا] متبقّية أنّ يمكن بعد كنت حاضرة في ال [دنا].

 

نظرة عامّة

وسائل سمعيّة: استمعت إلى مفصّلة جنوبيّة لطخة شرح! ملاطفة: وطنيّة إنسانيّة جينات [رسرش ينستيتثت].

بما أنّ يذكر ، اللطخة جنوبيّة تقنية يستعمل أن يعيّن وحددت [دنا] تسلسل أيّ يكون متمّمة إلى آخر قطعة ال [دنا] يدعى تحقيق.

لطّخت الفصل على هلام استشراديّ من تسلسل أو [فرغمنتس] من [جنوميك] أو [دنا] متمّمة ، جزئيّا يهضم ب [إندونوكلس] ، ال [فرغمنتس] بعد ذلك "" على غشاء وسمحت أن يهجّن مع مواصفة ، يعلم تحقيق [إين وردر تو] كشفت الذي نطق يحتوون الجزء أو مورثة الفائدة. لطخة جنوبيّة بشكل خاصّ مفيدة في يكشف كبيرة مورثة إعادة تنظيم/حذف وكبيرة [ترينوكليوتيد] تكرار توسعات.

لطخة جنوبيّة طريقة برتابة يستعمل في علم الأحياء جزيئيّة أن يفحص للوجود من [دنا] تسلسل في [دنا] عينة. جنوبيّة يضمّ يلطّخ [أغروس] هلام إستشراد لحجم فصل ال [دنا] مع طرق أن ينقل ال [سز-سبرتد] [دنا] إلى مرشح غشاء لتحقيق تهجين. أخرى عيّنت يلطّخ طرق ([إي.] ، لطخة غربيّة ، لطخة شماليّة ، لطخة جنوبيّ غربيّ) أنّ يستخدم مبادئ مماثلة ، غير أنّ يستعمل [رنا] أو بروتين ، يتلقّى فيما بعد يكون في مرجع إلى اسم [سوثرن'س]. بما أنّ التقنية كان [إبونمووسلي] عيّنت ، لطخة جنوبيّة سوفت كنت رسملت ، حيث أنّ شماليّة ولطخات غربيّة سوفت لا.

هو أيضا استعملت أن يحدّ ال [مولكلر ويغت] من حصر جزء وأن يقيس مبلغات نسبيّة في عينات مختلفة.

لطخات تقنيات ل [ترنسفرّينغ] [دنا] و [رنا] بروتينات على شركة نقل جويّ لذلك هم يستطيع كنت فصلت ، وغالبا يتبع الإستعمال من هلام إستشراد. استعملت اللطخة جنوبيّة ل [ترنسفرّينغ] [دنا].

 

يشير تهجين من التحقيق إلى خاصّة [دنا] جزء على المرشح غشاء أنّ هذا جزء يحتوي [دنا] تسلسل أنّ يكون متمّمة إلى التحقيق.

تطبيقات من الجنوبيّة لطخة طريقة

استعملت لطخات جنوبيّة في عدّة مناطق رئيسيّة بما في ذلك مورثة إكتشاف ويخطّط ، تطور وتطوير دراسات ، تشخيص و [فورنسكس].

• يسمح لطخات جنوبيّة محققات أن يحدّ ال [مولكلر ويغت] من حصر جزء وأن يقيس مبلغات نسبيّة في عينات مختلفة.
• استعملت لطخة جنوبيّة أن يكشف الوجود من لقمة خاصّة [دنا] في عينة
• حللت الأساليب وراثيّة أيّ يظهر في شخص [دنا].
• حللت حصر هضم تشظية من [دنا] أو عينة أحيائيّة
• في إحترامات إلى وراثيّا يعدّد كائن حيّ ، جنوبيّة استعملت يلطّخ بما أنّ إختبار محدّدة أن يضمن أنّ قسم خاصّة [دنا] من يعرف تسلسل وراثيّة يتلقّى يكون بنجاح أدمجت داخل الجينات من المضيفة كائن حيّ.

 

[دتكأيشن ليميت] من جنوبيّة يلطّخ

تحت شروط أفضل ، جنوبيّة يكشف يلطّخ ~ 0.1 [بغ] من ال [دنا] من فائدة

جنوبيّة لطخة مصد وصفات

[20إكس] [سّك] مصد

أضفت أن يجعل 1 [ليتر] من [20إكس] [سّك] مصد ، التالي:

• [3م] [نكل]: 175.3 [غ]
• [0.15م] [نا] ليمونات: 88.2 [غ]
• [ده2و]: 800 [ملس]
• [ف] إلى 7.0 مع [هكل] (0.1-0.5 [ملس] [أبّروإكس.])

جنوبيّة لطخة بروتوكول

1. صورة هلام مع مسطرة.
2. شوّهت الهلام ل 30 [مين] في [رت] ([رووم تمب]) ، يهزّ ، مع 0.5 [م] [نوه] ، 1.5 [م] [نكل]
3. عمليّة شطف مع [ه2و] [2إكس-3إكس] أوقات
4. حايدت: 30 [مينس.] ، [رت] ، يهزّ
5. بينما يحايد ، قطع يقطع غشاء أن يلائم هلام ، [3مّ] ورقة (3-4 صفاح) إلى حجم من الهلام ، يعدّ حجم مناسبة [ببر توول] ل يلطّخ.
6. ثبتت فوق يلطّخ: 2 طبقات من [3مّ] ورقة كفتيل داخل [20إكس] [سّك]. يزيل هلام [أن توب وف] فتيل ، أيّ [بوبّلسبر-وتّد] غشاء (في [2إكسسّك]) [أن توب وف] هلام
7. [3مّ] ورقة [أن توب وف] غشاء ، [ببر توول] [أن توب وف] [3مّ] ورقة. [500غ] وزن [أن توب وف] [ببر توول].
8. 6-18 [هر] أن يلطّخ
9. يشرق مرشح [أير دري] ، [أوف] 3.5 [مين]
10. غسلت مرشح في [2إكس] حارّة [سّك] 0.1% [سدس] مرّتين

يتحرّى ومشاكل ؟ رأيت ال [دنس] [فووتبرينتينغ] ساحة!

عيّنت لمشاكل ويتحرّى جنوبيّة يلطّخ ، خيط سنّ اللولب جديدة أن يتناقش هو في الجنوبيّة يلطّخ ساحة!

أخرى [دنا] بروتوكولات وطرق

[دنا] استنساخ مرشدة

[دنا] هلام إستشراد

حصر أنزيم هضم - كلّ أنت تحتاج أن يعرف!

[جنوميك] [دنا] عمليّة عزل بروتوكول

[بستريا] [دنا] عمليّة عزل