كفلت/أعلنت & اقترنت إلى نا & اتّصل بنا & حول نا & ساعدتنا

علم الأحياء جزيئيّة [بلوغ]

أخيرة ساحة موقعات

 

[دنا] ترسيب

 

راسب [دنا]

[دنا] ترسيب يستعمل ملح وإيثانول بروتوكول [كمّونلي وسد] في المختبرة ل يركّز [نوكليك سد] مثل [دنا] و [رنا]. الطريقة أساسيّة ملح وأضفت إيثانول إلى ال [أقويووس سلوأيشن] ، أيّ يجبر ال [نوكليك سد] أن يعجّل من حل. يعزل [كّنتريفوغأيشن] من ال يعجّل [نوكليك سد] ويغسل ال [نوكليك سد] من الإستراحة من الحل. غسلت الكريّة طينيّة محمّض نوويّ [أسد كنتينينغ] بعد ذلك مع برن 70% إيثانول أن يزيل الملح.

بعد ذلك ثاني طرد مركزيّ استعملت خطوة أن يعزل ال [نوكليك سد] بعيدا من الإيثانول يسمح الإيثانول أن يكون أزلت. ال [نوكليك سد] سمحت كريّة طينيّة بعد ذلك أن ينشّف ، وبعد ذلك علقت في طازجة مائيّة [ت] ([تريس]) مصد أو ماء.

 

كيف [دنا] ترسيب يعمل ؟

يفهم واحدة عفن أولى لما [نوكليك سد] يكونون قابل للذوبان في ماء.

ماء ([ه2و]) جزيء قطبيّة أنّ يتلقّى حشوة متحيّزة سلبيّة قرب ال [أإكسجن توم] واجبة ال [أونشرد] أزواج الإلكترونات ، وحشوات متحيّزة إيجابيّة قرب الهيدروجين ذرة.

واجبة إلى هذا طبيعة قطبيّة من ماء ، أخرى جزيئات قطبيّة مثل [دنا] أو [رنا] يستطيع تفاعلت بالكهرباء السّاكنة مع ال [وتر مولكل] ، يسمحهم أن بسهولة ذوّبت في ماء.

ترسيب يكسر هذا تفاعل ويخلق [نو ون] ، يسمح ال [دنا] أو [رنا] أن [كم ووت وف] حل وكنت عزلت بسهولة.

ملح في [دنا] ترسيب

ملح دور في البروتوكول أن يحايد الحشوات على السكر فسفات عمود فقريّ من ال [نوكليك سد] ما إذا [دنا] أو [رنا]. يتضمّن ملاح [كمّونلي وسد] في [دنا] و [رنا] ترسيب صوديوم [أستت].

في حل [أقيووس] ، صوديوم يكسر [أستت] فوق داخل [ن] و[[ش3كو]] -. ال إيجابيّا يحمّل صوديوم يحايد أيونات سلبيّا يحمّل عمود فقريّ على ال [دنا] ، خصوصا ال [بو3-] مجموعة على ال [نوكليك سد] ، يجعل ال [نوكليك سد] جزيء بعيد أقلّ أليف للماء ، ولذلك كثير أقلّ [سلوبل] في ماء.

 

إيثانول في [دنا] ترسيب

أمرت حالة جذب خاصّ بالكهرباء السّاكنة بين ال [ن] أيونات في حل وال [بو3-] أيونات بكولومب [لو] ، أيّ يكون أثرت بالثابتة [ديلكتريك] من الحل. ماء يتلقّى ثابتة عال [ديلكتريك] ، أيّ يجعل هو تماما يصعب ل ال [ن] و [بو3-] أن يأتي معا. يتلقّى إيثانول [أن ث ون هند] كثير ثابتة [لوور] [ديلكتريك] ، يجعل هو كثير يتيح ل [ن] أن يتفاعل مع ال [بو3-] ، حميت هو حشوة وجعلت ال [نوكليك سد] أقلّ أليف للماء ، يسبّب هو إلى قطرة من حل.

 

درجة حرارة في ترسيب

ذكرت حضانة من ال [نوكليك سد]/ملح/إيثانول خليط في [لوو تمبرتثر] ([إ.غ.] -20 أو [-80ك]) عادة في بروتوكولات [أس نسسّري] في بروتوكولات. [نوكليك سد] مهما في تركيزات مثل منخفضة بما أنّ سيعجّل [20نغ/مل] في [0-4ك] لذلك حضانة ل 15-30 دقائق على جليد كاف.

 

 

[دنا] ترسيب بروتوكول

الهدف من هذا بروتوكول أن يعجّل [دنا] ، بما أنّ العظيمة يقول. زوّجت هذا عادة مع فينول [كوروفورم إكستركأيشن] واستعملت كطريق من ييصفّي [نوكليك سد]. هذا يستطيع أيضا كنت استعملت كطريقة ل يغيّر ما حل أو يصدّ [نوكليك سد] ك يكون [إين.].

يعمل هذا بروتوكول أيضا ل [رنا] ترسيب (لقطة عناية إلى نا [رنس] [متريلس] حرّة [إين ثيس كس]).

• [3م] [نوأك] [ف] 5.2
• [إتوه] 95%
• سكاكرين (اختياريّة)

1. 1/10 حجم [نوأك].
2. [1ول] سكاكرين.
3. 2 حجوم [إتوه].
4. [-20ك] بين عشيّة وضحاها أو [30مين] [-80ك.].
5. طردت [12ك] [غ] ل على الأقلّ 15 [مينس.].
6. أزلت مادّة طافية
7. علقت في ب رغب حجم من ماء/مصد

[-20ك] لساعة بشكل جيّد ل يستعمل كبيرة ([1مل] من جرثوميّة ثقافة ، [بلسميد]) مبلغات ال [دنا]

ال [دنا] [ب] كريّة طينيّة لن دائما مرئيّة [دبندينغ ون] [هوو موش] [دنا] أنت يكون تعجّل. هكذا دائما لقطة عناية في يحمّل عيناتك في النابذة أن يتذكّر الاتّجاه هم يكون يواجهون. ال [دنا] سيكون كريّة طينيّة [أن ث برت وف] الأنابيب يواجه الخارج من النابذة.

سيعجّل هذا بروتوكول كلّ [نوكليك سد] ، لا [دنا] صحيحة. إن أنت لا تريد [رنا] في عينتك ، واحدة من ال كثير طرق أن يعالج مع هو أن ببساطة علقت في [ت]+[رنس] في الخطوة متأخّرة وتركت هو في [رووم تمبرتثر] ل [15مينس-1هر].

إن ملح يعجّل ، هو يستطيع بسهولة كنت أزلت ب يغسل مع 70% [إتوه]. لن يذوّب ال [دنا] في [رووم تمبرتثر] ،
غير أنّ يريد الملح. (هذا يستطيع أيضا كنت استعملت أن يزيل [كسكل]. أنا أجد [ا فو] غسلات مع 70% [إتوه] يتيح من ديلزة عندما أنا يضطرّ أزلت [كسكل] من [بلسميد] [برب]. بطاقة: لا يبرّد عندما يزيل [كسكل] ، أيّ يتلقّى معاملة [هيغ-تمبرتثر] حل.)

[دنا] ترسيب أطراف

 

• إختبار الملح
  • استعملت صوديوم [أستت] ([0.3م] نهائيّة مركّزة ، [ف] 5.2) لروتينيّة [دنا] ترسيبات
  • استعملت [سديوم كوريد] ([0,2م] نهائيّة مركّزة) ل [دنا] عينات يحتوي [سدس] بما أنّ [نكل] كتيف دعم [سدس] [سلوبل] في 70% إيثانول لذلك هو لن يعجّل مع ال [دنا].
  • استعملت عنصر ليثيوم كلوريد ([0.8م] نهائيّة مركّزة) ل [رنا]. هذا لأنّ 2.5-3 حجوم الإيثانول سوفت كنت استعملت ل [رنا] ترسيب و [ليكل] يكون أكثر قابل للذوبان في إيثانول من [نك] لذلك لن يعجّل ، غير أنّ يحذر - كلوريد سيمنع أيونات بروتين تأليف و [دنا] [بولمرس] لذلك [ليكل] ما من الخير ل [رنا] [بربس] لترجمة [إين فيترو] أو نسخة تسجيل عكسيّة. استعملت في هذا حالات ، [نك].
  • استعملت أمونيوم [أستت] ([2م] نهائيّة مركّزة) للإزالة ال [دنتبس] ، غير أنّ لا يستعمل لتحضير ال [دنا] ل [ت4] [بولنوكليوتيد] مؤنزمة ردّ فعل بما أنّ أمونيوم أيونات يمنعون الأنزيم.

 

• أن يصلح يزيد العائد ماليّ في ترسيبات من تركيز منخفضة أو [نوكليك سد] صغيرة (أقلّ من 100 [نوكليوتيد])
  • أضفت [مغكل2] إلى تركيز نهائيّة من [0.01م]
  • زدت الوقت من حضانة جليد قبل طرد مركزيّ إلى 1 ساعة.