كفلت/أعلنت & اقترنت إلى نا & اتّصل بنا & حول نا & ساعدتنا

علم الأحياء جزيئيّة [بلوغ]

أخيرة ساحة موقعات

 

[دنا] [فووتبرينتينغ]

حقّ نشر 2007 محطة جزيئيّة

خلفيّة على [دنا] [فووتبرينتينغ]

[دنس] [فووتبرينتينغ] جزيئيّة علم الأحياء طريقة أنّ يمكّن الكشف من [دن-بروتين] تفاعلات ب يستغلّ الخاصية أنّ سيحمي بروتين يتفاعل مع [دنا] ال [دنا] في أنّ تفاعل موقعة من حصر هضم أو [دنس] تفلج أنزيميّة. [دنا] حصر علمت جزء أيّ يحتوي ال [بيندينغ ست] خاصّة في واحدة نهاية ، عادة مع [32ب] واستعملت ل [فووتبرينتينغ].

سمحت بروتين و [دنا] أن يهجّن وقيّدت معا.

يستعمل [دنا] [فووتبرينتينغ] الأنزيم [دنس] [إي] أو [ديوإكسريبونوكليك سد] [نوكلس] [إي] [إين وردر تو] هضمت أو [كت وي] حرّة [رديولبلد] (أو يعلم) [دنا] يترك ال [دنا] [بروتين بووند] يحمى. ال [دنا] حصر عاملت [فرغمنتس] برفق مع [دنس] [إي] ، أيّ يجعل [سنغل-سترند] كسور (شقوق) في ال [دنا]. استعملت [سملّ موونت] الأنزيم مثل هذا أنّ هناك معدل من أقلّ من 1 شقّ/طاق. توقّفت الردّ فعل بعد ذلك ، ال [دنا] شوّهت ، والخليط ركضت على يشوّه أكريلاميد متعدّد يسلسل هلام. عرضت هذا [فرغمنتس] يفصل بهلام إستشراد أن يكشف ال يحمى [دنا] منطقة ب يحلّ ال [بندينغ] تفلج أسلوب على الهلام.

التفلج قارنت أسلوب من ال [دنا] في [ث بسنس] من [دنا] بروتين ملزمة ، بشكل خاصّ يحال ك [دنا] حرّة ، إلى التفلج أسلوب ال [دنا] بحضور [دنا] بروتين ملزمة. إن البروتين يقيّد [دنا] ، حميت ال [بيندينغ ست] من تفلج أنزيميّة. سينتج هذا حماية في منطقة واضحة على الهلام أيّ يكون أحلت ك ال "أثر قدم".

ب يتغيّر التركيز من ال [دن-بيندينغ] بروتين ، الانجذاب ملزمة من البروتين يستطيع كنت قدّمت وفقا ل التركيز أدنى بروتين في أيّ أثر قدم يكون لاحظت.

 

[دنس] [فووتبرينتينغ] مصد وصفات

[دنس] [فووتبرينتينغ] ملزمة مصد وصفة

[2إكس] [و/و] [ككل]/ل [10ملس]:

مبلغة: [[فينل]]
[تريس-هكل] [ف7.6]: 500 [أول] من [1م]: 50 [مّ]
[مغكل2]: [125ول] من [1م]: [12.5مّ]
[إدتا]: 2 [أول] من [0.5م]: [1مّ]
سكرولات: 2 [ملس]: 20%
[دتّ]: 10 [أول] من [1م]: 1 [مّ]

مصد ملزمة (هلام تغير مصد)

[5إكس] [و/و] بوكل
[[فينل]]: عنصر
20%: [جلرول]
[5مّ]: [مغكل2]
[2.5مّ]: [إدتا]
[2.5مّ]: [دتّ]
[250مّ]: [نكل]
[50مّ]: [تريس-هكل] ، [ف] 7.5
[0.25مغ/مل]: مبلمرة ([دي-دك]) مبلمرة ([دي-دك])

[ك/مغ] مصد

ل [10ملس]
[ككل2]: 50 [أول] من [1م]: 5 [مّ]
[مغكل2]: 100 [أول] من [1م]: 10 [مّ]

تحميل حل
0.1 [م]: [نوه]: [فورمميد] (1: 2 [ف/ف])
0.1%: زيلول [سنول]
0.1%: [بروموفنول] اللون الأزرق

توقّفت مصد
[10ملس]
[نكل]: 400 [أول] من [5م]: 200 [مّ]
[إدتا]: 600 [أول] من [0.5م]: 30 [مّ]
[سدس]: 1 [مل] 10%:1%

[تب] ([تريس-دت-بتا] [مركب].)
[تريس-هكل] ، [ف] 7.6:500 [أول] من 1 [م]: 50 [مّ]
[إدتا]: [2ول] من 0.5 [م]: 1 [مّ]
[بت-مركبتوثنول]: 10 [أول]: [15مّ]

10 [إكس] [ك] مصد
ل 1 [مل]
[تريس-هكل] [ف] 7.5:100 [أول] من 1 [م]: 100 [مّ]
[مغكل2]: 100 [أول] من 1 [م]: [100مّ]
[دتّ]: 50 [أول] من [1م]: 50 [مّ]
[ده2و]: 750 [أول]

[دنس] [فووتبرينتينغ] بروتوكول

يحتوي ال [دنا] يستعمل عادة ال [بيندينغ ست] من بروتينك الفائدة. صفّيت ال [دنا] ، بعد ذلك هضمت مع حصر [فرغمنتس] أن يكون من [أبّوبريت] حجم. ال [دنا] علمت جزء على واحدة نهاية ([بيندينغ ست]>25 [بب] من نهاية).

واحدة طاق يعلم يستطيع كنت [أكّومبليسد] جانبا:

1. يعزل الجزء مع حصر أنزيم يحتوي 5 ' نتوء ، يعلم مع [كلنوو] وال [نوكليوتيد] مناسبة حارّة. بعد ذلك ملخص مع أنزيم أنّ يزيل واحدة نهاية.
2. سيعلم يعزل جزء يهضم مع حصر أنزيم أنّ يخلق 5 ' و3 ' أنهيت ، يعلم مع [كلنوو] فقط ال 5 ' نتوء.
3. بما أنّ في "[ا]" غير أنّ مع أيّ أنزيم ويستعمل [بولنوكليوتيد] مؤنزمة أن يعلم 3 ' نهاية (مؤنزمة) ويهضم من واحدة من النهايات مع ثاني (ثالثة) حصر أنزيم.
   (مذكر: أضفت إن يعلم مع [كلنوو] ، في النهاية الردّ فعل تجاوز من [نوكليوتيد] باردة من ال نفسه [نوكليوتيد] أنّ يكون علمت ([إي.] إن أنت تستعمل [دكتب32] ، أضفت [دكتب] في النهاية) أن يتأكّد كلّ نهايات يكون ملأت داخل بالتّساوي.

ل [كلنوو] [فرغمنتس] ، يحضر [0.3وغ] [أوب تو] 100 [أول] في [ت] ، حرارة قتل [كلنوو] في 68 [ك] ل 10 دقائق.

يعلم مع واحدة 5 ' نتوء

عينة [رإكسن]: 15 [نغ] حاجة ل كلّ ردّ فعل. إن يجعل تحقيق ل كثير ردّ فعل صحيحة زيادة مبلغة ال [دنا] حتّى 300 [نغس].
[15نغ]: [دنا] جزء
2 [أول]: [10إكس] [ك] مصد
5 [أول]: [32ب] [دكتب] 3.33 [أوم] 10 [أوس/ول]
2 [أول]: [2مّ] @ [دا] ، [دغ] [دتّب]
1 [أول]: [كلنوو]
20 [أول] حجم نهائيّة ، [37ك] 30 [مين.].
--أضفت 1 [أول] [10مّ] [دنتب] ، 5 [مين] @ [37ك.].

--أضفت 80 [أول] [ت]. وضع [68ك] 15 دقائق ، فوق جليد.
--[غ-50] تدويم عمود (تدويم في حوالي [2000غ])
--أضفت 1/10 [فول] [3م] [ن0ك] ، 2.5 حجوم [إتوه] ، ثلّجت 30 [مين] ، (اختياريّة إن [[دنا]] يكون=أو>3 [نغ/ول] أنت أمكن عيّنت [غ-50] مباشرة) [ميكروفوج] 30 دقائق.
--غسلت مع 70%
--جافّة أحضرت فوق في [5ول]

ردّ فعل ملزمة ل [دنس] [فووتبرينتينغ]

ردّ فعل ملزمة سوفت يتلقّى بين 10 [150مّ] [ككل] (يقلّد كثير ملح يقيّد غير أنّ زيادات نوعية). التركيز نموذجيّة [50مّ].

بروتين [دنا] التصاق:
25 [أول] من [2إكس] مصد ملزمة [و/و] [ككل]
[أونيلبلد] [5ول] من 3 [نغ/ول] [دنا]
[إكس] [أول] من [ككل] أن يساوي 10-150 [مّ] [ككل]
[بروتين] [ده20] إلى كفؤ 50 [أول] إلّا حجم لالتصاق
1-3 [فووتبرينتينغ] وحدات من [دنا] بروتين ملزمة (أو 10 [تو] 160 [أوغ] من مقتطف خام نوويّة)

--يثلّج مزيج بلطف ، 10 دقائق.

كتيف دعم توقيت في عقل ،
--أضفت 50 [أول] من [رت] [ك/مغ] حل ، [18ك] ل 1 دقيقة.
--أضفت 3 [أول] محلولة [رق1] [دنس] (0.05 [أو/ول] يخفّف في [تريس]) يحضن 1 دقيقة.
--توقّفت إضافة من 90 مع [37ك] موقف حلول ،

--أنت سوفت فينول: وكالة المخابرات الأمريكيّة ، ووكالة المخابرات الأمريكيّة مقتطف ، وإيثانول راسب.
--علقت في [4ول] من تحميل حل.
--اعتبرت ركضت على 5% [أور-دنا] معياريّة يسلسل هلام (إسفين هلام) مع [أبّوبريت] تحميل دروب مثل [دنا] سلم ، [دنا] غير مختصر ، وتحكمات.

حللت [فووتبرينتينغ] أسلوب.

يتحرّى ومشاكل ؟ رأيت ال [دنس] [فووتبرينتينغ] ساحة!

عيّنت لمشاكل ويتحرّى [دنس] [فووتبرينتينغ] ، خيط سنّ اللولب جديدة أن يتناقش هو في ال [دنا] [فووتبرينتينغ] ساحة!

أخرى [دنا] بروتوكولات وطرق

[دنا] استنساخ مرشدة

[دنا] هلام إستشراد

حصر أنزيم هضم - كلّ أنت تحتاج أن يعرف!

[جنوميك] [دنا] عمليّة عزل بروتوكول

[بستريا] [دنا] عمليّة عزل

يحتوي [دنا] تحويل - تاريخ ال [دنا]

وجدت أخرى بروتوكولات في نا [دنا] بروتوكولات خارجيّة موردة دليل أو يرى نا [دنا] بروتوكولات.

متّصلة:

[دنا] [ميكروأرّي] بروتوكولات

[بكر] بروتوكولات

 

[دنا] [بيوينفورمتيكس]

زيارة [دنا] [بيوينفورمتيكس].

 

أخبار [دن-رلتد]

[دنا] أخبار