[بيوينفورمتيكس] ، بروتوكولات ، [دنا] [رنا] بروتين [بروتيوميكس]

بيتيّة>[دنا]>[كدن-كلونينغ]>[إيندإكس.فب]

[كدنا] استنساخ

علمت حول [كدنا] استنساخ.

[كدنا] استنساخ

[كدنا] (قصيرة ل [دنا] [كمبلمنتري] أو نسخة [دنا]) [دنا] نسخة من [رنا] ، عادة [مرنا]. أحيانا يريد نحن أن يجعل [كدنا] مكتبة ، مجموعة من يستنسخ [ربرنسنتينغ] [أس مني] بما أنّ يمكن من ال [مرنس] في يعطى خلية نوع [أت ا جفن تيم]. هذا مكتبات يستطيع احتويت [تن] الآلاف من مختلفة يستنسخ. أخرى أوقات ، يريد نحن أن يجعل واحدة خاصّة [كدن-] [أكلون] يحتوي [دنا] نسخة من فقط واحدة [مرنا]. يعتمد هذا تقنية نحن نستعمل في جزء على أيّ من هذا أهداف نحن نتمنّى أن يحقّق.

[كدنا] مكتبات

إن نحن نريد أن يبني [كدنا] مكتبة ، نحن يستطيع استعملت بسيطة غير أنّ إستراتيجية فعّالة أنّ يعتمد على معامل يدعى شقّ ترجمة. الجوهر من شقّ ترجمة الإزالة متزامنة [دنا] أمام شقّ ([سنغل-سترندد] [دنا] كسر) وتأليف ال [دنا] خلف الشقّ. ترجمت ال [نت رسولت] أن يتحرّك ، أو الشقّ في ال 5 ' - 3 ' اتّجاه. الأنزيم نحن عادة نستعمل الشقّ ترجمة [إ.كلي] [دنا] [بولمرس] [إي] ، أيّ يتلقّى 5 ' - 3 ' [إإكسونوكلس] نشاط أنّ يسمح الأنزيم أن يحقّر [دنا] أمام الشقّ بما أنّ هو يتحرّك جانبا.

الجزء مركزي أيّ [كدنا] استنساخ إجراء تأليف من ال [كدنا] من [مرنا] طبعة يستعمل [ترنسكريبتس] عكسيّة. [ترنسكريبتس] عكسيّة مثل أيّ أخرى [دن-سنثسزينغ] أنزيم أنّ هو يستطيع لا يبدأ [دنا] تأليف دون كبسولة تفجير. أن يحصل حول هذا مشكلة ، يستفيد نحن المبلمرة ([ا]) ذيل في ال 3 ' - نهاية من كثير [مرنس] [إيوكروتيك] ويستعمل [أليغو] ([دت]) كالكبسولة تفجير. ال [أليغو] ([دت]) متمّمة إلى مبلمرة ([ا]) ، لذلك هو يقيّد إلى المبلمرة ([ا]) في ال 3 ' - نهاية من ال [مرنا] ويشحن [دنا] تأليف ، يستعمل ال [مرنا] كطبعة.

عقب نسخت ال [مرنا] يتلقّى يكون ، ينتج [سنغل-سترندد] [دنا] (ال "طاق أولى") ، نحن جزئيّا نحقّر ال [مرنا] مع [ريبونوكلس] [ه] ([رنس] [ه]). يحقّر هذا أنزيم ال [رنا] طاق من [رن/دنا] [هبريد-] فقط ماذا نحن نحتاج أن يبدأ أن يهضم ال [رنا] من نا أولى طاق [كدنا]. المتبقّي [رنا] يخدم [فرغمنتس] بما أنّ كبسولة تفجير ل يجعل ال "ثاني طاق ،" يستعمل الأولى كالطبعة. هذا ال [نيك-ترنسلأيشن] طور من العملية وثانية ، [إ.] [كلي] [دنا] [بولمرس] [إي] الأنزيم نحن نستعمل أن يوفي ال [نيك-ترنسلأيشن] ردّ فعل. ال [نت رسولت] [كدنا] [دووبل-سترندد] مع جزء صغيرة [رنا] في ال 5 ' - نهاية من الثاني طاق.
مهمتنا تالية أن يربط ال [كدنا] إلى متجهة. هذا كان يتيح مع قطعاتنا من [دنا] [جنوميك] [كلفد] مع حصر أنزيمات ، غير أنّ يتلقّى [كدنس] ما من نهايات لزجة. نحن يستطيع ربطت نهايات بليدة معا ، [إفن ثوو] أنّ يكون عملية غيرفعّال نسبيّا. دعا مهما ، إن نحن نريد العمليّة ربط فعّالة يمكن بنهايات لزجة ، نحن يستطيع ثبتت نهايات لزجة ([أليغو] [[دك]]) على ال [كدنا] ، يستعمل أنزيم طرفيّة [ديوإكسنوكليوتيدل] [ترنسفرس] ([تدت]) أو [ترنسفرس] طرفيّة ببساطة وواحدة من ال [ديوإكسريبونوكليوسد] فوسفات ثلاثيّ. في الحالة ، يستعمل نحن [دكتب]. يضيف الأنزيم [دكمبس] ، [أن ت ا تيم] ، إلى ال 3 ' - نهايات من ال [كدنا]. [إين ث سم وي] ، يربط نحن [أليغو] ([دغ]) نهايات إلى متجهتنا ويسمح ال [أليغو] ([دك]) [س] أن يلدّن إلى ال [أليغو] ([دغ]) [س.]. هذا يحضر المتجهة و [كدنا] معا في [دنا] [ركمبيننت] أنّ يستطيع كنت استعملت مباشرة لتحويل. الحقيرة يقرن بين ال [أليغنوكليوتيد] ذيول قوّيّة بكفاية أنّ ما من تطلّبت عمليّة ربط قبل تحويل. ال [دنا] ينجز أنزيم رابط في ال يغيّر خلايا أخيرا العمليّة ربط.

رأيت ال [دنا] جزيء في [3-ديمنسونس]