[دنا] استنساخ

يستنسخ ملحقة داخل [بلسميد]

[دنا] استنساخ بروتوكول

احتجت أن يستنسخ أنت التالي:

[فكتور] [دنا] أو ك [بلسميد] بني

متجهة [دنا] يستطيع كنت:
متجهة أو [بلسميد] [دنا] (أيّ يحتاج أن يكون

احتجت أن يستنسخ أنت على الأقلّ عدّة ميكروغرام (3-5 أو أكثر) من ك متجهة [دنا].

أدخلت [دنا] ([دنا] أنت تريد أن يدخل داخل ال [بلسميد] أو متجهة)

ملحقة [دنا] يستطيع كنت:
[أليغنوكليوتيد] ملحقة ([أليغس] مع حصر قطعة [هلف-ستس] يلدّن و [فوسفورلتد] مع [بنك])
حصر أنزيم يولد ملحقة
[بكر] ملحقة ([بكر] مع حصر أنزيم قطعة موقعات (الموقعة كاملة لازمة!) في ال 5' نهاية من الكبسولة تفجير)

إن الملحقة أنت تريد أن يستنسخ يكون بعض من 60 [بب] ، أنت يستطيع أمرت [أليغنوكليوتيد] ولدّنتهم معا.

إن ك ملحقة [دنا] حجم يكون صغيرة (أقلّ من 1000 [بب]) ، يحتاج أنت لا نظريّا مثل كثير [دنا] بما أنّ متجهتك. إن ك ملحقة [دنا] حجم يكون بالغ الصّغر (10-200 [بب]) ، يحتاج أنت جدّا بعض من هذا [دنا] نظريّا.

في جنرال أنت سوفت يتلقّى على الأقلّ 1 ميكروغرام من يبدأ ملحقة [دنا].

يعدّ متجهة [دنا] لاستنساخ: [ميني-برب] ، [ميدي-برب] ، [مإكسي-برب]

نحن أسّسنا أنّ ال يتيح يستعمل طريق أن يعدّ [دنا] [ميني-برب] عدة ([قيجن]). نحن نستعمل عدّة أعمدة ل ال نفسه متجهة [دنا] بني. 

ل كلّ عمود يضيف نحن حوالي 4 [مل] من [لب] ينمى جراثيم (نحن نضيف 2 [مل] من [لب] جراثيم مرق إلى 2 [مل] [إبّندورف] أنابيب ويفتل مرّتين=2[إكس]2 [مل]=4 [مل])

طرف: دائما نمات حوالي 5 [مل] من باوند في 15 [مل] باز أنابيب ، يحافظ ال 1 [مل] بما أنّ سكرولات جراثيم يخزنون مجمّدة في ال - 80 [ك] مجلد.

كيف أن سيضطرّ يجعل سكرولات مخزون جرثوميّة ل ال - 80 [ك] مجلد أيّ سيحافظ لسنون (أنت أبدا خطّطت لوحات أو جعلت يتأهّل خلايا ثانية! - ينقذ أنت وقت)

ببساطة أضفت 50% سكرولات إلى حالت نموّك جرثوميّة [لب]. هذا لا يضطرّ كنت [إي] دقيقة إن أنت يكون تركت مع حوالي 1 [مل] من [لب] جرثوميّة يضيف حوالي 500 [أول] من 100% سكرولات ويجمّد في ال - 80 [ك.].

لا يحتوي بعد يستخلص كلّ عمود مع حوالي 50 [أول] من [إب] (تصفية تتابعيّة مصد ، [قيجن] ، [تريس] مصد - [إدتا]) ، نحن نشارك الغسالة تذويب مثل هذا أنّ نحن نتلقّى حوالي 200 [أول] إلى 400 [أول] (أو 4 - 8 أعمدة لكلّ بني أو متجهة). هذا يعطي بما فيه الكفاية يبدأ متجهة [دنا] لاستنساخ.

بطاقة: نحن أسّسنا أنّ يمنع ال [إدتا] في [ت] لاحقة حصر هضم من ال يستخلص [دنا] من [ميني-برب] وأخرى [بلسميد] تطهير عدد.

يعدّ ملحقة [دنا] لاستنساخ

أدخلت [دنا] ينبغي كنت

حصر أنزيم هضم وعمليّت قطعك [بلسميد] متجهة ل [دنا] استنساخ

[بلسميد] قطعت متجهة عادة.

عمليّة ربط من ملحقة ومتجهة

استعملت أن يربط ملحقة أن [فكتور] ، 200 [نغ] من متجهة كمرشدة (الناس يستعملون مثل بعض بما أنّ 50 [نغ] - [ن.ب] دليل استخدام).

أدخلت [نغ]      =       متجهة [نغ]               
أدخلت حجم            [فكتور] حجم

لذلك أن يربط 500 [بب] ملحقة داخل 5000 [بب] متجهة أنت احتجت

أدخلت [نغ]      =       200 [نغ] [إكس]   500                         
                             5000

أدخلت [نغ]      =      20 احتاج [نغ] من ملحقة ل 1: 1 عمليّة ربط

لملحقة 3:  1 متجهة عمليّة ربط أنت احتجت: 60 [نغ]

عمليّة ربط

[إكس] [أول]    [دنا] متجهة 200 [نغ]
[ي] [أول]     أدخلت (يحسب [نغ])
2 [أول] 10 [إكس] مصد
1 [أول] [ت4] [دنا] أنزيم رابط [نب]
 إلى 20 [أول]     [ه20]
--------
20 [أول]   مجموعة

لقطة 5 يضيف [أول] من عمليّة ربط وإلى 100 [أول] من [ده] 5 ألفا خلايا [إينفيتروجن]
([سوبكلونينغ] فعالية [أك] ، واحدة يقذف على نحو أفضل ، فعالية [مإكس] على أحسن وجه - ل يستعصي عمليّة ربط غير أنّ غالية).

حرارة صدمة
أضفت 250 [أول] من [سك] إلى يتأهّل خلايا

صفّيت مبلغة كاملة على لوحة.

نمات [أفرنيت] في 37 [ك]