خلية [ترنسفكأيشن]

[ترنسفكأيشن] يصف التقديم ال [فورين متريل] داخل خلايا [إيوكروتيك] يستعمل حمى متجهة أو أخرى [منس] الإنتقال.

العبارة [ترنسفكأيشن] لطرق [نون-فيرل] أكثر [أفتن وسد] في مرجع إلى [ممّلين سلّ] ، بينما العبارة تحويل يكون فضّلت أن يصف [نون-فيرل] [دنا] إنتقال في جراثيم و [نون-نيمل] خلايا [إيوكروتيك] مثل فطر ، طحالب ومعامل.

يتضمّن [ترنسفكأيشن] من خلايا حيوانيّة بشكل خاصّ يفتح مؤقّتة سم أو "فتحة بئر" في الخلية مصل دمّ غشاء ، أن يسمح المأخذ المادة. [سوبركيلد] مادة وراثيّة (مثل [بلسميد] [دنا] أو [سرنا] بني) ، [أر فن] بروتينات مثل أجسام ، يمكن كنت [ترنسفكتد]. [إين دّيأيشن تو] [إلكتروبورأيشن] ، [ترنسفكأيشن] يستطيع كنت وفيت ب يمزج دهن موجب أيون مع المادة أن ينتج شحيمات ، أيّ يصهر مع الخلية مصل دمّ غشاء ويرسّب شحنهم داخلا.

كان المعنى أصليّة [ترنسفكأيشن] "تلوث بتحويل" ، [إي.] تقديم من [دنا] (أو [رنا]) من [إيوكروت] حمى أو ملتهم جراثيم داخل خلايا ، [رسولتينغ ين] تلوث. لأنّ العبارة تحويل تلقّى آخر إحساس في حيوانيّة خلية علم الأحياء (تغير وراثيّة يسمح انتشار طويل الأجل في ثقافة ، أو اكتساب الخاصية نموذجيّة من [كنسر سلّ]) ، العبارة اكتسب [ترنسفكأيشن] ، لخلايا حيوانيّة ، معنىه حاضرة من تغير في خلية خاصية يسبّب بإدخال [دنا].

[ترنسفكأيشن] طريقة ب أيّ [دنا] تجريبيّة يمكن كنت وضعت داخل يستنبت [ممّلين سلّ]. أنجزت هذا تجارب عادة يستعمل يستنسخ [دنا] يحتوي [كدينغ سقونس] ويضبط مناطق (مادّة حفّازة ، [إتك]) [إين وردر تو] اختبرت ما إذا ال [دنا] كنت عبّر عن. بما أنّ ال يستنسخ [دنا] يمكن يتلقّى يكون بشكل واسع عدّدت (مثلا ، بروتين [بيندينغ ست] على المادّة حفّازة يمكن يتلقّى يكون غيّرت أو أزلت) ، [ترنسفكأيشن] [أفتن وسد] أن يختبر ما إذا يأثر تعديل خاصّة العمل من مورثة.

[ترنسفكأيشن] رسم بيانيّ:

[ترنسفكأيشن] تطبيقات

يصطنع القدرة أن [رنا] في المختبرة حرجة إلى كثير تقنيات. [رديولبلد] و [نون-رديولبلد] [رنا] تطلّبت تحقيقات ل كثير بروتوكولات ، وهم يستطيع كنت اصطنعت بسهولة في مقياس صغيرة [إين فيترو] نسخة تسجيل ردّ فعل يسمح إستعمالهم في لطخة تهجين و [نوكلس] حماية فحوصات.

• متجهة أو [دنا]
• خلايا
• [ترنسفكأيشن] كاشف

يتطلّب نسخة تسجيل [إين فيترو] يصفّى خطيّة [دنا] طبعة يحتوي مادّة حفّازة ، [ريبونوكليوتيد] فوسفات ثلاثيّ ، مصد نظام أنّ يتضمّن [دتّ] ومادّة مغنسيوم

يتطلّب نسخة تسجيل [إين فيترو] يصفّى خطيّة [دنا] طبعة يحتوي مادّة حفّازة ، [ريبونوكليوتيد] فوسفات ثلاثيّ ، مصد نظام أنّ يتضمّن [دتّ] ومادّة مغنسيوم

[ترنسفكأيشن] طرق

هناك طرق مختلفة من يقدّم [دنا] أجنبيّة داخل خلية [إيوكروتيك]. استعملت كثير [متريلس] يتلقّى يكون كشركة نقل جويّ ل [ترنسفكأيشن] ، أيّ يستطيع كنت قسمت داخل ثلاثة أنواع: (موجب أيون) بوليمر ، شحيمات و [ننوبرتيكلس].

رأيت واحدة من الرخيصة (والأقلّ موثوقة) طرق [ترنسفكأيشن] ب [كلسوم فوسفت] ، أصلا يكتشف ب [ف.] [ل.] غراهام و [أ.] [ج.] [فن] [در] [إب] في 1973 [دعوة قضائيّة يحتاج] (أيضا [1]). ضممت [هبس-بوفّرد] حل ملحيّة ([هبس]) يحتوي فسفات أيونات مع [كلسوم كوريد] حل يحتوي ال [دنا] أن يكون [ترنسفكتد]. عندما ضممت الاثنان ، راسب دقيقة من ال إيجابيّا يحمّل كالسيوم وال سلبيّا يحمّل فسفات سيشكّل ، يقيّد ال [دنا] أن يكون [ترنسفكتد] على سطحه. أضفت التعليق من الراسب بعد ذلك إلى الخلايا أن يكون [ترنسفكتد] (عادة خلية ثقافة ينمى في غشاء أحاديّ جزيء). بعملية لا كلّيّا يفهم ، يقصّر الخلايا بعض من الراسب ، ومع هو ، ال [دنا].

أخرى يستعمل طرق مركبات [هيغلي برنشد] عضويّة ، [دندريمرس] ما يسمّى ، أن يقيّد ال [دنا] وحصلت هو داخل الخلية. طريقة فعّالة جدّا التضمن من ال [دنا] أن يكون [ترنسفكتد] في شحيمات ، [إي.] صغيرة ، [ممبرن-بووندد] أجسام أنّ يكون [إين سم وس] مماثلة إلى البنية من خلية ويستطيع واقعيّا صهرت مع الخلية غشاء ، يطلق ال [دنا] داخل الخلية. لخلايا [إيوكروتيك] ، استعملت [ليبيد-كأيشن] يؤسّس [ترنسفكأيشن] أكثر بشكل خاصّ ، لأنّ الخلايا يكونون أكثر حسّاسة.

آخر طريقة الإستعمال من بوليمر موجب أيون مثل [د-دإكسترن] أو [بولثلنيمين]. ال سلبيّا يقيّد يحمّل [دنا] إلى ال [بولكأيشن] والمركبة قصّرت بالخلية عن طريق [إندوستوسس].

مقاربة مباشرة إلى [ترنسفكأيشن] المورثة مسدّس مدفع ، حيث ال [دنا] يكون زوّجت إلى [ننوبرتيكل] من مادّة صلبة ساكنة (عادة نوع ذهب) أيّ يكون بعد ذلك "قذفت" مباشرة داخل الهدف خلية نواة. [دنا] يستطيع أيضا كنت قدّمت داخل خلايا يستعمل حميات كشركة نقل جويّ. [إين سوش كسس] ، دعات التقنية [ترنسدوكأيشن] فيروسيّة ، و, الخلايا [ب سي تو ب] [ترنسدوس].

أخرى يتضمّن طرق ال [ترنسفكأيشن] [نوكليوفكأيشن] ، [إلكتروبورأيشن] ، حرارة صدمة ، [منتوفكأيشن] ومالكة [ترنسفكأيشن] كاشف مثل [ليبوفكتمين] ، [دوجيندو] [هيلمإكس] ، [فوجن] ، [جتبي] ، [إفّكتن] أو [درمفكت].

إصطبل [فس] مؤقّتة [ترنسفكأيشن] طرق

ل كثير تطبيقات ال [ترنسفكأيشن] ، هو كاف إن ال [ترنسفكتد] مورثة يكون فقط [ترنسنتلي] عبّر عن. بما أنّ ال [دنا] يقدّم في ال [ترنسفكأيشن] عملية يكون عادة لا يدخل داخل الجينات نوويّة ، خسرت ال [دنا] أجنبيّة في المرحلة متأخّرة عندما الخلايا يتحمّلون [ميتوسس]. [ترنسفكتد] إن هو يكون ب رغب أنّ المورثة واقعيّا يبقى في الجينات من الخلية وه ابنة خلايا ، [ترنسفكأيشن] ثابتة ينبغي وقعت.

أن ينجز هذا ، آخر مورثة [ك-ترنسفكتد] ، أيّ يعطي الخلية بعض إنتقاء ميزة ، مثل مقاومة نحو سمينة مؤكّدة. [ترنسفكتد] بعض (جدّا قليل) من الخلايا ، [بي شنس] ، يتلقّى سيدخل المادة أجنبيّة وراثيّة داخل جيناتهم. إن السمينة ، نحو أيّ ال [ك-ترنسفكتد] مورثة يقدّم مقاومة ، يكون بعد ذلك أضفت إلى الخلية ثقافة ، إلاّ أنّ أنّ سيكون قليل من خلايا مع المورثات أجنبيّة يدخل داخل جيناتهم يمكن أن يتكاثر ، بينما آخر خلايا سيموتون. بعد يطبّق هذا إنتقاء ضغطة ل بعض وقت ، فقط يبقى الخلايا مع [ترنسفكأيشن] ثابتة ويستطيع كنت زرعت أبعد.

عاملة عاديّة ل [ترنسفكأيشن] ثابتة [جنتيسن] ، أيضا يعرف ك [غ418] ، أيّ يكون سمينة أنّ يستطيع كنت حايدت بالمنتوج من ال [نيومسن] مورثة مقاومة.

يتطلّب نسخة تسجيل [إين فيترو] يصفّى خطيّة [دنا] طبعة يحتوي مادّة حفّازة ، [ريبونوكليوتيد] فوسفات ثلاثيّ ، مصد نظام أنّ يتضمّن [دتّ] ومادّة مغنسيوم

أطراف ل [ترنسفكأيشن]

• استعملت [رنس] صادّ دائما!
• توفير مال مع [ت7] [رنا] [بولمرس] [فج]: يستنسخ مع [ن-ترمينل] [هيس-6] بطاقة يتوفّر. إن أنت تنال هذا أنسوخ ، أنت يستطيع صفّيت مبلغات كبيرة من [ت7] [بولمرس] مع [هي كتيفيتي] (مرجع: هو [ب] ، [رونغ] [م] ، [لكهوف] [د] ، [غرتنستين] [ه] ، [ديز] [غ] ، [كستنا] [ر] ، [مكلّيستر] [وت] ، [دوربين] [رك]. بروتين [إإكسبر] [بوريف]. 1997 ، 9 ، 142-151).
• استعملت أن يزيل ال [دنا] طبعة ، [دنس] [رنس-فر]. نحن قد استعملنا [رق1] [دنس] ([برومغ]) يضاف ل 15 دقائق ويعمل هو جيّدا. 

يخزّن [ترسفكأيشن] كاشف

• خزّنت [رنا] على أحسن وجه في [ف] محايدة مع [إدتا].
• [ت] أوصيت مصد (10 [مّ] [تريس-هكل] ، [ف] 7.5 ، 1 [مّ] [إدتا]) ، ولكن هذا سوفت كنت أعدّت مع [رنس] مجّانا يصفّى ([برفربلّي] [ميلّيبور] ماء).

يتحرّى [ترنسفكأيشن] مشاكل

[فيلد] [ترنسفكأيشنس]

• قديمة [ترنسفكأيشن] كاشف
• مناسبا يخزّن [ترنسفكأيشن] عاملة
• [بوور قوليتي] [دنا] أو متجهة
• غير كاف [دنا] مبلغة
• غير كاف [ترنسفكأيشن] كاشف
• [توو موش] [دنا]
• [توو موش] [ترنسفكأيشن] كاشف

مراجع على [ترنسفكأيشن]

مراجع على [ترنسفكأيشن]

1. [بكّهتّي] [س] ، غراهام [ف] (1977). "إنتقال من المورثة ل [ثميدين] مؤنزمة إلى [ثميدين] خلايا [كينس-دفيسنت] إنسانيّة ب يصفّى حلأ [دنا] مفردة فيروسيّة". [بروك] [نتل] [أكد] [سكي] [أو.س.] 74 (4): 1590-4. [بميد] 193108.