[بيوينفورمتيكس] ، بروتوكولات ، [دنا] [رنا] بروتين [بروتيوميكس]

بيتيّة>علم نبات>[بروتوبلست-يسلأيشن-بروتوكل]>[إيندإكس.فب]

[بروتوبلست] عمليّة عزل بروتوكول

تحضير من أيضيّا يتأهّل [بروتوبلست]

 

[سجي] [منون] و [فيبها] [تج]
[بيرلا] معهد من بحث علميّة ، تمثال دائرة ، جايبور (راجستان) ، هند

 

[متريلس] يتطلّب ل [بروتوبلست] عمليّة عزل

• 70% إيثانول
• 0.1% كلوريد زئبقيّة
• [0.5م] مانيتول

 

• أنزيم حل:
• 1% أنزيم خلويّ 0.25% [مسروزم] [ر-10]
• 27.2 [مغ/ل] [كه2بو4]
• 101 [مغ/ل] [نو3]
• 1480 [مغ/ل] [ككل2.2ه2و]
• 246 [مغ/ل] [مغس4.7ه2و]
• [0.5م] مانيتول ([ف] 5.6)

 

• خلية [بروتوبلست] يغسل وسط:
• [0.5م] مانيتول ([ف] 5.6)
• 27.2 [مغ/ل] [كه2بو4]
• 101 [مغ/ل] [نو3]
• 1480 [مغ/ل] [ككل2.2ه2و]
• 246 [مغ/ل] [مغس4.7ه2و]

• يعّدّل [بروتوبلست] [كلتثر مديوم]       

(عدّلت طاولة أدناه)

 

بروتوكول للتحضير من أيضيّا يتأهّل [بروتوبلست]

• لقطة أوراق طازجة من 4-5 أسبوع قديمة بالتّطهير ينمو معامل.
• سطح يطهّر في 70% إيثانول يتبع ب يعامل مع 0.1% كلوريد زئبقيّة ل 1 دقيقة.
• غسلت الأوراق تماما مع [ديستيلّد وتر] عقيمة.
• قشرت البشرة [لوور] من الورقة نسيج ووضعت هو في [0.5م] مانيتول حل لواحدة ساعة في [بتريبلت].
• أزلت المانيتول حل واستبدلت هو مع [فيلتر-ستريليزد] أنزيم حل.
• حضنت اللوحات في ظلام ل 16-20 ساعات في [25وك].
• فصلت ال [بروتوبلست] طبقة بترشيح يستعمل [0.45م] نيلون غشاء.
• طردت الرشاح في [1000غ] ل 10 دقائق في 4 [أك].
• أزلت المادّة طافية وعلقت الكريّة طينيّة في خلية [بروتوبلست] يغسل وسط.
• طردت في [1000غ] ل 10 دقائق.
• كرّرت خطوة 9 مرّتين.
• أخيرا علقت ال [بروتوبلست] كريّة طينيّة في كثافة ال 1*105 [مل/ل] في ال يعّدّل [بروتوبلست] [كلتثر مديوم].
• صفّيت ال [بروتوبلست] بما أنّ بشكل جيّد [ثين لر] في [بتريبلتس].
• حضنت اللوحات في 25 [أك] في ظلام.

 

يعّدّل [بروتوبلست] [كلتثر مديوم]

[س.نو].	مكونات	مبلغة
[ا]	[مينرل سلت]
1	[أمّونيوم نيترت]	82.5 [غم/ل]
2	بوتاسيوم نترات	95.0 [غم/ل]
3	[بوريك سد]	1190 [مغ/ل]
4	بوتاسيوم [ديهدروجن فوسفت]	34 [مغ/ل]
5	بوتاسيوم يوديد	166 [مغ/ل]
6	صوديوم موليبد	250 [مغ/ل]
7	كوبلت كلوريد [ديهدرت]	25.0 [مغ/ل]
8	[كلسوم كوريد] [ديهدرت]	88.0 [غم/ل]
9	مادّة مغنسيوم [سولفت] [هبتهدرت]	74.0 [غم/ل]
10	منغنيز [سولفت] [تترهدرت]	4460 [مغ/ل]
11	زنك [سولفت] [هبتهدرت]	1720 [مغ/ل]
12	[كبّر سولفت] ماءات خماسيّة	25.0 [مغ/ل]
13	أثلين ثنائيّ مين [تترا] [أستيك سد] ملح ثان صوديوم	7.45 [غم/ل]
14	[فرّووس سولفت] [هبتهدرت]	5.57 [غم/ل]
[ب]	[سوغرس]
1	سكروز	30.0 [غم/ل]
2	ريبوز	0.5 [غم/ل]
3	[منّوس]	0.5 [غم/ل]
4	[سربيتول]	0.5 [غم/ل]
[ك]	[أرغنيك سد]
1	صوديوم [بروفت]	5.0 [مغ/ل]
2	[ستريك سد]	10.0 [مغ/ل]
3	[مليك سد]	10.0 [مغ/ل]
[د]	حيمينات
1	ثيمين هيدروكلوريد	100 [مغ/ل]
2	[نيكتينميد]	500 [مغ/ل]
3	[بريدوإكسين] هيدروكلوريد	500 [مغ/ل]
4	كالسيوم بانتوثينات	250 [مغ/ل]
5	بيوتين	100 [مغ/ل]
6	[أسكربيك سد]	75.0 [مغ/ل]
7	ريبوفلافين	50.0 [مغ/ل]
8	إينوسيتول	100 [غم/ل]
[إ]	هرمونات
1	[2,4-ديكورو] [فنوإكسي] [أستيك سد] ([2,4-د])	0.5 [مغ/ل]
2	[بورين] [بنزل] أمينيّة ([بب])	1.0 [مغ/ل]