كفلت/أعلنت & اقترنت إلى نا & اتّصل بنا & حول نا & ساعدتنا

علم الأحياء جزيئيّة [بلوغ]

أخيرة ساحة موقعات

 

[بولكلونل] أجسام

جميعا حول [بولكلونل] أجسام.

[بولكلونل] جسم موردات متّصلة خارجيّة - بروتوكولات:

• لطخة غربيّة
• [إيمّونوبلوت]
• ترسّب مناعيّ ([إيب])
• خلق الأجسام يستعمل هضميدات

أيضا زيارة جسم محطة لأكثر على [بولكلونل] أجسام. هو موقعة جديدة أيّ يعدّد جسم ممونات ، يعلم حول أجسام ، وبروتوكولات.

[بولكلونل] جسم بروتوكولات:

• يمنّع فيران
• مصل تحضير من دم
• أرنبة تحصين
• أرنبة نزيف إجراء
• ينال مصل
• أمونيوم كبريتات ترسيب [إيغّ] من مصل
• تحصين
• [إليسا] بروتوكول ل [بولكلونل] جسم غربلة

[بولكلونل] جسم

 

[بولكلونل] أجسام أجسام يستنتج من كثير [ب-سلّس] أو [ب-سلّ] خطوط ، مماثلة إلى الخليط الأجسام يؤسّس في [بلوود سروم].

[بولكلونل] أجسام لذلك خليط من كثير مختلفة جسم نوعيات.

[بولكلونل] جسم تحضيرات يشترى خلطاء الأجسام من كثير نوعيات مختلفة إلى ال نفسه مولدة.

ينتج تحصين من أرنبة ، فأرة ، معزة ، دجاجة ، أو أخرى حيوان [بولكلونل] أجسام. أمصلة حيوانيّة يستطيع كنت استعملت مباشرة ، ولكن هو جيّدة أن ييصفّي [بولكلونل] أجسام لمختبرة إستعمال.

[بولكلونل] جسم تحضير

يؤسّس على البروتوكول ب [در.] دايفيد [بووتلّ]

تحصين الفيران:

حقن أن يمنّع فيران للجيل من [بولكلونل] أجسام سوفت كنت جعلت في فاصلات من على الأقلّ اثنان أسابيع منفردة.

التالي 2 قد كان [أدجوفنت] ناجحة:

• [فريوند] [أدجوفنت] و [مبلتدم] [أدجوفنت] ([ريبي] [إيمّونوشم] [رسرش] ، [إينك.]). [مبل] أقلّ خطرة من ال [أدجوفنت] أولى.

1. للأولى تحصين حقنة: حقنت 15 - 50 [أوغ] إن مولدة في 200 [أول] [أدجوفنت] ، يحقن تحت الجلد.
2. الثاني حقنة سوفت وقعت 2 أسابيع فيما بعد ؛ أنت ينبغي بعد ذلك عزّزت مع 15 - 50 [أوغ] من مولدة في [أدجوفنت]. عزّزت (إن وقت يسمح ، ثانية شهر فيما بعد).
3. سبعة [تو] 10 أيام ينزف فيما بعد الفأرة وإختبار مصل يستعمل الفحص أيّ كنت سيستعمل لغربلة. إن [تيتر] ليس عاليا بكفاية ، ضغط معزّز ثانية اثنان أسابيع بعد ضغط معزّز سابقة.

أعلى

مصل تحضير:

1. بعد يجمع ، دم سوفت كنت سمحت أن يتخثّر ل 60 [مين.] في [37ك] أو [أ.ن] في [4ك.].
2. فصلت الجلطة من الجوانب من الأنابيب (يخابر) يستعمل [بستيور] ماصّة. وضعت جلطة في [4ك] [أ.ن.].
3. فتلت في 10000 [إكس] [غ] ل 10 [مين.] في [4ك] أن يفصل المصل.
4. مصل يستطيع كنت خزّنت في [-20ك] بعد يضيف سكرولات إلى 50%.

إن [مونوكلونل] ب رغب أجسام ، ما إن أنت تتلقّى "جيّدة" [بولكلونل] و[سكرينينغ مثود] موثوقة باشرت إلى الخطوة تالية.

أعلى

أرانب:

أرانب منّعت أساسا بما أنّ يوصف أعلاه. حقن:

1. أولى في [فريوند] كاملة [100-200وغ/1مل] حقنة ، اثنان موقعات (على كلّ كتف).
2. ثانية 1 شهر فيما بعد في [فريوند] ناقصة بما أنّ أعلاه.
3. نزف 2 أسابيع فيما بعد. ضغط معزّز 2 أسابيع فيما بعد ثانية (2+2 أسبوع دورة).

أعلى

 

إنتاج من [بولكلونل] أجسام في أرانب ([نيوسلند] أبيض)

يؤسّس على البروتوكول ب [در.ولتر] [ستفّن].

الأرانب سوفت كنت 3-4 [كغ] في وزن وحوالي 3 [مونث ولد]. تلقّيت حول ثالثة من الأرنبة داخليّ منشأ [أنتي-كرتين] أجسام و [إيمّونوأكتيفيتي] لعناصر [فريووس وثر] خلويّة. هذا يؤكّد الأهمية من يأخذ مصل [بر-يمّون] من أيّ يعطى أرنبة.

مصدات وحلول:

• يشبع أمونيوم كبريتات حل ، 2 [مّ] [إدتا] ، [ف] 8.0
• 50 [مّ] أمونيوم [أستت] ، [ف] 8.0
• 70% إيثانول
• [فريوند] [أدجوفنت] (كاملة & ناقصة)
• يرى [فوسفت بوفّرد] ملحيّة ([ببس]) (أدناه)
• فازلين
• زيلول

أعلى

• أحضرت الأرنبة من قفصه ووضعت هو بأمان في يقيّد صندوق يترك الأذن يتيسّر. حافظت الأرنبة نسبيّا هدوء. حجوم الدم [أوب تو] 50 [مل] يستطيع بسهولة كنت جمعت من الشريان رئيسيّة يركض نزولا إلى المركز من السطح ظهريّة من الأذن.
• حلقت أذن يسرى حول عرق يسرى مع [رزور بلد] طازجة.
• نظّفت أذن مع 70% إيثانول أو إيزوبروبانول.
• نظّفت أذن مع زيلول حول [أرتر-فين] أنشوطة أن يتّسع.
• أمسكت الطرف من الأذن (بشدّة) والتجميع أنابيب في واحدة يد ومع الحرّة يد ملحقة [19غ] إبرة تحجلديّة داخل ال يتّسع شريان. الدم سوفت بدأت أن يتدفّق فورا داخل التجميع أنابيب. استعملت لنتيجات جيّدة جزء الشريان [ميد-وي] على طول الأذن.
• جمعت [أوب تو] 50 [مل] دم. طبّقت ضغطة فقط أماميّة إلى نقطة المدخل الإبرة إلى موقف نزيف.
• طبّقت فازلين إلى أذن أن يليّن زيلول إثارة.
• وضعت فازلين إضافيّة على قطعة.

ينال مصل:

أعلى

• [سويرل تثب] مع يجمع دم أن يكسو سطح وأن يمنع جلطة ملحق إلى أنابيب.
• حضنت في 37 [أك] ل 1 ساعة.
• طردت في 2.500 [غ] (يثبت #7 في [تبل توب] سريريّة) ل 10 [مين.].
• أزلت جلطة وفتلت مصل في 3.000 [غ] ل 10 [مين.].
• مصل سوفت كنت خزّنت يجمّد.

أمونيوم كبريتات ترسيب [إيغّ] من مصل (4 [أك] ، يوفى في [كلد رووم]):

أمونيوم كبريتات ترسيب يتيح طريقة أن ينال صافية [إيغّ] كسر تماما.

أعلى

• بركة مصل من واحدة أرنبة
• وزن مصل
[و1]=_____ [غ]
• غسلت أنابيب مع [ببس] [مين.] ووزنت ثانية.
[و2]=_____ [غ]
• أضفت 2/3 حجم من [و2] يشبع أمونيوم كبريتات ، 2 [مّ] [إدتا] ، [ف] 8.0
بطاقة: أضفت جدّا ببطء ، بالتّقطير بينما يحرّك في 4 [أك] أو استعملت مضخة تمعّجيّة.
• حرّكت ل 15 [مين.].
• إنتقال إلى 40 [مل] [سنتريفوج تثب] ؛ غسل كأس مع 3 أجزاء [ببس]: 2 جزء أمونيوم يضيف كبريتات وإلى أنابيب.
• تدويم في 12.000 [غ] ([بكمن] [ج-20]: 10.000 [ربم]) ل 10 [مين.].
• نبذت مادّة طافية.
• علقت كريّة طينيّة في [ببس] [1/2 [و1]=1/2 [فول.]].
• فتلت في 12.000 [غ] ل 10 [مين] ، نبذت كريّة طينيّة.
• جمعت مادّة طافية في كأس ، غسل جدر مع [ببس].
حدثت [و3]=_____
• أضفت 2/3 [فول.] [و3] يشبع أمونيوم كبريتات ، بينما يحرّك. استمرّت يحرّك ل 15 [مين.].
• نقلت تعليق إلى 40 [مل] [سنتريفوج تثب] ، غسل أنابيب مع [ببس/مّونيوم] كبريتات حل.
• فتلت في 12.000 [غ] ل 10 [مين.].
• نبذت مادّة طافية.
• علقت كريّة طينيّة في 1/4 [و1] [ببس].
• ديلزت ضدّ [ببس] ، 3 في 6 ساعات لكلّ واحد.
• وضعت مصل في أنابيب متخرّجة ، عمليّة شطف ديلزة حقيبة جيّدا مع [ببس].
• أحضرت [أوب تو] 1/2 [و1]=1/2 [فول.] في [ببس].
• حدثت بروتين تركيز وقاسمة لتخزين. قست الامتصاص في 280 [نم]. الامتصاص من 1 [مغ/مل] [إيغّ] حل تقريبا 1.5.

تحصين:

أعلى

• ذوّبت ~400-600 [غ] مولدة (~200-300 [غ] لكلّ حقنة) في 2.2 [مل] 50 [مّ] أمونيوم [أستت] ، [ف] 8.0 أو أخرى مناسبة مصد. تركيز يعتمد على توليد البروتين أن يكون حقنت.
• يعتمد المبلغة المولدة يحتاج أن يمنّع حيوان على هو توليد والطريقة التحصين. إن بروتينات مع توليد منخفضة يكون استعملت ، سيكون هو مفيدة أن يشوّه البروتين مع تركيز منخفضة [سدس] ([أوب تو] 0.2%). فقط جدّا يصفّى مولدة سوفت كنت استعملت للإنتاج من [بولكلونل] أجسام. يتيح طريقة أن ينال مولدة صافية ب [سدس-بج]. فتّشت بروتينات يستطيع كنت [ترنسفرّد] إلى صفح ال [نيتروسلّولوس] ، لطّخت مع [بونسو] [س] ، [كت ووت] مع [رزور بلد] ، واستعملت كمولدة (بروتوكولات معياريّة في [سدس-بج]).
• نصصت [1.1.مل] [فريوند] [أدجوفنت] كاملة مع [20غ] إبرة تحجلديّة ، بعد ذلك نصصت 1.1 [مل] من مولدة حل. جمّدت متبقّي 1.1 [مل] لضغط معزّز.
• أزلت يحافظ الغطاس جامدة ، الإبرة وربطت عقيمة 3 طريق محبس.
• مزجت المولدة مع ال [أدجوفنت] ب يربط ثاني محقنة زجاجيّة إلى المحبس ويحقن [بك ند فورث]. (تحذير: بعض محاقن بلاستيكيّة أمكن تجاوبت مع ال [مينرل ويل].)
• سيشكّل مستحلب كاملة كنت بعد حوالي 20-30 [مين] ؛ يشير بزيادة فجائيّ بالأحرى في لزوجة من الحل.

تحذير: يوقن أنّ القاعدة يؤمّن!
• بعد يمزج إنتظار حوالي 20 [مين] قبل حقنة إلى تحكم أنّ خليط كاملة (إن ناقصة ، سيفصل زيت).
• حلقت إلى الخلف من أرنبة من كتف نصال إلى حوض.
• نظّفت إلى الخلف مع 70% إيثانول أو إيزوبروبانول
• حقنت تحت الجلد داخل حوالي 10-20 جوانب على طول العمود فقريّ بين كتف نصل وحوض يستعمل [21غ] إبرة تحجلديّة. (بطاقة: حقنة أولى واحدة أسبوع بعد متأخّرة [بريمّون] نزيف).
• انتظرت واحدة شهر وعزّزت مع خليط من مولدة و [أدجوفنت] ناقصة. تفاديت شطوب من حقنة سابقة.
• نزفت بعد واحدة أسبوع أن يفحص ل [إيمّون-رسبونس]. الضغط معزّز سوفت كنت كرّست ، إن [إيمّون رسبونس] كان أيضا ضعيفة ؛ مهما ، أرنبة مختلفة سوفت كنت اخترت ، إن أرنبة لم يتجاوب في كلّ. /LI>

مراجع: [غرفي] ، [ج.س.] ، [كرمر] ، [ن.] ، & [سوسّدورف] ، [د.ه]. (1977) في: طرق في علم مناعة. حانة. [بنجمين/كمّينغس] [بوبليشينغ] [كمبني]. قراءات كتلة. [بّ] 545

أعلى

غربلة من [بولكلونل] جسم يستعمل [إليسا] فحص

[إليسا] بروتوكول لجسم شاشة:

[متريلس] ل [إليسا]:

° لوحات - 96 بئر [دنتش] [إيمّولون] ، نوع 2. (صيّاد سمك 17-0221-199).

° [ببس] ، [تبس]

° [ببس]+0.1% [توين] 20 أو [تبس]+0.1% [توين] 20.

° يسدّ حل=2% [بسا] (نوع [ف]) في [ببس]. (أضفت 0.02% أزيد ل [لونغ ستورج].)

° [إليسا] مصد=2% [بسا]+0.1% [توين] 20 في [ببس] (أزيد اختياريّة).

° أنزيم يقترن جسم=فجل خيل [بروإكسيدس] 1

° طبقة سفليّة=[أبتس] - [100إكس] (من [زمد] 00-2001) 1

° [هرب] مصد: [100مّ] [نا] ليمونات [ف] 4.2 (490 [مغ] [ستريك سد]+720 [مغ] [نا] ليمونات

[ديهدرت]+50 [مل] [ه2و] ، [ف] 4.2).

° [هدروجن بروإكسيد] 30% ([1000إكس])

أعلى

[إليسا] بروتوكول ل [بولكلونل] جسم

1) [أدسربأيشن] من مولدة

[ا]) [أغ] محلولة إلى 10 [أوغ/مل] في [ببس].

أضفت [ب]) 100 [أول] من [أغ] حل إلى كلّ جيّدا.

تركت [ك]) [أ.ن] يغطّى مع [سرن] لفاف ، في [4ك.].

2) يسدّ

[ا]) غسل ينشّف [أغ] [أونبووند] ب يعكس اللوحات وينقر البئار.

[ب]) عمليّة شطف ب يضيف [ببس] إلى كلّ بئر ويعكس هو ثانية (يبخّ إستعمال زجاجة).

كرّست [ك]) العمليّة شطف مرّتين.

أضفت [د]) 100 [أول] من يسدّ حل إلى كلّ جيّدا ، تركت 1 [هر] في [رووم تمب] أو [أ.ن] في [4ك.].

3) جسم أوّليّة

أضفت [ا]) الجسم أن يكون اختبرت:

يمزج [سوب] من خلايا=25 [أول] ، جيّدا ب [بيبتينغ] [أوب ند دوون] (10 أوقات).

مصل ، [أسكيت]=1:100 و[سري] من 1/5 تخفيفات. أتمّت تخفيفات في يسدّ حل.

تركت [ب]) 1 [هر] في [رووم تمب] أو [أ.ن] في [4ك.].

4) جسم ثانويّة

[ا]) غسل جسم [أونبووند] 4 أوقات مع [ببس]+0.1% [توين] 20.

أضفت [ب]) 100 [أول] من أنزيم يقترن جسم إلى كلّ بئار. أتمّت التخفيفات مناسبة في [إليسا] مصد. (سابقة: [هرب] [2000إكس]).

تركت [ك]) 1 [هر] في [رووم تمب] أو [أ.ن] في [4ك.].

5) طبقة سفليّة

[ا]) [ديسلف] طبقة سفليّة في ماء.

[ب]) غسل لوحة 4 أوقات مع [ببس]+0.1% [توين] 20 (إستعمال [تبس] [إينستد وف] [ببس] ل [أب]).

أضفت [ك]) 100 [أول] من طبقة سفليّة إلى كلّ بئر.

راقبت [د]) لون تطوير. هذا استطاع أخذت من [ا فو] ثانية إلى 20 [مين.].

توقّفت [إ]) إن يحتاج ، الردّ فعل ب يضيف 50 [أول] من [4م] [نوه].

قرأت [ف]) امتصاص في [إليسا] قارئة في يصحّ طول موجة (ل [هرب] نظامة 416 [نم] ، ل [أب] - 405 [نم]).

أعلى

أخرى جسم موقعات

رأيت جسم محطة موقعة جديدة أيّ يغطّي أجسام ، جسم ممونات ، وأخرى معلومة [أنتيبود-رلتد].

وجدت أخرى جسم ويرتبط [مونوكلونل] جسم مواضيع هنا: